剑麻斑马纹病菌生长和产孢方法的研究

对剑麻斑马纹病菌生长与产孢的最适培养基进行研究。结果表明:该病菌在燕麦培养基上生长速度最快,在蔗糖培养基上生长速度最慢,V8培养基最适生长;不同的培养基对产孢的作用有差异,所有培养基很少或没有产生孢子囊,而产生游动孢子的培养基,以PDA培养基最多;在培养基中加入不同的营养成分对产孢有较大影响,芝麻培养基+0.1%KNO3产生大量的孢子囊,其他很少或没有产生孢子囊,而PSA+0.1%KNO3产生游动孢子最多,10%剑麻汁培养基+0.1%KNO3产生的游动孢子最少。

剑麻斑马纹病菌多聚半乳糖醛酸酶Szpg6～Szpg10基因的分子检测及其序列分析

斑马纹病是剑麻生产上最严重、毁灭性病害之一。本研究基于寄生疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶pppg6~pppg10等5个基因c DNA序列设计了各基因编码区的特异引物。利用5对引物分别对不同来源的剑麻斑马纹病菌DNA进行了分子检测。检测结果表明,在被检测的剑麻斑马纹病菌菌株中均存在与寄生疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶pppg6~pppg10对应的基因Szpg6~Szpg10。基因序列比对分析表明,来自斑马纹病菌的Szpg6、Szpg8基因与对应pppg6、pppg8基因之间序列高度一致。比较而言,来自斑马纹病菌的Szpg7、Szpg9以及Szpg10基因与对应同源基因之间分别存在3、6及4个核苷酸序列差异,进而导致3、5及3个推定氨基酸的变异。由此推测,来自斑马纹病菌的Szpg7、Szpg9及Szpg10基因可能与对应基因在功能上存在着一定的差异。本研究为进一步研究剑麻斑马纹病菌多聚半乳糖醛酸酶在致病过程中的作用奠定了基础。

剑麻斑马纹病菌EST-SSR标记开发与评价

剑麻斑马纹病是剑麻生产中具有破坏性的一种真菌病害。本研究从Gen Bank(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucest)中随机下载10 525条寄生疫霉EST序列,经过去冗余处理后得到5 519条无冗余EST。利用MISA(MIcro SAtellite identification tool)软件进行SSR发掘,从中共搜索到199个1~6碱基SSR,其中三核苷酸重复基元类型最多,共鉴定到55个,占SSR总数的27.6%;其次是二核苷酸重复基元类型和单核苷酸重复基元类型,分别鉴定到51和47个,各占所鉴定SSR总数的25.6%和23.6%。进一步分析表明,AG/CT二核苷酸重复基元类型为优势重复类型,占二核苷酸SSR总数的76.5%。而AAG/CTT和AGC/CTG 2个基元类型在三核苷酸中出现频率最多,分别为15和11次,分别占三核苷酸SSR总数的27.3%及20.0%。从鉴定的199个SSR中,选取含有SSR的合适区段设计了22对引物,并通过18个剑麻斑马纹病菌菌株的基因组DNA进行了评价,结果只有其中9对引物能从剑麻斑马纹病菌基因组DNA中有效扩增,其扩增移效率为40.9%。由此表明,利用此方法来开发剑麻斑马纹病菌的分子标记具有可行性,只是存在一个转移效率问题。