小鼠抗人前B细胞白血病同源盒基因3多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)多克隆抗体。方法采用反转录PCR扩增PBX3基因区序列,并重组入原核表达载体pGEX-4T-1,重组载体转化BL21大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PBX3融合蛋白的表达。SDS-PAGE纯化融合蛋白,并用GST-PBX3融合蛋白免疫BALB/c小鼠,收集经过免疫的小鼠血清即抗PBX3的多克隆抗血清,采用间接ELISA检测其效价,通过免疫细胞化学技术及Western blot法鉴定其特异性。结果成功构建pGEX-4T-1/PBX3原核表达载体,转化BL21菌株后可高效表达GST-PBX3融合蛋白,且以不可溶包涵体形式存在。SDS-PAGE纯化蛋白并免疫小鼠产生的抗PBX3血清可特异识别细胞外源过表达的PBX3蛋白,同时可检测到细胞外源性PBX3蛋白的细胞内定位情况。结论获得效价和特异性良好的PBX3多克隆抗体。

前B细胞白血病同源盒基因3基因小干扰RNA在体外诱导脑胶质瘤细胞凋亡的机制

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因3（PBX3）基因小干扰RNA（siRNA）对脑胶质瘤细胞活力、凋亡的影响及其机制。方法参照Lipofectamine^TM2000说明，将PBX3的特异性siRNA（PBX3-siRNA组）转染人脑胶质瘤U87细胞，同时转染阴性对照siRNA（阴性组），并设置空白组，转染48h，Westernblot检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）、p53、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase．3）和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）的蛋白表达，流式细胞术检测细胞凋亡率。噻唑蓝（Mrrr）检测PBX3．siRNA转染24、48、72h的细胞活力。结果转染PBX3．siRNA的U87细胞PBX3表达明显低于空白组（相对表达量分别为0．096±0．010、0．467±0．051，P=0．000）。与空白组比较，PBX3-siRNA组在24～72h的细胞活力均明显降低（24、48、72h细胞活力分别为0．336±0．034、0．549±0．057、0．671±0．073，P24h=0．001，P48h=0．004，P72h=0．004）。PBX3-siRNA组较空白组在48h的细胞凋亡率显著升高[凋亡率分别为（21．21±1．34）％，（4．71±0．32）％；P=0．000]。p-p38（0．031±0．006）蛋白表达显著降低，p53（0．388±0．041）和Cleaved-Caspase-3（0．205±0．018）蛋白表达显著升高（Pp-p38=0．000，Pp53=0．000，Pckaved-Caspase=0．000）。3组间p38和Caspase-3蛋白表达差异无统计学意义（Pp38=0．987，PCaspase-3=0．871）。结论PBX3基因siRNA可抑制脑胶质瘤细胞活力，诱导细胞凋亡，其机制可能是下调p38MAPK信号通路。

同源盒A9和前B细胞白血病同源盒基因在结肠癌中的表达及意义

目的观察同源盒A9(HOXA9)和前B细胞白血病同源盒基因(PBX3)在结肠癌组织及其癌旁组织中的表达,探讨二者与结肠癌临床病理参数的关系及其对结肠癌3年预后的影响。方法选取2014年8月至2016年5月于南阳市第一人民医院进行手术治疗的结肠癌病人77例,取其癌组织及相应癌旁组织,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结肠癌及其癌旁组织HOXA9 mRNA、PBX3 mRNA表达情况,免疫组织化学法检测其癌组织及癌旁组织标本中HOXA9P与PBX3蛋白表达,分析HOXA9P、PBX3表达与临床病理特征的关系,运用Spearman法分析HOXA9P与PBX3表达相关性,通过Kaplan-Meier法对结肠癌病人3年内存活情况进行分析。结果与癌旁组相比,结肠癌组HOXA9 mRNA[(3.09±0.55)比(1.02±0.15)]、PBX3 mRNA表达水平[(2.51±0.47)比(0.98±0.11)]、HOXA9、PBX3蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05);HOXA9、PBX3表达均与结肠癌病人分化程度、TNM分期有关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示结肠癌组织中HOXA9与PBX3 mRNA表达呈正相关(rs=0.643,P<0.05);Kaplan-Meier法分析显示HOXA9、PBX3阳性表达组3年内总生存率(OS)显著低于阴性表达组(41.2%VS 84.6%,43.6%VS 86.4%)。结论结肠癌组织中HOXA9、PBX3均高表达,二者呈正相关,均与结肠癌分化程度、TNM分期及预后相关,可能共同参与结肠癌的发生发展。

前B细胞白血病同源盒基因3、磷酸酶和张力蛋白同源等位基因在宫颈癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)和第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)在宫颈癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法收集2014年6月至2018年12月南京市仙林鼓楼医院收治的85例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学法检测PBX3和PTEN表达水平。单因素分析和多因素Logistic回归模型分析PBX3和PTEN表达水平与临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析PBX3和PTEN表达水平与预后的关系。结果宫颈癌组织PBX3蛋白阳性表达率38.82%(33/85),高于癌旁组织的25.53%(20/85),PTEN蛋白阳性表达率36.47%(31/85),低于癌旁组织的98.82%(84/85),差异均有统计学意义(χ^(2)=4.633,P=0.031;χ^(2)=75.500,P<0.001)。单因素分析显示,宫颈癌组织PBX3和PTEN表达与临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移、血管侵犯和肿瘤浸润程度有关(P<0.05)。多因素Logistic回归模型显示,临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移是宫颈癌组织PBX3或PTEN阳性表达的独立影响因素(P<0.05)。PBX3阳性表达患者45.45%(15/33)死亡,中位生存时间31个月;阴性表达患者25.00%(13/52)死亡,中位生存时间38个月,Log-rank检验显示宫颈癌组织PBX3阳性表达患者与阴性表达患者生存情况比较差异有统计学意义(P=0.025)。PTEN阳性表达患者22.58%(7/31)死亡,中位生存时间39个月;阴性表达患者38.89%(21/54)死亡,中位生存时间33个月,Log-rank检验显示宫颈癌组织PTEN阳性表达患者与阴性表达患者生存情况比较差异有统计学意义(P=0.035)。结论宫颈癌中PBX3表达上调,PTEN表达下调。PBX3和PTEN表达水平与临床分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移均有关。宫颈癌组织PBX3阳性表达患者的预后差于阴性表达患者,PTEN阳性表达患者的预后好于阴性表达患者。

组织DDX5、PBX3的表达对前列腺癌术后复发的预测价值

目的探讨与分析组织死亡盒蛋白5(Dead-boxpolypeptide5,DDX5)、前B细胞白血病同源盒基因3(pre-B-cell leukemia homeobox 3,PBX3)的表达对前列腺癌术后复发的预测价值。方法采用回顾性方法,2018年8月到2022年5月选择在南阳市第一人民医院诊治的前列腺癌患者90例作为研究对象,采用免疫组化法检测癌组织DDX5、PBX3表达水平。随访患者的术后复发情况并进行预测价值分析。结果90例患者随访到2022年8月,平均随访时间为16.20±2.22个月,复发10例(复发组),占比11.1%,其中吻合口复发2例,淋巴结复发9例。复发组的DDX5、PBX3表达阳性率为80.0%、90.0%,显著高于非复发组的26.3%、21.3%(P<0.05)。Spearsman分析显示DDX5、PBX3表达阳性率与术后复发存在相关性(P<0.05);COX回归分析显示DDX5、PBX3表达阳性率为影响术后复发的重要因素(P<0.05);ROC曲线显示DDX5、PBX3表达阳性率预测术后复发的曲线下面积分别为0.806、0.857。结论前列腺癌术后复发比较常见,多伴随有DDX5、PBX3的高表达,组织DDX5、PBX3的表达对前列腺癌术后复发的预测具有重要价值。

miR-224通过调控同源异型盒基因B3表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-224通过调控同源异型盒基因B3(HoxB3)表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RT-PCR法检测miR-224在大肠癌细胞株及人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC中的表达,大肠癌细胞转染miR-224 inhibitor,并通过双荧光素酶实验、Western blot及RT-PCR证实HoxB3是miR-224的靶基因。MTT及Annexin V-PI法检测miR-224及HoxB3表达量下调后分别对大肠癌细胞活力的影响。流式细胞术检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞周期的影响;Western blot检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD 1)、p21及p27表达的影响。结果大肠癌细胞中miR-224表达量高于人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC,且HCT 116中的表达量最高,因此选为后续细胞株。双荧光素酶报告基因证实HoxB3是miR-224下游靶基因,Western blot及RT-PCR结果证实下调miR-244的表达水平后HoxB3蛋白及mRNA表达量均显著下降(P<0.01)。下调miR-224及干扰HoxB3表达都能显著降低HCT_116细胞活力(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01)。下调miR-224还能使HCT_116细胞周期阻滞在G_1期,抑制CDCA3及CyclinD1表达(P<0.01),促进p21及p27表达(P<0.01)。结论 miR-224在大肠癌细胞中高表达,并能通过调控靶基因HoxB3的表达及调节细胞周期相关蛋白的表达而参与大肠癌细胞的增殖与凋亡。

miR-142-3p靶向HOXA5对急性B淋巴细胞白血病细胞增殖、周期阻滞与凋亡作用的研究

目的:探讨miR-142-3p通过调控同源异型盒基因5(HOXA5)的表达对急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞增殖、周期和凋亡的作用及分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测人B-ALL细胞系Nalm6和人B淋巴母细胞系Hmy2-cir中miR-142-3p和HOXA5的表达水平。使用脂质体转染技术将miR-142-3p模拟物、pcDNAHOXA5过表达质粒、miR-142-3p模拟物+pcDNA-HOXA5过表达质粒及对照物转染至Nalm6细胞。根据microRNA.org预测HOXA5与miR-142-3p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-142-3p与HOXA5基因的靶向关系。使用细胞计数盒8(CCK-8)和细胞克隆形成实验检测miR-142-3p对Nalm6细胞增殖能力的影响。采用流式细胞术检测miR-142-3p对Nalm6细胞周期分布与凋亡的影响。通过Western blot检测细胞周期相关蛋白G_(1)/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶4 (CDK4)以及B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)的表达水平。结果:与Hmy2-cir细胞比较,miR-142-3p在Nalm6细胞中低表达而HOXA5呈高表达(P <0.05)。miR-142-3p与HOXA5 3’-UTR存在互补结合区域,转染miR-142-3p模拟物与野生型HOXA5 3’-UTR组荧光素酶活性较转染miR-142-3p阴性对照与野生型HOXA5 3’-UTR组荧光素酶活性显著下降(P <0.05)。转染48和72 h后,转染miR-142-3p模拟物能够抑制Nalm6细胞增殖能力和细胞克隆数目(P <0.05),使Nalm6细胞发生G1期阻滞,从而抑制CyclinD1与CDK4蛋白表达(P<0.01),促进Nalm6细胞的凋亡,并且抑制BCL-2蛋白表达,促进Bax、Caspase-3蛋白表达(P <0.05)。结论:miR-142-3p通过靶向下调HOXA5表达来抑制Nalm6细胞增殖,使细胞G1期阻滞,并促进细胞的凋亡。

PBX3在急性髓系白血病中的高表达及其临床意义

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)在急性髓系白血病(AML)患者骨髓样本中的表达及其临床意义。方法通过生物信息学方法,分析美国癌症和肿瘤基因图谱计划数据库(TCGA)33种类型癌症转录组测序数据,获得PBX3 mRNA在泛癌中的表达水平,进一步分析AML患者中PBX3 mRNA表达水平与患者临床病理特征、预后的关系。利用全转录组基因表达差异分析,探究AML中PBX3相关分子特征。结果PBX3 mRNA表达水平在12种癌症类型中上调,其中在AML患者中上调最为显著。PBX3高表达AML患者总生存时间和无病生存时间较PBX3低表达患者缩短,且与AML分子遗传学事件FLT3、NPM1和DNMT3A基因突变有关。PBX3表达与多个同源盒基因(包括多数HOXA和HOXB基因、MEIS1)呈正相关,且这些同源盒基因在AML患者中表达水平均与总生存时间呈负相关。结论AML患者骨髓中PBX3基因高表达可能是预后不良的潜在生物标志物,其与同源盒基因可能存在广泛的相互作用。

儿童TCF3-PBX1融合基因阳性急性前体B淋巴细胞白血病临床特征及预后分析

目的探讨儿童TCF3-PBX1融合基因阳性急性前体B淋巴细胞白血病(B-ALL)的临床特征及预后因素。方法回顾性分析2011年4月至2020年12月福建省5家医院(福建医科大学附属协和医院、厦门大学附属第一医院、福建医科大学附属漳州市医院、福建医科大学附属泉州第一医院、福建省南平市第一医院)收治的1287例初诊B-ALL患儿的临床资料。根据TCF3-PBX1融合基因检测结果,将患儿分为TCF3-PBX1阳性组与TCF3-PBX1阴性组,比较两组患儿的临床特征、早期治疗反应[诱导中及诱导结束时的微小残留病(MRD)]及远期疗效[总生存(OS)及无事件生存(EFS)],采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用Cox比例风险模型分析TCF3-PBX1阳性B-ALL的预后影响因素。83例TCF3-PBX1阳性ALL患儿中,62例治疗方案、危险分层、疗效评价采用中国儿童白血病协作组(CCLG)-ALL 2008方案,21例采用中国儿童肿瘤协作组(CCCG)-ALL 2015方案,比较两组疗效及严重不良事件(SAE)发生率。结果1287例B-ALL患儿中,83例(6.4%)TCF3-PBX1阳性。与TCF3-PBX1阴性组相比,TCF3-PBX1阳性组初诊白细胞计数(WBC)≥50×10^(9)/L的患儿比例更高,但诱导第15天或第19天MRD≥1%、诱导第33天或第46天MRD≥0.01%的患儿比例均更低(均P<0.05)。Cox回归单因素分析显示,诱导治疗第15天或第19天MRD≥1%、诱导第33天或第46天TCF3-PBX1定量≥0.01%为OS及EFS的危险因素(均P<0.05)。多因素分析显示,诱导治疗第15或第19 MRD≥1%为OS(HR=10.589,95%CI 1.903~58.933,P=0.007)及EFS(HR=10.218,95%CI 2.429~42.980,P=0.002)的独立危险因素;诱导治疗第33天或第46天TCF3-PBX1定量≥0.01%为EFS的独立危险因素(HR=6.058,95%CI 1.463~25.087,P=0.013),但不是OS的独立危险因素(HR=3.550,95%CI 0.736~17.121,P=0.115)。TCF3-PBX1阳性组10年EFS率及OS率分别为84.6%(95%CI 76.9%~93.1%)、89.1%(95%CI 82.1%~96.6%),与TCF3-PBX1阴性组差异均无统计学意义(均P>0.05)。80例接受规范治疗的患儿中,与接受CCLG-ALL 2008方案治疗的患儿相比,接受CCCG-ALL 2015方案治疗的患儿感染相关SAE发生率更低[0(0/21)比20.3%(12/59),χ^(2)=5.22,P=0.022],但两组的治疗相关死亡率、复发率、EFS及OS差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论TCF3-PBX1阳性儿童B-ALL总体预后良好,诱导中期MRD≥1%及诱导结束TCF3-PBX1定量≥0.01%可能为不良预后的影响因素,CCCG-ALL 2015方案在获得良好疗效的同时可减少感染相关SAE。

同源盒基因A10表达下调后抑制胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力及相关机制研究

目的探讨同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)表达水平改变后对胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的影响及其可能涉及的机制。方法利用生物信息学方法分析The Cancer Genome Atlas website(TCGA)数据库中HOXA10在胃癌中的表达水平,构建HOXA10表达降低稳转胃癌细胞株BGC-823-sh-HOXA10并进行裸鼠皮下成瘤实验,采用western blot检测HOXA10敲减后凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-xL(Bcl-xL)表达水平的改变情况。结果分析TCGA数据库后发现胃癌中HOXA10表达水平升高。HOXA10表达下调后,胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下成瘤能力减弱,凋亡相关蛋白Bcl-xL表达下调。结论 HOXA10在胃癌中表达异常升高,HOXA10表达水平降低后可抑制胃癌细胞BGC-823裸鼠皮下成瘤能力,影响抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平可能是其发挥作用的机制。

FHL2和PBX3在卵巢癌组织中表达与临床病理特征的相关性研究

目的探讨四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)与前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)在卵巢癌(OC)组织中的表达与临床病理特征及预后的相关性。方法选取广东省阳江市人民医院2017年6月至2019年6月收治的63例OC患者作为研究对象,收集患者的OC组织和癌旁正常组织(距肿瘤边缘4 cm处)进行研究,采用免疫组化法检测组织中的FHL2与PBX3蛋白的表达水平,并分析其与OC患者临床病理特征的关系,采用Cox回归模型分析影响OC患者预后的相关因素。结果患者癌组织中FHL2和PBX3蛋白表达阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05);FHL2与PBX3蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、腹水和病理分期具有显著相关性(P<0.05);所有OC患者中位生存期为30.75(24.82,36.70)个月,其中FHL2阳性和阴性表达OC患者的中位生存期分别为17.67(6.33,29.01)和35.36(32.30,38.41)个月,PBX3阳性和阴性表达OC患者的中位生存期分别为17.01(14.11,19.91)和33.75(31.45,36.05)个月,差异具有统计学意义(Log rank P<0.05)。经单因素分析,肿瘤低分化、淋巴结转移、病理分期Ⅲ+Ⅳ期、FHL2及PBX3阳性表达患者的生存时间均显著缩短,差异具有统计学意义(P<0.05);Cox回归模型分析表明,淋巴转移情况(HR=0.17,95%CI:0.05~0.53)、腹水(HR=0.02,95%CI:0.00~0.17)、病理分期(HR=11.45,95%CI:2.95~44.49)、FHL2(HR=0.19,95%CI:0.05~0.71)及PBX3表达水平(HR=0.22,95%CI:0.08~0.57)均为OC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论FHL2与PBX3蛋白在OC组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织,且表达水平与OC患者的临床特征显著相关。该研究对于OC的发生、发展及预后均有着重要的临床意义。

干漆乙醇提取物通过调控HOXA-AS3/miR-29b分子轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭诱导凋亡

目的 探讨干漆乙醇提取物调控同源盒基因A反义转录3(HOXA-AS3)/微小RNA(miR)-29b分子轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用不同水平(0、25、50、75μg/mL)的干漆乙醇提取物处理乳腺癌T47D细胞48 h, CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测HOXA-AS3和miR-29b的表达。western blot检测P21、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达。将HOXA-AS3过表达载体(pcDNA3.1-HOXA-AS3)、miR-29b抑制物(anti-miR-29b)分别转染T47D细胞,经75μg/mL的干漆乙醇提取物干预后,采用上述方法检测T47D细胞的增殖、迁移、侵袭以及凋亡变化。双荧光素酶报告基因实验以及qRT-PCR验证miR-29b和HOXA-AS3的靶向关系。结果 干漆乙醇提取物处理可促进T47D细胞P21、Caspase-3和E-cadherin表达,抑制MMP-2表达,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,并呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。干漆乙醇提取物处理可抑制T47D细胞HOXA-AS3的表达,促进miR-29b的表达,并呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。过表达HOXA-AS3或抑制miR-29b均可逆转干漆乙醇提取物对T47D细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡的影响(P<0.05)。HOXA-AS3靶向负性调控miR-29b表达。结论 干漆乙醇提取物通过下调HOXA-AS3/miR-29b分子轴可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。

PBX3在宫颈癌中的表达及与临床病理参数和预后关系

目的:探究宫颈癌组织中前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)的表达,以及与临床病理特征及预后的关系。方法:收集本院宫颈癌以及癌旁组织82例进行研究,Western blot法、免疫组化法检测标本组织中PBX3蛋白表达,分析二者与临床病理特征及预后的关系。对影响患者生存的临床因素进行COX回归分析,所有患者均进行30个月随访,统计患者生存率,采用Kaplan-Meier分析患者生存情况,Log-Rank法检测组间生存差异。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中PBX3蛋白、蛋白阳性表达率均升高(P<0.05)。PBX3表达与年龄、病理类型、肿瘤浸润深度无关(P>0.05),与肿瘤分期、肿瘤分化程度、肿瘤直径、浸润程度淋巴结转移有关(P<0.05)。30个月随访,24人死亡,死亡率为29.3%。COX多因素分析显示,肿瘤分期、肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、PBX3为影响患者预后的独立因素。PBX3阳性表达组58.1%死亡,阴性表达组23.5%死亡,两组患者Kaplan-Meier生存曲线存在差异(P<0.05)。结论:PBX3在宫颈癌组织中表达上调,与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移等有关,可能为宫颈癌患者预后的生物学指标。

FHL2与PBX3在宫颈癌组织中表达与临床病理特征及预后的相关性

目的 探讨四个半LIM结构域蛋白2(FHL2)FHL2与前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)在宫颈癌组织中的表达与临床特征及预后的相关性。方法 选取该院2013年12月至2015年12月收治的55例宫颈癌患者作为研究对象,回顾性分析患者的临床资料,将收集到的患者标本分组,55例癌组织标本作分为研究组。将55例癌旁组织标本(距肿瘤边缘4cm处)作为对照组。并采用免疫组化法检测所有患者的FHL2与PBX3蛋白的表达,分析FHL2与PBX3蛋白表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系,并采用Cox比例风险分析影响宫颈癌患者预后的相关因素。结果 研究组FHL2、PBX3蛋白阳性表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);FHL2、PBX3蛋白表达与宫颈癌患者的年龄、病理类型等临床特征不相关(P>0.05),但与宫颈癌患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移、浸润深度以及病理分级相关(P<0.05),当肿瘤分化程度越低、有淋巴转移、浸润深度越深以及病理程度越高时,FHL2、PBX3蛋白阳性表达率越高(P<0.05);宫颈癌患者平均中位生存期20个月,其中FHL2阳性表达和阴性表达患者的中位生存期分别为18、30个月,PBX3阳性表达和阴性表达患者的中位生存期分别为17、32个月中位生存期;经单因素分析得出:肿瘤低分化、淋巴结转移、浸润深度>1/2、病理分级G3、FHL2、PBX3阳性表达的患者生存时间均显著缩短,差异有统计学意义(P<0.05);经多因素Cox比例风险回归模型分析得出:肿瘤低分化、淋巴结转移、浸润深度>1/2、病理分级G3、FHL2、PBX3阳性表达均为影响宫颈癌患者预后的独立影响因素(P<0.05)。结论 FHL2与PBX3蛋白在宫颈癌组织中的表达水平升高,且表达水平与宫颈癌患者的临床特征显著相关,对于宫颈癌的发生、发展以及预后均有着重要的临床意义。

巨噬细胞对内皮细胞系同源盒B2基因和血管内皮生长因子受体mRNA及整合素ανβ3表达的影响

目的 体外观察巨噬细胞(M)对血管内皮细胞同源盒(HOX)B2基因mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)受体KDRmRNA及整合素ανβ3表达的影响。 方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞系ECV304,分为(1)ECV304组; (2)ECV304 +伴刀豆球蛋白A(conA,终浓度25mg/L)组; (3)ECV304+人M系U937组:ECV304细胞中加入1×105 /mlU937细胞; (4)ECV304+U937+conA组:ECV304中加入1×105 /mlU937细胞及终浓度25mg/L的conA.反应48h后,用免疫荧光技术检测各组ECV304细胞整合素ανβ3的表达情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测细胞KDRmRNA和HOXB2基因mRNA的表达水平。 结果 ECV304组细胞的整合素ανβ3、KDRmRNA及HOXB2基因mRNA的表达水平分别为6. 7±1. 5、0. 633±0. 012、0. 674±0. 004。ECV304+U937+conA组细胞上述指标较ECV304组均明显上调(P<0. 01 ),分别为10. 2±1. 7、0. 879±0 003、0. 947±0 003。其余两组细胞上述指标与ECV304组比较,差异均无统计学意义(P>0. 05).结论 被conA活化的M通过影响内皮细胞的KDRmRNA、HOXB2mRNA基因及整合素ανβ3的表达,来促进内皮细胞增殖、迁移及与基质黏附,从而调节血管生成。

甲状腺乳头状癌中PBX3和Twist表达的临床意义

目的:研究前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)和Twist在甲状腺乳头状癌(PTC)中m RNA和蛋白的表达特点,探讨其表达的临床意义。方法:收集60例PTC和30例相应癌旁组织(距离肿瘤≥2 cm)的手术切除标本,应用免疫组化En Vision二步法检测石蜡包埋组织PBX3和Twist蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测新鲜组织中PBX3和Twist m RNA的表达水平,通过统计学软件分析PTC中PBX3和Twist的m RNA和蛋白表达与患者不同临床病理特征的关系,并对二者蛋白表达的相关性采用Spearman等级相关分析。结果:实时荧光定量PCR结果显示,PTC组织中PBX3和Twist mRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);免疫组化结果显示,PTC组织中PBX3和Twist蛋白的阳性表达率分别为73.33%(44/60)和68.33%(41/60),癌旁组织分别为16.67%(5/30)和13.33%(4/30),癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。伴有包膜侵犯、淋巴结发生转移和Ⅲ~Ⅳ期PTC组织中PBX3 mRNA和蛋白表达均高于无包膜侵犯、无淋巴结转移及Ⅰ~Ⅱ期PTC组织(P<0.05)。包膜是否侵犯、淋巴结是否转移及Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期PTC组织中Twist mRNA和蛋白表达均有差异(P<0.05)。PBX3和Twist蛋白在PTC中的表达呈明显的正相关(r=0.400,P<0.05)。结论:PTC组织中PBX3和Twist m RNA和蛋白表达均出现上调,其异常高表达与PTC的发生、侵袭和转移密切相关。PBX3和Twist的表达呈正相关,表明二者表达变化可能在PTC的进展中起协同作用。

甲状腺乳头状癌中PBX3和PTEN的表达及其临床意义

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因3(PBX3)和第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及其临床意义。方法选取2017年1月至2018年1月在台州市中心医院(台州学院附属医院)住院行手术切除和石蜡包埋的PTC标本80例,选取癌旁正常甲状腺组织(距离肿瘤≥2 cm)30例作为对照。应用免疫组化En Vision二步法检测PTC和癌旁组织中PBX3和PTEN蛋白的表达情况,分析PTC不同临床病理特征与PBX3和PTEN表达的关系及两者蛋白表达的相关性。结果PTC组织中PBX3阳性表达率为73.75%,高于癌旁组织的16.67%,差异有统计学意义(P<0.05);PTC组织中PTEN阳性表达率为35.00%,低于癌旁组织的83.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。包膜侵犯、淋巴结转移和Ⅲ~Ⅳ期的PTC组织中PBX3阳性表达率分别高于无包膜侵犯、无淋巴结转移和Ⅰ~Ⅱ期的PTC组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。包膜侵犯、淋巴结转移和Ⅲ~Ⅳ期的PTC组织中PTEN阳性表达率分别低于无包膜侵犯、无淋巴结转移和Ⅰ~Ⅱ期的PTC组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。PTC组织中PBX3、PTEN蛋白表达呈负相关(r=-0.337,P<0.05)。结论PTC组织中PBX3高表达,而PTEN低表达,两者表达呈负相关,且与PTC的包膜侵犯、淋巴结转移和临床分期密切相关,表明PBX3和PTEN异常表达可能在PTC发生、侵袭、转移的过程中起作用。

沉默前B淋巴细胞白血病转录因子基因表达诱导肺癌细胞凋亡及活性氧产生

目的探讨前B淋巴细胞白血病转录因子(PBX1)基因表达对肺癌细胞凋亡、ROS含量和STAT3信号通路的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测肺癌及癌旁组织中PBX1基因的表达水平,分析PBX1基因表达水平与患者临床病理特征的关系。采用Western blot法检测人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞株中PBX1蛋白的表达水平。应用脂质体法转染空白对照(空白组)、阴性对照(阴性组)和PBX1小干扰RNA(siPBX1组)至A549细胞,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率和ROS含量,采用Western blot检测各组细胞中PBX1、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平。结果肺癌组织中PBX1信使RNA的表达水平(2.36±0.23)高于癌旁组织(1.02±0.15),差异有统计学意义(P<0.05)。PBX1基因表达水平与肺癌分化程度、淋巴结转移和TNM分期均有关(均P<0.05)。PBX1蛋白在人肺癌A549、SPC-A1、SK-MES-1和H1299细胞中的表达水平分别为0.454±0.038、0.403±0.034、0.311±0.028和0.377±0.035,与人正常肺MRC-5细胞(0.041±0.007)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染PBX1 siRNA的A549细胞中,PBX1蛋白的表达水平(0.082±0.010)低于空白组(0.704±0.065),差异有统计学意义(P<0.05)。siPBX1组细胞的凋亡率和ROS含量分别为(30.78±3.64)%和51.55±5.03,与空白组[分别为(3.92±0.27)%和22.36±1.31]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。p-STAT3、Bcl-2和survivin蛋白的表达水平分别为0.051±0.006、0.202±0.018和0.068±0.008,与空白组(分别为0.172±0.010、0.425±0.041和0.196±0.021)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论抑制PBX1基因的表达可诱导肺癌细胞凋亡,其机制可能与ROS产生和STAT3信号的下调有关。

HoxB3、JAG1在肾细胞癌患者中的表达水平及对临床预后的影响

目的:探讨肾细胞癌患者癌组织中同源异型盒基因B3(HoxB3)、JAG1的表达水平及对临床预后的影响。方法:选取2017年1月至2020年1月在本院收治的93例肾细胞癌患者作为观察组,收集肾细胞癌患者的癌组织标本(肾细胞癌组)及对应的癌旁组织标本(癌旁组)。采用免疫组化法检测肾细胞癌患者的HoxB3、JAG1表达水平。分析HoxB3、JAG1表达与肾细胞癌患者的临床病理特征关系,采用多因素Cox回归分析影响肾细胞癌患者预后的相关因素。结果:肾细胞癌组的HoxB3阳性表达率低于癌旁组,JAG1阳性表达率高于癌旁组(均P<0.001)。共有62例患者存活,存活率为66.67%。低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、Fuhrman分级Ⅲ~Ⅳ级、有淋巴结转移、有肾包膜受侵的肾细胞癌患者的HoxB3阳性表达率及JAG1阴性表达率低于中/高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、Fuhrman分级Ⅰ~Ⅱ级、无淋巴结转移、无肾包膜受侵的肾细胞癌患者。低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、Fuhrman分级Ⅲ~Ⅳ级、有淋巴结转移、有肾包膜受侵的肾细胞癌患者的3年生存率均降低(均P<0.05)。HoxB3阳性表达、JAG1阴性表达患者的3年生存率高于HoxB3阴性表达、JAG1阳性表达患者[28(80.00%)vs.34(58.62%),18(85.71%)vs.44(61.11%),均P<0.05]。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、HoxB3阴性表达、JAG1阳性表达是肾细胞癌患者预后的危险因素(均P<0.05)。结论:HoxB3在肾细胞癌中呈低表达,JAG1在肾细胞癌中呈高表达,二者均与肾细胞癌的临床病理特征及预后密切相关,可作为肾细胞癌预后评估的生物学标志物。

HoxB1质粒转染对视黄酸诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨细胞内 Hox B1表达、视黄酸 ( RA)代谢与细胞凋亡的相互关系。方法 :采用脂质体介导的质粒转染和反转录 - PCR等实验技术方法做有关分析检测。结果 :2 .5× 10 - 7mol/ L 全反式 RA( ATRA)处理 HL-6 0细胞 3天 ,HPL C分析显示 ,Hox B1的高表达可明显抑制 HL- 6 0细胞 ATAR代谢 ;使 ATRA增殖抑制作用减弱 ;野生型 HL- 6 0细胞有较强 bc1- 2表达 ,ATRA处理抑制未转染细胞 bcl- 2表达 ,但单纯 Hox B1转染、Hox B1转染 + IFNα均能增强 bc1- 2表达。结论 :Hox B1转染 HL- 6 0细胞 ATRA代谢明显受抑 。