乙肝病毒前C基因区1896位点变异的实验研究

目的探讨慢性乙肝病人血清HBV DNA前C基因区nt1896的变异情况及其与HBV DNA水平及转氨酶(ALT)关系。方法将172例慢性乙肝患者分为两组:大三阳组(106例)和小三组(66例)。检测ALT、HBV DNA及前C区nt1896的变异情况。结果大三阳组与小三阳组HBV DNA阳性率有显著差异(P<0.05),nt1896变异率无显著差异(P>0.05)。小三阳患者中ALT升高组(>40 U/L)HBV DNA(+)患者nt1896变异率100%,而ALT正常组HBV DNA(+)患者nt1896变异率30%(3/10)(P<0.05)。结论大三阳和小三阳慢性乙型肝炎病人都存在较高的前C区nt1896变异率(P>0.05)。前C区nt1896变异可能是影响HBV DNA复制的一个因素。

乙肝病毒前C区A1896变异与机体细胞免疫功能的关系

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者乙肝病毒 (HBV)前C区A1896变异与机体细胞免疫水平的关系。方法 :对91例慢性乙肝患者通过流式细胞分析技术 (FCM )检测外周血T淋巴细胞亚群 ,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子 (IFN -γ、TNF -α和IL -2)水平 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增HBVDNAC基因区片段 ,并对PCR产物直接测序。结果 :发生A1896变异者49例 ,变异率为53 85 % ,随病情加重A1896变异率逐渐增加 ,以重型肝炎组最高 ;变异株组IFN -γ、TNF -α水平明显增高 ,CD8+细胞相对数逐渐下降 ,CD4+/CD8+比值逐渐升高 ,差别有统计学意义 ,而CD4+相对数及IL -2水平比较差别无统计学意义。结论 :A1896变异普遍存在于慢性乙型肝炎患者中 ,且随病情加重变异株感染率逐渐增加 ,单纯变异株的比例也随之增高 ;A1896变异株可能通过改变HBcAg 的表达及分布 ,激活大量的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)释放细胞因子 。

乙型肝炎患者血清HBV前C区A1896变异的检测分析

目的了解HBsAg(+)/HBcAb(+)/HBeAb(+)的慢性乙肝病人血清乙肝病毒(HBV)DNA前C区A1896的变异情况及其与临床关系。方法对所有试验对象检测肝功能指标,根据检测结果分为丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高组和ALT正常组。用聚合酶链反应杂交(PCR-ELISA)定量检测HBV-DNA并进一步检测HBV前C区A1896位点的变异情况。结果 38例患者中有18例HBV-DNA阳性,其中15例发生A1896位点变异,变异率为83.3%(15/18)。ALT升高组的18例中,血清HBV-DNA阳性13例,阳性率72.2%,平均浓度为9.62×106(1.10×103～1.09×108)拷贝/ml,A1896变异13例,变异率为100%(13/13)。ALT正常组的20例中,HBV-DNA阳性5例,阳性率25.00%,平均浓度2.55×104(3.28×103～4.61×104)拷贝/ml。A1896变异2例,变异率为40%(2/5)。两组比较无论在HBV-DNA阳性率,还是A1896位变异率都具有统计学差异(P<0.05)。结论 HBsAg(+)/HBcAb(+)/HBeAb(+)的慢性乙肝患者存在较高的A1896变异率,ALT升高组HBV-DNA阳性率和变异率均高于ALT正常组(P<0.05),提示HBV A1896位点变异与肝脏病变活动加重和ALT升高有关。

乙肝病毒前C区1896G→A变异孕妇的胎盘细胞免疫研究

目的探讨发生前C区1896G→A变异的HBV经胎盘途径传播机制。方法将61名携带乙肝病毒孕妇分为2组，32名HBV前C区1896G→A变异的孕妇为研究组（又称为变异组），29名HBV前C区1896G→A非变异的孕妇为对照组（又称为非变异组）。结果HBV前C区1896G→A变异的胎盘中CD3阳性的T淋巴细胞和CD68阳性的巨噬细胞数（Hofbauer细胞）显著增加。两组CD68阳性的巨噬细胞相应的平均计数：研究组（22．7±4．5227），对照组（9．5±2．173），方差分析结果显示两项指标研究组与对照组比较均有显著差异（P〈0．01）。变异组IL2的表达增强，两组比较有统计学意义（X^2=25．2454：P〈0．01）。结论乙肝病毒发生前c区1896G→A变异后，胎盘感染HBV机率增加，且T淋巴细胞和Hofbauer细胞介导的细胞免疫可能有所增强。

慢性乙型肝炎患者HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与乙型肝炎自然史、血清HBsAg定量及疾病程度的相关性

目的研究HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与HBV自然史、血清HBsAg水平间的相关性及对疾病严重程度的影响。方法分别各选取40例HBV野生株、前C区G1896A或核心启动子1762/1764变异以及两者联合变异的慢性乙型肝炎感染者为研究对象。采用PCR反向点杂交技术检测HBV前C区G1896A位点、核心启动子1762/1764变异及HBV基因分型。同时检测HBsAg定量、HBeAg、HBV DNA定量、肝脏生化指标等。结果(1)HBV前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异患者的年龄、ALT高于野生株感染者(P<0.001),Alb低于野生株感染者(P<0.001)。(2)HBV自然史免疫耐受期以野生株感染为主(P<0.001),免疫清除期、低(非)复制期野生株及PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株差异无统计学意义(P>0.05),再活动期以PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株为主(P<0.001)。(3)PC G1896A或/和BCP1762/1764变异株的HBsAg水平(lgIu/mL)、HBeAg阳性率较野生株组降低(P<0.001),基因C型、HBV DNA水平(≥6 lg拷贝/mL)较野生株组差异无统计学意义(P>0.05)。(4)HBV PC G1896A或/和BCP1762/1764变异中肝硬化患者多于野生株(P<0.05)。结论慢性HBV感染者前C区G1896A、核心启动子1762/1764变异与乙型肝炎自然史、HBsAg水平、HBeAg的状态及疾病严重程度相关。

乙型肝炎病毒X区T^1762－A^1764和前C区A^1896变异对干扰素治疗的影响

目的：研究乙型肝炎病毒(HBV)基因组X区和前C区热点变异对干扰素(IFN)治疗的影响。方法：采用半套式聚合酶链反应(HN-PCR．)结合限制性片段长度多形态(RFLP)技术检测20例慢性乙型肝炎患者IFN治疗前病毒核苷酸序列的突变。结果：A^1896变异株不影响治疗结束时应答率，6／8例T^1762-A^1764变异株感染者为应答者。停药后12mo时，l例T^1762-A^1764变异株感染者由无应答者变为应答者：在复发者中，既有T^1762-A^1764变异株感染者，又有A^1896变异株感染者，或两者同时存在。结论：T^1762-A^1764变异者近期疗效好，而A^1896变异者不影响近期疗效；T^1762-A^1764变异者远期疗效还有待进一步观察。

慢性乙型肝炎前C区G1896A基因变异对HBV复制及疾病严重程度的影响

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A变异对乙型肝炎病毒复制及疾病严重程度的影响。方法选取43例慢性乙型肝炎及49例乙型肝炎肝硬化患者为研究对象。采用PCR技术检测HBV前C区G1896A位点变异及乙型肝炎基因分型。同时检测HBeAg、HBV DNA定量、肝功能血清生化指标。结果(1)发生HBV前C区G1896A变异患者的年龄大于野生株感染者(P<0.01),发生肝硬化的可能性更大(P<0.01)。(2)随着变异株感染率的增加,HBeAg阴性率较野生株组增加(P<0.01),基因C型较野生株组增加(P<0.05),HBV DNA水平降低差异意义(P>0.05)。结论 HBV前C区G1896A变异与HBeAg的状态,HBV DNA的复制及疾病严重程度相关。

HBV-前C区基因变异与乙肝病毒复制的相关性

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)前C区G1896A变异与乙肝病毒复制的相关性。方法选取38例慢性轻度,57例慢性中度,29例慢性重度的乙型肝炎患者为研究对象。采用突变特异PCR技术检测HBV前C基因nt1896位点突变情况,并对血清中HBVDNA进行测序。同时检测乙型肝炎病毒HBeAg/抗-HBe、HBVDNA定量、肝纤维化指标。结果(1)抗HBe阳性者在单纯变异株感染的慢性乙型肝炎患者中所占的比例(84.61%)高于单纯野生株感染者(24.32%)。(2)随着变异株感染率的增加,HB-VDNA的含量增高。(3)随着变异株感染率增加,肝脏纤维化分期的逐渐加重。结论前C区G1896A变异与乙肝病毒的复制程度相关。

HBV前C区1896突变株感染慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的分析及意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前C区1896变异与感染宿主外周血T淋巴细胞亚群之间的关系。方法将196例乙型肝炎患者分为慢性乙型肝炎(CHB)组(146例)和乙型肝炎肝硬化(LC)组(50例),前者又分为含野生株CHB组(CHBⅠ组,80例)和前C区1896变异株CHB组(CHBⅡ组,66例);后者又分为含野生株LC组(LCⅠ组,19例)和前C区1896变异株LC组(LCⅡ组,31例)。采用特异性引物聚合酶链反应(PCR)检测196例乙型肝炎患者HBV前C区1896变异,并用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的变化。以20名健康献血者作为正常对照组。结果 196例乙型肝炎患者中HBV前C区1896变异检出率为49.5%;LC组中HBV前C区1896变异检出率为62.0%,高于CHB组(45.2%)。CHB组CD4+T细胞绝对数明显低于正常对照组(P<0.01);LC组CD3+T细胞绝对数及百分率、CD8+T细胞绝对数、CD4+T细胞绝对数及百分率均明显低于正常对照组(P<0.01)。CHBⅡ组CD3+T细胞绝对数、CD4+T细胞绝对数均明显低于CHBⅠ组(P<0.05)。LCⅡ组CD3+T细胞绝对数、CD4+T细胞绝对数均明显低于CHBⅡ组(P<0.01)。结论 HBV前C区1896突变株感染的CHB患者较CHB野生株感染患者存在更为严重的T淋巴细胞亚群失衡,这种紊乱可能参与了HBV DNA前C区1896突变株感染导致的乙型肝炎慢性化过程。

用选择性扩增法再探讨HBV前区终止变异的临床意义

为进一步探讨慢性乙型肝炎前C区终止变异的临床意义，本文建立一种简单而灵敏度高的选择性聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒前C终止变异，在63侧慢性乙型肝炎中检出前C终止变异51例(81％)，其在慢性肝炎、肝硬变和慢性重型肝炎中的检出率分别为83％(38／46)、83％(10/12)和60％(3／5)，在HBeAg阳性和抗-HBe阳性分别为80％(16／20)和81％(35／43，(P<O.05)．在抗-HBV阳性和抗-HCV 阴性中分别为63%(10／16)和87％(41／47)(P<O．01)，在转氨酶正常和异常者中分别为58％(7/12)和86%(44/51)(P<0．01)。结果提示，前C终止变异与慢性肝损害严重程度无相关，但可能是肝炎活动的原因之一，抗-HBe阴性慢性肝病并不都与前C终止变异有关。

HBeAg阴性的慢性HBV感染者乙肝病毒前C区G1896A变异分析

目的:了解HBeAg阴性的慢性HBV感染者乙肝病毒前C区G1896A变异情况,为临床乙肝诊治提供科学依据。方法:北京市海淀医院HBeAg阴性的慢性HBV感染者496例,其中HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者380例,非活动期HBV感染者196例,取血液及肝组织样本进行HBV血清学标志检测(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc)、丙氨酸谷丙转移酶(ALT)、HBV DNA定量检测;HBV前C区G1896A变异检测;肝组织学检查;采用SPSS13.0软件进行数据分析。结果:两组患者血清中均检测到HBV DNA,其中HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者组检出率100%(296/296),平均值为4.90±1.49log10拷贝数/毫升,非活动期HBV感染者组检出率42.0%(84/200)平均值为3.22±0.59 log10拷贝数/毫升,两组比较HBV DNA载量差异有显著性;在HBV DNA载量>1000拷贝/ml的病例中HBeAg阴性慢性乙型肝炎组的乙肝病毒存在前C区G1896A变异,发生率为83.8%(248/296),非活动期HBV感染组乙肝病毒前C区G1896A也存在变异,发生率为33.3%(28/84),两组变异发生率比较差异有显著性;非活动期HBV感染者组中存在HBV前C区G1896A变异患者6个月后有2例ALT和HBV DNA载量较前升高。结论:e-抗原阴性慢性HBV感染者存在变异,前C区G1896A变异所导致HBeAg表达水平低下或不表达,但仍有HBV DNA活动性复制,临床诊疗中要予以充分重视。

慢性乙型肝炎患者YMDD变异合并前C/C区启动子变异的临床研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者中拉米夫定诱导的 YMDD 变异和前 C 区1896位核苷酸以及 C区启动子1762和1764位核苷酸变异的检出率及其临床意义。方法采用基因芯片技术检测拉米夫定治疗6个月以上的122例慢性乙型肝炎患者血清中前 C 区1896位以及 C 区启动子1762和1764位核苷酸变异发生率。结果 122俐慢性乙型肝炎患者中检出40例 YMDD 变异阳性患者,检出率为32.8%。发生 YMDD变异后,HBV DNA 反跳,ALT 和 AST 增高,差异有统计学意义(P<0.01)。YMDD 变异阳性患者前 C 区1896位和 C 区启动子1762和1764位核苷酸变异检出率显著高于无 YMDD 变异的慢性乙型肝炎患者,差异有统计学意义(P<0.01)。YMDD 变异阳性伴前 C 区1896位以及 C 区启动子1762和1764位核苷酸变异患者与无前 C 区1896位以及 C 区启动于1762和1764位核苷酸变异的 YMDD 变异阳性患者比较,病情容易加重.易发展为重型肝炎或肝硬化,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论拉米夫定诱导的 YMDD 变异患者容易发生前 C 区1896位/C 区启动子1762和1764位核菅酸变异,但与病情加重和预后无相关性。

HBV基本核心启动子区和前C区变异与肝病进展的关系

乙型肝炎病毒（HBV）感染是我国严重的卫生健康问题，目前大约有1．7亿慢性HBV感染者，约占世界慢性HBV感染者的一半。HBV基因组结构为部分环状双链DNA，全长约3．2kb，其核心启动子对于HBV的复制和形态构成发挥了关键性作用。

仙居地区HBV基因型分布与若干相关问题的研究

目的:调查浙江仙居地区HBV基因型的分布,研究基因型与前C区变异的关系及基因型的临床稳定性。方法:全部病例样本均取自仙居地区出生的汉族人,HBV基因型及前C区变异均采用型特异性PCR法;部分病例分别于3、6、12、18月,重复采血复查基因型。结果:仙居地区HBV基因型分布:C型283例,B型51例,CB混合型19例;查nt(核苷酸)1 896变异51例,变异阳性者C型9/37例、B型7/10例、混合型3/4例;3、6、12、18月复查基因型,小部分病例发生改变。结论:仙居地区HBV基因型的分布,以C型为主占80.2%,其次为B型与CB混合型,分别占14.4%与5.4%;B型与CB混合型容易发生HBVnt 1 896变异;基因型临床稳定性值得进一步研究。

HBeAg阴性的HBV感染产妇与母婴传播关系

目的探讨HBeAg检测阴性的乙型肝炎病毒（HBV）感染产妇及其存在的前C区1896位终止变异株与母婴传播的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法测定产妇血中HBV-DNA载量,对HBV-DNA阳性者及其感染的婴儿,利用错配PCR限制性片段长度多态性分析,测定HBV前C区1896位终止变异。结果HBeAg阴性产妇HBV的母婴传播率为5.75%,而且母婴传播概率与产妇血中HBV载量密切相关,高载量组（≥10^6拷贝/ml）的传播率为34.7%,明显高于低载量组（10^4～10^6拷贝/ml）的17.1%和低于检测值组的0.46%（P〈0.01）,进一步对存在HBV前C区终止变异的产妇及其所感染的新生儿的HBV基因分析,发现5例野生株占优势的HBV感染产妇,所感染的婴儿均为野生株,4例变异株占优势的产妇,其感染的婴儿2例为变异株感染,2例为野生株感染。结论HBeAg阴性的HBV感染产妇存在母婴传播的危险性与其体内的HBV-DNA载量密切相关,对于存在前C区终止变异的HBV感染产妇,在母婴传播过程中,野生株比变异株更容易感染胎儿。