乙型肝炎病毒前-S2蛋白结合蛋白基因S2-29的克隆化研究

目的:筛选人肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白(Pre-S2)相互作用的蛋白,探寻HBV致病机制。方法:用多聚酶链反应(PCR)技术扩增HBV前-S2基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,用营养缺陷型培养基及蓝白斑双重筛选阳性菌落,提取酵母质粒转化大肠杆菌并测序,进行生物信息学分析。逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法从HepG2细胞的mRNA中扩增出完整的新基因S2-29,连入另一酵母表达载体pGADT7,并用免疫共沉淀方法再次证实二者间的相互作用。结果:成功克隆出HBV前-S2基因并在酵母细胞中表达,配合后筛选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-His-Ade)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上生长并变成蓝色的真阳性菌落26个,其中有1个未知基因S2-29,该基因能在HepG2细胞中表达,免疫共沉淀方法证实二者在体外也有结合作用。结论:成功克隆出与乙型肝炎病毒前-S2蛋白相结合的新基因,为进一步研究HBV前-S2的作用提供了新线索。

GATA结合蛋白3、性别决定相关基因簇2在三阴性乳腺癌中的表达及预后关系

目的探讨GATA结合蛋白3(GATA3)、性别决定相关基因簇2(SOX2)在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中表达及预后关系。方法收集新疆肿瘤医院140例TNBC和癌旁组织标本,通过免疫组化法染色检测GATA3和SOX2在TNBC中的表达水平,分析GATA3及SOX2在TNBC中的表达特点、临床病理特征及预后的关系。结果GATA3在TNBC及癌旁组织中的表达率为(82.86%、98.00%),SOX2在TNBC及癌旁组织中的表达率分别为(56.43%、5.00%),二者差异均有统计学意义(P<0.05)。GATA3阳性表达与TNBC患者低组织学分级及淋巴结转移有关(P<0.05),SOX2阳性表达与TNBC患者出现低组织学分级、Ki-67增殖表达具有明显相关性(P<0.05)。GATA3阳性表达及SOX2阳性表达者5年无病生存率分别为78.35%(91/116)、62.02%(49/79),差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNBC中GATA3阳性率明显低于癌旁组织,SOX2阳性率高于癌旁组织。GATA3缺失表达及SOX2过表达是乳腺癌患者预后差的免疫组化指标,有望成为乳腺癌患者预后评估的重要依据。

扩张型心肌病心衰患者血骨膜蛋白、可溶性生长刺激表达基因2蛋白及N端脑钠肽前体水平的临床意义

目的:探讨扩张型心肌病心衰患者血清骨膜蛋白(POSTN)、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)及N端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平的临床意义。方法:选取2022年11月至2023年4月在东海县人民医院心内科住院的扩张型心肌病(DCM)心衰患者60例作为DCM组,同时选择在该院体检正常者55例作为对照组。检测比较两组血清POSTN、sST2及NT-proBNP水平。结果:DCM组的血清POSTN、sST2及NT-proBNP水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:POSTN、sST2及NT-proBNP水平与DCM心衰密切相关,上述指标可用于辅助判断相关治疗效果及预后。

胰岛素样生长因子2结合蛋白2基因多态性与妊娠期糖尿病的关系

目的分析胰岛素样生长因子2结合蛋白2(IGF2BP2)基因多态性与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法选择GDM患者84例为GDM组,另选取同期健康孕妇84例为对照组,收集两组一般资料。实时聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法检测IGF2BP2基因rs4402960位点、rs1470579位点和rs11705701位点的多态性。结果GDM组总胆固醇、空腹血糖和空腹胰岛素高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,GDM组IGF2BP2基因rs4402960位点GG基因型较少,TT基因型较多,等位基因T频率较高,等位基因G频率较低(P<0.05);rs11705701位点等位基因A频率较低,等位基因G频率较高(P<0.05);而其他基因型和基因频率两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论IGF2BP2基因多态性与GDM发生有关,可通过基因多态性结果评估和筛选GDM高风险人群,以提高对GDM控制。

N-端脑利钠肽前体/可溶性生长刺激表达基因2蛋白联合检测试剂盒的临床性能评价

目的评价N-端脑利钠肽前体(NT-proBNP)/可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)联合检测试剂盒的临床性能。方法选取广西中医药大学第一附属医院2023年4—9月收治的130例患者的血清样本,采用巴迪泰(广西)生物科技有限公司生产的NT-proBNP/ST2联合检测试剂盒检测样本的NT-proBNP和ST2水平,分别与罗氏NT-proBNP检测试剂盒、CriticalDiagnostics PresageST2检测试剂盒的检测结果进行相关性和一致性比较(相关性比较采用线性回归分析法,一致性比较采用Bland-Altman Plot分析法)。结果线性回归分析结果显示,联合检测试剂盒NT-proBNP检测结果与罗氏NT-proBNP检测试剂盒检测结果的相关系数R=0.9951,ST2检测结果与Critical Diagnostics Presage ST2检测试剂盒检测结果的相关系数R=0.9958;将联合检测试剂盒与单一检测试剂盒检测NT-proBNP、ST2结果的平均值作为横坐标,差值作为纵坐标,绘制Bland-Altman Plot分析图进行一致性分析,结果显示,两项指标分别有95.38%(124/130)、94.62%(123/130)的值位于范围内。结论NT-proBNP/ST2联合检测试剂盒与单一检测试剂盒检测NT-proBNP和ST2的相关性好、一致性高,可满足临床检测要求。

RNA结合蛋白HuR调控lncRNA DLEU2促进食管鳞癌细胞增殖、侵袭的机制

目的探讨RNA结合蛋白人抗原(Hu)R对食管鳞癌细胞增殖、侵袭的影响及其与长链非编码RNA(lncRNA)淋巴细胞白血病缺失基因(DLEU)2的调控关系。方法收集食管鳞癌组织样本并在体外培养正常人食管鳞状上皮细胞Het-1A及食管鳞癌细胞系KYSE30、KYSE70、KYSE270,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测HuR mRNA与DLEU2表达水平。利用Lipofectamime2000试剂对KYSE30细胞进行转染,并随机分组为对照组、pcDNA组、pc-HuR组、sh-NC组、sh-HuR组、sh-HuR+si-NC组和sh-HuR+si-DLEU2组。CCK-8法检测各组KYSE30细胞活性;平板克隆形成实验检测各组KYSE30细胞增殖能力;荷瘤裸鼠实验观察体内肿瘤生长情况;Transwell小室检测各组KYSE30细胞侵袭能力;Western印迹检测各组KYSE30细胞中HuR蛋白表达水平;RNA免疫沉淀(RIP)实验分析HuR与DLEU2的结合关系。结果在食管鳞癌组织和细胞系中,HuR mRNA和蛋白表达及DLEU2水平均显著升高(P<0.05),其中KYSE30细胞系中HuR基因与DLEU2表达水平最高,故选择KYSE30细胞进行转染实验。转染pc-HuR的细胞中HuR蛋白表达明显上调,细胞活性、克隆形成率及细胞侵袭数均显著增加(P<0.05);转染sh-HuR的细胞中HuR蛋白表达明显下调,细胞活性、克隆形成率及细胞侵袭数均显著降低(P<0.05)。RIP实验和qRT-PCR检测发现HuR与DLEU2有相互作用关系。同时转染sh-HuR和si-DLEU2的细胞中DLEU2水平明显降低,细胞活性、克隆形成率及细胞侵袭数均比转染sh-HuR明显更低(P<0.05)。过表达HuR显著增加移植瘤体积和重量,抑制HuR明显减小移植瘤的体积和重量,而同时抑制HuR和DLEU2时移植瘤的体积和重量比单独抑制HuR时明显更小(P<0.05)。结论HuR通过与DLEU2结合,促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭和移植瘤的体内生长。

应用表达谱芯片技术对乙型肝炎病毒前-S2抗原结合蛋白S2-29反式调节基因的研究

目的:应用基因表达谱芯片技术,研究未知功能的乙型肝炎病毒(HBV)前-S2(preS2)抗原肝细胞结合蛋白基因S2-29 过表达,对HepG2细胞的基因表达的影响. 方法:应用酵母双杂交技术筛选并验证HBV前-S2的肝细胞结合蛋白基因.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从HepG2细胞中扩增S2-29蛋白编码基因片段,经测序鉴定后构建表达载体pcDNA3.1(-)-S2-29,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-S2-29转染的人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞和转染空载体的相同细胞的差异表达mRNA 进行检测和分析. 结果:筛选出肝文库中HBV前-S2结合蛋白S2-29的编码基因,构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定正确.提取转染细胞的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1152个基因表达谱的筛选中,发现有9个基因表达水平显著下调,包括真核翻译延伸因子2、MAP激酶激活的死亡域、谷胱甘肽过氧化物酶、肌动蛋白、NDRG、Prosaposin、SUMO-1激活酶亚基1、胰岛素受体和1个未知功能蛋白.1个未知蛋白编码基因的表达上调. 结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV前-S2结合蛋白S2—29蛋白的反式调节基因,为进一步阐明S2—29蛋白对细胞表达调控的影响提供了新的依据.

草鱼TAB2与TAK1蛋白互作鉴定及其对两种抗菌肽基因表达的影响

为了探究草鱼TAB2(Ci TAB2)与Ci TAK1能否互作及其对2种草鱼抗菌肽基因(Cihepcidin与Ciβ-defensin1)表达的影响,实验首先采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析拟态弧菌感染后Citab2和Citak1在草鱼免疫相关组织中的时空表达模式。然后利用荧光共定位、免疫共沉淀及Western blot技术鉴定Ci TAB2与Ci TAK1在细胞内共定位及相互作用情况。最后将过表达质粒pEGFP-N1-Citak1与pEGFP-N1-Citab2共同转染草鱼肾细胞(CIK细胞),检测Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平。结果显示,拟态弧菌感染能够显著改变Citab2和Citak1的相对表达水平,前者于感染后不同时间在各检测组织中表现出不同的时空表达模式,而后者均呈现先上调后下调的表达模式;荧光显微镜下观察到Ci TAB2与Ci TAK1共定位于转染后的HEK293T和CIK细胞的胞质中,且在HEK293T细胞内能够形成Ci TAB2-Ci TAK1蛋白复合物;共同过表达Ci TAB2与Ci TAK1后,CIK细胞内Cihepcidin与Ciβ-defensin1的相对mRNA表达水平在各检测时间点均显著上调。结果表明,Ci TAB2与Ci TAK1存在互作关系且二者互作能够促进上述两种抗菌肽的转录表达。本研究从蛋白互作调控抗菌肽表达的角度为防治鱼类弧菌病提供了新策略。

采用MS2 pulldown和质谱分析法检测BT549细胞中的LncRNA SNHG15结合蛋白

目的:鉴定乳腺癌BT549细胞中与长链非编码RNA SNHG15结合的蛋白。方法:用慢病毒感染乳腺癌BT549细胞,构建稳定过表达SNHG15的BT549-SNHG15-MS2细胞株。通过MS2 pulldown和质谱分析法,检测BT549细胞中与SNHG15结合的蛋白。随后采用RNA免疫共沉淀(RIP)和逆转录-定量PCR(RT-qPCR)法,以HEAD框肽5(DEAD box helicases 5,DDX5)为模板验证共沉淀蛋白和SNHG15的结合。结果:经MS2 pulldown和质谱分析筛选出386个潜在的SNHG15结合蛋白。RNA免疫沉淀结合RT-qPCR检测结果证实DDX5与SNHG15的结合。结论:本研究介绍了一种有效分析RNA-蛋白质相互作用的生物学方法,同时为深入研究SNHG15的作用机制提供了新的实验证据。

肝细胞cDNA文库中乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合蛋白基因筛选

目的:筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白相互作用蛋白的基因,探讨前-前- S在HBV致病中的作用. 方法:构建前-前-S的酵母细胞表达载体,采用酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析. 结果:获得了54个与前-前-S蛋白特异性结合的阳性克隆,其中包括30种已知蛋白基因和8个未知功能基因. 结论:克隆出与乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合的肝细胞蛋白基因,为进一步研究前-前-S在HBV致病中的作用奠定了基础.

血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白、N末端脑钠肽前体、神经酰胺风险评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值

目的探讨血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、神经酰胺风险(CERT)评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭(CHF)患者预后的评估价值。方法回顾性分析2020年7月至2021年7月于徐州医科大学附属医院收治住院治疗的304例老年慢性心力衰竭患者的临床资料。随访1年,根据随访期间是否发生不良心血管事件(MACE)将患者分为MACE组(76例)和非MACE组(228例)。比较2组患者血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱的差异。采用SPSS 25.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验、秩和检验或χ^(2)检验进行组间比较。采用Spearman相关分析左心室射血分数(LVEF)与sST2、NT-proBNP、CERT评分等指标的相关性。采用logistic回归分析MACE的影响因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值。结果sST2、NT-proBNP、CERT评分与LVEF呈负相关(r=-0.241,-0.193,-0.183;P<0.05)。与非MACE组比较,MACE组患者sST2、NT-proBNP、CERT评分、衰弱比例更高,LVEF值更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、NT-proBNP水平、CERT评分、衰弱对CHF患者预后不良的预测的曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.713、0.636、0.658,四项联合预测AUC为0.800。结论血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱是老年CHF患者发生MACE的重要影响因素,具有较高的预后预测价值,且联合预测价值更高。

乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合蛋白新基因PPSBP9的克隆化

目的:研究乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合蛋白新基因PPSBP9的克隆化. 方法:构建前-前-S的酵母细胞表达载体,采用酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析.发现其中有1个未知功能的新基因.根据GenBank中的序列信息设计引物, 以HepG2细胞系cDNA文库为模板,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长编码序列,并经测序证实,命名该新基因为PPSBP9并在GenBank中注册, 注册号为AY553877. 结果:PPSBP9基因的编码序列全长为840个核苷酸(nt),编码产物由279个氨基酸残基(aa)组成.经核苷酸序列数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt)同源序列的搜寻,与已知基因序列和蛋白序列之间没有显著同源性. 结论:筛选并成功的克隆了乙型肝炎病毒前-前-S蛋白与肝细胞cDNA文库中结合蛋白新基因PPSBP9,为进一步研究HBV前-前-S及其肝细胞结合蛋白新基因在HBV致病中的作用奠定了基础.

乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2基因的克隆化研究

目的 :应用抑制性消减杂交 (SSH )技术及生物信息学 (bioinformatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)前 S1蛋白 (pre S1)反式激活新型靶基因 ,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制。方法 :以HBV前 S1蛋白表达质粒 pcDNA3 1( -) pre S1转染HepG2细胞 ,以空载体 pcDNA3 1( -)为平行对照 ,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析。并应用分子生物学技术 ,结合生物信息学技术 ,克隆HBV前 S1反式激活作用的新的靶基因。结果 :对于所获基因片段序列分析表明 ,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列 ,并测序证实 ,因其可以被前 S1蛋白反式激活 ,故命名为前 S1反式激活蛋白 2 (PS1TP2 ) ,已在GenBank中注册 ,注册号 :AY42 6673。PS1TP2基因的编码序列全长为 5 73个核苷酸 (nt) ,编码产物由 190个氨基酸残基 (aa)组成。结论 :HBV前 S1蛋白在HBV进入宿主细胞的过程中起着重要作用 ,最近的研究表明前 S1蛋白还具有反式激活的作用 ,上调宿主细胞某些基因的表达 ,从而改变宿主正常的免疫应答水平 ,引起病变。HBV前 S1反式激活新靶基因的发现 ,为进一步研究HBV前

应用基因表达谱芯片技术筛选HBV前-S2蛋白反式调节基因

目的:乙型肝炎病毒(HBV)前-S2蛋白是由HBV S基因编码的具有多种功能的蛋白质.前-S2蛋白的表达对于HBV感染肝细胞的基因表达谱具有显著影响.为了研究前-S2蛋白反式调节的靶基因,我们应用基因芯片技术对于pcDNA3.1 (-)和pcDNA3.1(-)-preS2分别转染的HepG2细胞的基因表达谱进行分析. 方法:以含有HBV全基因组的质粒G376-7(GenBank号: AF384371)作为模板,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增前-S2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术构建表达载体pcDNA3.1(-)-preS2.以脂质体技术转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较. 结果:构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA事列测定,证实准确无误,提取高质量的总mRNA并进行逆转录成为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1 152个基因表达谱的筛选中,发现有42个基因表达水平显著上调,36个基因表达水平显著下调. 结论:HBV的前-S2蛋白是一种反式激活因子,前-S2基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响.

噬菌体展示技术筛选HBV前-前-S抗原基因启动子结合蛋白基因

目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白. 方法:应用噬菌体表面展示技术,以HBV前-前-S抗原基因启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,并对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析. 结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的43个克隆中得到20 个与HBV前-前-S抗原基因启动子特异结合的阳性克隆, 包括人类SMG-1的磷脂酰肌醇3相关激酶激酶、28 S核糖体、单倍型As2A线粒体、组氨酰-tRNA合成酶、脂肪醛脱氢酶、桥粒相关蛋白、MAX相互作用蛋白1等17个已知功能基因及3个未知功能基因. 结论:用噬菌体人肝细胞cDNA文库筛选得到HBV前-前- S抗原基因启动子的结合蛋白基因,为进一步研究HBV发病机制创造了新的途径.

血清血管紧张素2和生长刺激表达基因2蛋白及末端脑利钠肽前体表达水平与扩张型心肌病患者预后的相关性分析

目的探究血清血管紧张素2(Ang2)、生长刺激表达基因2蛋白(ST2)及末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)表达水平与扩张型心肌病(DCM)患者预后的相关性。方法选取2015年3月至2019年3月于本院接受治疗的90例DCM患者作为研究组,另选取同期40名健康体检者作为对照组,比较两组Ang2、ST2、NT-proBNP表达水平。对研究组随访15个月,按照随访结果分为死亡组(n=13)、再入院组(n=28)和无再发事件组(n=49),比较3组Ang2、ST2、NT-proBNP表达水平,评估Ang2、ST2、NT-proBNP水平对DCM患者预后评估的灵敏度、特异度和一致性。采用ROC分析3种因子对DCM患者预后的临床意义。结果研究组血清Ang2、ST2、NT-proBNP水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组、再入院组血清Ang2、ST2、NT-proBNP水平均高于无再发事件组,且死亡组高于再入院组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ang2评估预后一致性为0.86,灵敏度为90.24%,特异度为81.63%;ST2评估预后一致性为0.81,灵敏度为82.93%,特异度为79.59%;NT-proBNP评估预后一致性为0.84,灵敏度为87.80%,特异度为81.63%。血清Ang2、ST2、NT-proBNP均对扩张型心肌病患者预后具有较好的预测价值(P<0.05)。结论血清Ang2、ST2、NT-proBNP表达水平与DCM患者的预后密切相关,在心脏事件再发的评估中具有较高的临床价值,值得临床推广应用。

血清Ⅲ型前胶原氨基端肽及可溶性生长刺激表达基因2蛋白在慢性稳定性心力衰竭与急性失代偿性心力衰竭患者中的临床意义

目的探讨慢性稳定性心力衰竭与急性失代偿性心力衰竭患者的血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)及可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)表达差异及其对患者预后的预测效能。方法选取廊坊市中医医院收治的慢性心力衰竭(CHF)患者320例,其中急性失代偿性心力衰竭患者(失代偿组)108例,慢性稳定性心力衰竭患者(稳定组)212例,比较两组血清PⅢNP、sST2等指标。随访6个月,记录患者的不良预后事件发生情况,根据随访结果分为预后良好组117例和预后不良组203例,分析血清PⅢNP、sST2对患者不良预后事件的预测效能。结果失代偿组的PⅢNP、sST2、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平均显著高于稳定组,左心室射血分数(LVEF)水平显著低于稳定组(t=14.621、8.065、23.958、10.497,P<0.05)。失代偿组及稳定组患者PⅢNP、sST2与心率、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ评分、NYHA心功能分级、收缩压、舒张压、NT-proBNP均呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05)。失代偿组预后不良率明显高于稳定组(χ^(2)=27.822,P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组患者的PⅢNP、sST2、NT-proBNP及左心室舒张末期内径水平均明显更高,LVEF水平明显更低(t=8.426、5.905、15.105、9.201、10.348,P<0.05)。ROC曲线显示PⅢNP、sST2的AUC分别为0.810、0.785,敏感度分别为78.2%和77.5%,特异度分别为80.3%和67.3%。结论慢性稳定性心力衰竭与急性失代偿性心力衰竭患者的血清PⅢNP、sST2表达差异显著,PⅢNP、sST2对CHF患者预后不良有一定的预测价值。

HBV前-S1蛋白结合蛋白大鼠同源基因的克隆化

目的:利用生物信息学(bioinformatics)技术克隆,鉴定人HBsAg前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)编码基因的同源基因. 方法:人PS1BP由表达型cDNA文库的噬菌体展示技术筛选获得.以人的PS1BP的cDNA序列作为参照,对于美国国立卫生研究院(MH)国立医学图书馆(NLM)生物工程信息学研究中心(NCBI)建立的核苷酸序列数据库GenBank,利用同源基因序列比对的在线分析软件BLASTn进行同源基因序列的比对,发现新的来源于大鼠的同源基因.确定大鼠PS1BP的cDNA序列之后,对于大鼠PSIBP蛋白质一级结构序列与人和小鼠的PS1BP蛋白质一级结构序列的同源性进行分析.利用在线分析软件,对于大鼠PS1BP一级结构序列中潜在的修饰和功能位点进行初步的预测分析. 结果:利用噬菌体展示技术获得了人的PS1BP的cDNA序列.以生物信息学技术确定了大鼠PS1BP的cDNA及其编码产物的序列.大鼠PS1BP的cDNA由1455 nt组成,编码产物由484 aa组成.大鼠PS1BP蛋白质一级结构与人和小鼠PS1BP蛋白质一级结构的同源性分别为80.79%(391/484)和92.98%(450/484).利用在线分析软件,在大鼠PS1BP蛋白质一级结构中还发现了一系列潜在的蛋白质修饰结构位点.

微小RNA-155和血清β2微球蛋白检测在血液透析患者并发心血管疾病中的诊断价值

目的:探究血液透析患者中微小RNA-155(miRNA-155)和血清β2微球蛋白的表达与心血管疾病风险的相关性。方法:选择100例血液透析患者中患有心血管疾病的患者为试验组,100例血液透析患者中无心血管疾病的患者为对照组。采取血液透析患者一定量的静脉血样,检测患者血清中可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、肌钙蛋白T(TNT)与血清氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)。对所有研究对象的心血管疾病进行评估。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测血清中的miRNA-155的水平,采用速率散射比浊法检测血清β2微球蛋白水平。结果:试验组的年龄、糖尿病史的比例、开始透析的平均年龄、TNT平均水平、NT-proBNP平均水平与sST2平均水平高于对照组(均P<0.05)。同时,对照组的平均透析时间要高于试验组(P<0.05)。试验组血清中的miRNA-155含量明显低于对照组血清中的miRNA-155的含量(P<0.05),同时血清miRNA-155表达水平与TNT、NT-proBNP、sST2的水平呈现负相关性(均P<0.05)。试验组血清中的β2微球蛋白含量明显高于对照组血清中的β2微球蛋白的含量(P<0.05),同时血清β2微球蛋白水平与TNT、NT-proBNP、sST2的水平呈现正相关性(均P<0.05)。ROC曲线分析显示血清miRNA-155与β2微球蛋白诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.912(95%CI:0.798~0.985)与0.842(95%CI:0.793~0.972)。结论:sST2、TNTNT-proBNP可以有效地对血液透析患者的心血管疾病作出诊断,同时患有心血管疾病的血液透析患者血清中miRNA-155表达水平较低,血清β2微球蛋白的表达水平较高;因此miRNA-155与血清β2微球蛋白在预测血液透析患者并发心血管疾病时具有较高价值。

结直肠癌组织中ARID1A基因突变和MSH2蛋白表达与临床病理特征及预后的相关性

目的:检测结直肠癌(CRC)组织中富含AT结合域1A(ARID1A)基因突变和mutS同种组织蛋白2(MSH2)蛋白表达,分析两者的临床意义。方法:选取自2017年1月至2018年1月期间我院诊治的142例CRC患者作为研究对象。采用直接测序法检测CRC癌组织中ARID1A基因突变。免疫组化检测癌及癌旁组织MSH2蛋白表达。Spearman秩相关分析ARID1A基因突变和MSH2蛋白表达的相关性。统计学分析ARID1A基因突变、MSH2蛋白表达与CRC临床病理特征的关系。Kaplan-Meier生存分析ARID1A基因突变和MSH2蛋白表达对患者生存预后的影响。单因素及多因素Cox回归分析影响CRC患者生存预后的因素。结果:142例CRC癌组织中,27例发生ARID1A基因突变,ARID1A基因突变率为19.01%(27/142)。MSH2棕黄色阳性表达主要位于细胞核。CRC癌组织中MSH2阳性率为51.41%(73/142),明显低于癌旁组织91.55%(130/142)(χ^(2)=56.116,P=0.000)。不同肿瘤TNM分期、淋巴结转移CRC癌组织中ARID1A基因突变、MSH2阳性率差异具有统计学意义(P<0.05)。CRC癌组织中ARID1A基因突变和MSH2表达呈显著负相关性(r=-0.575,P=0.000)。ARID1A基因突变组患者3年总体生存率为37.04%(10/27),明显低于野生型组患者67.27%(74/110)(P=0.000);MSH2阳性表达组患者3年总体生存率为81.43%(57/70),明显高于阴性表达组患者42.30%(27/67)(P=0.000)。ARID1A基因突变型、MSH2阴性表达、肿瘤TNM分期Ⅲ期及伴淋巴结转移是影响CRC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:ARID1A基因、MSH2表达与CRC患者肿瘤分期及淋巴结转移有关,是CRC患者预后预测的独立因素。