X盒结合蛋白1与肾移植相关损伤

缺血-再灌注损伤(IRI)和排斥反应是影响移植肾远期存活的主要因素。IRI或排斥反应引起内质网应激(ERS)可导致肾损伤,X盒结合蛋白1(XBP1)作为调控细胞稳态主要的ERS相关蛋白,通过肌醇需求酶1α(IRE1α)剪接内含子后生成剪接体XBP1,进而影响靶基因表达重塑细胞环境。适当的ERS可促进细胞存活,但超过阈值时XBP1表达过多会导致细胞失稳态或死亡,进而引起肾脏内环境失衡,这与肾移植相关损伤的发病机制和疾病进展相关。因此,XBP1的有效激活对应激损伤具有保护作用,有助于维持肾脏系统的活力和功能的完整性。本文评述了ERS通路IRE1α-XBP1、XBP1在肾实质细胞和免疫细胞中的作用、XBP1在肾缺血性损伤和排斥反应中的作用及靶向XBP1的临床检测和潜在疗法,探讨靶向XBP1对肾移植相关损伤的潜在价值,以期为改善肾移植预后提供新靶点和新方向。

狼疮肾炎患者外周血B细胞中X-盒结合蛋白1的表达和临床意义

目的检测狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者和健康者外周血CD19+B细胞中未剪接型X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1 unspliced,XBP1u)和剪接型X盒结合蛋白1转录因子(X-box binding protein 1spliced,XBP1s)mRNA的表达,并探讨XBP 1在LN患者的临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术检测65例LN患者和30名健康对照组外周血CD19+B细胞中XBP1u、XBP1s的表达水平,用流式细胞术检测外周血中CD19−CD138+浆细胞/CD19+B细胞比例,分析LN患者XBP1表达与B细胞亚群及临床相关指标的相关性。结果(1)LN组CD19+B细胞活动期组中XBP1u mRNA的表达水平为(0.078±0.034),高于健康对照组的(0.035±0.011)(P<0.05)、高于稳定期组的(0.049±0.016)(P<0.05);LN组CD19+B细胞活动期组中XBP1s mRNA(0.076±0.037),高于健康对照组的(0.022±0.010)(P<0.05)、高于稳定期组的(0.043±0.017)(P<0.05);(2)LN组中CD19−CD138+浆细胞/CD19+B细胞比例活动期组为(0.059±0.024),显著高于健康对照组的(0.034±0.011)(P<0.01)、活动组(0.059±0.024)高于稳定组的(0.073±0.036)(P<0.05);(3)LN患者XBP1u、XBP1s表达与CD19−CD138+浆细胞/CD19+B细胞比例呈正相关(r值分别为0.138、0.036),与抗双链DNA抗体、系统性红斑狼疮疾病活动性指数评分值呈正相关(r值分别为0.417、0.058),与血红蛋白、补体C3呈负相关(r值分别为−0.559、−0.219)。结论(1)LN患者外周血单个核细胞中XBP1u、XBP1s mRNA在活动组中表达量较健康组增加,且与系统性红斑狼疮疾病活动性指数评分值及抗双链DNA抗体呈正相关;(2)XBP 1在LN患者B细胞中表达升高,与浆细胞明显相关,提示XBP 1可能通过促进B细胞分化而参与LN的发病。

剪切型X盒结合蛋白1在单侧输尿管结扎小鼠肾间质纤维化中的作用（英文）

剪切型X盒结合蛋白1(spliced X-box binding protein 1,XBP1S)是内质网应激关键信号分子。有研究表明XBP1S在肾脏系膜细胞具有抗氧化应激和抗凋亡作用,而氧化应激是肾纤维化发生发展重要因素。缬沙坦(valsartan)具有改善肾纤维化作用。本研究旨在探讨valsartan能否通过XBP1S进而影响肾间质纤维化发展。C57BL/6J小鼠行左侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)制作肾纤维化模型,valsartan组于造模前1 d起每天给予valsartan(20 mg/kg)灌胃,UUO组和对照组给予等容积生理盐水灌胃,于手术后第7天处死动物,取左侧肾。HE、Masson和天狼星红(Sirius red)染色观察肾间质纤维化;免疫组化染色观察XBP1S在肾间质表达;Western blot检测XBP1S、纤维连接蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、BAX和BCL2蛋白水平;实时荧光定量PCR检测NADPH氧化酶亚基p47-phox与p67-phox m RNA水平。结果显示,与对照组相比,UUO组XBP1S蛋白水平明显降低,valsartan明显升高UUO小鼠XBP1S蛋白水平;HE、Masson和Sirius red染色结果显示valsartan明显改善UUO小鼠肾间质纤维化;Western blot结果显示valsartan明显降低UUO小鼠fibronectin、BAX/BCL2、α-SMA蛋白水平。实时荧光定量PCR结果显示:UUO组p47-phox与p67-phox m RNA水平明显较对照组升高,相比较于UUO组,valsartan明显降低UUO小鼠p47-phox与p67-phox m RNA水平。以上结果提示,XBP1S蛋白水平下调与UUO模型的肾间质纤维化有关,其机制可能与XBP1S抗氧化应激相关。

微RNA-204-5p、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1在新生儿肺炎血清中的表达

目的 探讨微RNA-204-5p(miR-204-5p)、蛋白锌指E盒结合同源盒蛋白1(ZEB1)在新生儿肺炎(NP)病儿血清中的表达变化及其在病情评估及预后预测中的临床价值。方法 选取2021年10月至2022年5月张家口市妇幼保健院收治的NP病儿80例为NP组,另选取同期该院出生的健康新生儿80例为对照组。检测血清miR-204-5p、ZEB1、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)及C反应蛋白(CRP)水平并比较;采用Pearson法分析NP病儿血清miR-204-5p、ZEB1水平及其与临床指标的相关性;应用受试者操作特征(ROC)曲线分析miR-204-5p、ZEB1及二者联合预测NP不良预后的价值。结果 NP组血清miR-204-5p水平(0.47±0.16比1.01±0.21)、血氧饱和度[(83.99±6.15)%比(95.32±6.74)%]显著低于对照组,血清ZEB1[(4.76±0.71)ng/L比(2.15±0.36)ng/L]、CK、CK-MB[(46.25±12.52)U/L比(23.22±9.64)U/L]及CRP水平[(18.09±4.29)mg/L比(3.31±0.71)mg/L]均显著高于对照组(P<0.05)。重症组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度显著低于轻症组,血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于轻症组(P<0.05)。血清miR-204-5p与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈负相关(r=-0.33、-0.30、-0.40,P<0.05),与血氧饱和度呈正相关(r=0.41,P<0.05);血清ZEB1水平与CPIS评分、CK-MB及CRP水平呈正相关(r=0.28、0.37、0.44,P<0.05),与血氧饱和度呈负相关(r=-0.36,P<0.05);血清miR-204-5p与ZEB1水平呈负相关(r=-0.56,P<0.05)。预后不良组血清miR-204-5p水平、血氧饱和度低于预后良好组(P<0.05),血清ZEB1、CK、CK-MB及CRP水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。ROC曲线显示,miR-204-5p对NP不良预后预测的AUC为0.89,截断值为0.47,其灵敏度、特异度分别为95.12%、72.41%;ZEB1对NP不良预后预测的AUC为0.92,截断值为5.16,其灵敏度、特异度分别为87.80%、86.21%;二者联合对预后预测的AUC为0.99,明显高于二者单独诊断,其灵敏度、特异度分别为97.56%、94.83%。结论 miR-204-5p在NP病儿血清中低表达,ZEB1在NP病儿血清中高表达,均与NP病情严重程度有关,二者联合对NP不良预后具有较高的预测价值。

E盒结合锌指蛋白2对AsPC-1细胞增殖和EMT的影响

目的探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对AsPC-1胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法按照胰腺癌细胞中转染物不同,将细胞分为4组,分别是si-NC、si-ZEB2、pcDNA3.1、pcDNA3.1-ZEB2。TCGA数据库分析ZEB2在胰腺癌组织与癌旁胰腺组织中的表达差异及其与胰腺癌患者预后的关系,并利用Westernblot检测ZEB2在AsPC-1胰腺癌细胞和正常胰腺上皮细胞HPNE中的表达差异。采用qRT-PCR、Westernblot检测ZEB2小干扰RNA(si-ZEB2)及过表达质粒(pcDNA3.1-ZEB2)的转染效率。CCK-8、克隆形成、划痕和Transwell实验检测ZEB2对AsPC-1细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR和免疫荧光实验检测ZEB2对AsPC-1细胞中EMT标志物表达的影响。利用生物信息学网站预测与ZEB2有靶定作用的miRNAs并构建ZEB2的蛋白-蛋白互作网络(PPI)。结果ZEB2在胰腺癌组织和AsPC-1胰腺癌细胞中高表达(P<0.05),且其高表达与胰腺癌患者的较差预后相关。qRT-PCR、Westernblot结果表明si-ZEB2和pcDNA3.1-ZEB2能够有效的转染到AsPC-1胰腺癌细胞中(P<0.05)。与si-NC组相比,si-ZEB2组中AsPC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力受到抑制,EMT上皮标志物E-cadherin表达增加、间质标志物Vimentin表达减少(P<0.05)。pcDNA3.1-ZEB2组中AsPC-1细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和EMT标志物得到了与上述相反的结果(P<0.05)。共预测到与ZEB2有靶定作用的miRNAs 77个,与ZEB2作用密切的蛋白有10个。结论ZEB2在胰腺癌组织和细胞中高表达且其高表达与胰腺癌患者的较差预后相关,ZEB2作为一种促癌因子,能够促进AsPC-1胰腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭和EMT进程。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

血清微小RNA-199a-3p、E盒结合锌指蛋白1水平对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入术后预后的预测价值

目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)对急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后预后的预测价值。方法选取2021年5月至2022年5月秦皇岛市第二医院接收的行PCI术治疗的113例ACS患者为观察组,根据观察组患者PCI术后1年内是否发生主要不良心血管事件(MACE),分为MACE组26例和非MACE组87例,同期健康体检者106例为对照组。检测血清miR-199a-3p、ZEB1水平,比较MACE组和非MACE组临床资料,Pearson分析患者血清miR-199a-3p和ZEB1水平相关性,多因素Logistic分析影响ACS患者PCI术后发生MACE的影响因素,ROC曲线分析血清miR-199a-3p、ZEB1对ACS患者PCI术后发生MACE的预测价值。结果与对照组相比,观察组血清miR-199a-3p水平较低,ZEB1水平较高(t=13.709、25.641,P<0.05);在ACS患者中miR-199a-3p与ZEB1呈负相关(r=-0.421,P<0.05);ACS患者PCI术后较PCI术前血清miR-199a-3p水平高,ZEB1水平低(t=4.820、6.040,P<0.05);MACE组与非MACE组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、左心室射血分数、miR-199a-3p、ZEB1比较,差异有统计学意义(t=3.310、2.717、3.947、7.068、6.544,P<0.05);LDL-C、ZEB1水平是ACS患者PCI术后MACE的危险因素,左心室射血分数、HDL-C、miR-199a-3p水平是ACS患者PCI术后MACE的保护因素;miR-199a-3p、ZEB1联合预测ACS患者PCI术后MACE的曲线下面积为0.947,优于单独预测(Z=1.970、2.791,P<0.05)。结论ACS患者血清中miR-199a-3p、ZEB1水平呈负相关,两者均对ACS患者PCI术后MACE有预测价值,两者联合的预测价值更高。

急性心肌梗死患者血清中剪切型X-盒结合蛋白1表达与糖尿病及其他临床因素的相关性

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者入院24 h内血清中剪切型X-盒结合蛋白1(Spliced x box binding protein 1,XBP-1S)浓度与患者基本资料、临床指标及影像学指标的相关性。方法按XBP-1S血清浓度中位数164.7 pg/ml,将AMI患者86例分成2组:低表达组(<164.7 pg/ml,n=43)和高表达组(≥164.7 pg/ml,n=43),收集患者基本资料,临床资料和冠状动脉造影影像学资料进行组间比较。XBP-1S血清浓度与资料间的相关分析;结果组间比较发现高表达组糖尿病患病率显著高于低表达组(P <0.05);高表达组与低表达组两组冠状动脉粥样硬化病变血管分支数构成比有相关关系(P <0.05);XBP-1S血清浓度与血管的分支数呈正相关。结论在糖尿病患病率高的患者组中AMI起病急性期内血清中XBP-1S可能表达增高明显,并且与病变血管的分支数呈正相关。

血清剪切型X-盒结合蛋白1水平与急性心肌梗死急诊经皮冠状动脉介入治疗后心肌灌注损伤的相关性研究

目的探讨血清剪切型X-盒结合蛋白1(XBP-1S)水平与急性心肌梗死(AMI)急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后发生心肌灌注损伤的关系。方法回顾性分析2018年1月至2020年1月期间本院急诊接受PCI治疗的150例AMI患者病历资料,依据PCI 6 h后是否发生心肌灌注损伤,将入选者分为发生组与未发生组,比较两组一般资料及检测实验室指标,重点分析PCI治疗前血清XBP-1S水水平与患者心肌灌注损伤的关系。结果全部150例AMI患者,经PCI治疗6h后,发生心肌灌注损伤69例,发生率为46.00%;发生组血清MPO[93.27(87.23,103.72)AUU/L]和XBP-1S[180.03(157.44,203.01)pg/ml]水平均高于未发生组[81.30(75.55,86.25)AUU/L]和[148.31(139.28,162.25)pg/ml],差异有统计学意义(U=7.136、6.846;P均<0.001);组间其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,治疗前血清MPO和XBP-1S水平与AMI患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤有关,各指标过表达可能是AMI患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤的风险因子(OR>1,P<0.05)。ROC曲线结果显示,治疗前血清髓过氧化物酶MPO和剪切型X-盒结合蛋白1(XBP-1S)水平单独及联合预测AMI患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤风险的曲线下面积(AUC)>0.80,预测价值较理想,且以治疗前血清MPO和XBP-1S的cut-off值分别为85.980 AUU/L和159.023 pg/ml时,预测价值最佳。结论 AMI患者PCI前血清XBP-1S水平与PCI后心肌灌注损伤有关,可能是患者经PCI治疗后发生心肌灌注损伤的风险因子,对预测患者心肌灌注损伤发生风险有一定价值。

2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1和泛素化特异性蛋白酶22表达水平与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系

目的检测2型糖尿病患者血清E盒锌指蛋白1(ZEB1)和泛素化特异性蛋白酶22(USP22)基因的表达水平,分析两者与糖脂代谢及胰岛素抵抗的关系。方法选择2020年6月至2023年6月苏州大学附属第一医院诊治的120例2型糖尿病患者为研究对象(糖尿病组),同时选择同期在该院进行体检的120例健康者作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平;Pearson法分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的相关性,及两者与体重指数(BMI)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(ISI)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)相关性;多元线性回归分析2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平的影响因素。结果糖尿病组患者的BMI、TG、TC、FPG、FIns、HOMA-IR、ZEB1 mRNA、USP22 mRNA水平明显高于对照组,ISI、HOMA-β明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关分析显示,2型糖尿病患者血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平正相关(r=0.425,P<0.001);血清ZEB1 mRNA和USP22 mRNA表达水平均与FPG、FIns、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),均与ISI、HOMA-β呈负相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,FIns升高、ISI降低是血清ZEB1 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);FPG升高是USP22 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05)。结论2型糖尿病患者血清中ZEB1 mRAN和USP22 mRAN表达具有正相关关系,且两者与部分糖脂代谢和胰岛素抵抗指标具有相关性。

X盒结合蛋白1转染神经干细胞移植帕金森大鼠黑质中相关递质及核蛋白的表达

背景:既往研究发现,X盒结合蛋白1基因可以转染至神经干细胞中并稳定过表达X盒结合蛋白1,转染后的神经干细胞移植对脑梗死的治疗作用优于普通神经干细胞。目的:通过测定转染后神经干细胞移植对帕金森大鼠模型黑质内单胺类递质和α-突触核蛋白水平的影响,研究转染后的神经干细胞移植对帕金森病的治疗作用。方法:将27只帕金森病大鼠随机数字表法均分为3组。对照组侧脑室内移植PBS,神经干细胞组移植空白神经干细胞悬液,转染组移植X盒结合蛋白1基因修饰神经干细胞悬液。分别于移植后7,14,21,28d对各组大鼠进行诱导旋转实验观察神经功能;Westernblot检测α-突触核蛋白水平;黑质切片后免疫组化染色测酪氨酸羟化酶(+)神经细胞。结果与结论:转染组大鼠黑质内α-突触核蛋白表达量降低,酪氨酸羟化酶(+)神经细胞数高于神经干细胞组和对照组,且大鼠旋转实验中旋转行为改善。表明在帕金森病中,X盒结合蛋白1转染的神经干细胞分化为多巴胺能神经元的分化率高,转染后可降低α-突触核蛋白的聚集,从而改善帕金森症状起到治疗目的。

人类X盒结合蛋白1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌E.coliBL2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的蛋白经透析袋复性后进行蛋白质定量,再以此蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,末次免疫后心脏取血,采用ELISA法检测抗血清效价;免疫印迹和免疫组化法检测兔抗XBP1u血清的特异性.结果:XBP1u蛋白为包涵体表达,包涵体裂解后经过纯化、复性进行免疫,得到抗血清的效价大于1∶64000,免疫印迹结果出现特异Mr33×103XBP1u条带,免疫组化法在兔肝细胞中成功检测到XBP1u的表达.结论:成功表达和纯化人XBP1u蛋白,并得到高特异性、高效价兔抗XBP1u多克隆抗体.

X盒结合蛋白1在高迁移率族蛋白B1诱导内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨活化的X盒结合蛋白1(XBP1)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,将其分为正常对照组、HMGB1刺激组和慢病毒干扰+HMGB1刺激组(即XBP1基因被沉默后加入HMGB1)。采用RT-PCR检测剪切型XBP1(s XBP1)的基因表达水平,Western blot检测Caspase-3的蛋白表达水平,细胞荧光染色检测内皮细胞凋亡。结果与正常对照组比较,HMGB1刺激组s XBP1的基因表达水平增加,Caspase-3的蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率明显增加(P均<0.05);与正常对照组比较,慢病毒干扰+HMGB1刺激组s XBP1的基因表达水平无明显改变,Caspase-3的蛋白表达水平、细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与HMGB1刺激组比较,慢病毒干扰+HMGB1刺激组s XBP1的基因表达水平降低,Caspase-3的蛋白表达水平降低,细胞凋亡率降低(P均<0.05)。结论 XBP1对HMGB1诱导内皮细胞凋亡至关重要。

内质网应激通路需肌醇酶1α/X盒结合蛋白1在中性粒细胞弹力蛋白酶诱导的气道黏液分泌中的作用

目的·探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)反应在中性粒细胞弹力蛋白酶(neutrophil elastase,NE)诱导人气道上皮细胞黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)分泌中的作用及机制。方法·培养人气道上皮细胞HBE16,分别给予活性氧(reactive oxygen species,ROS)抑制剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate,4-PBA)预处理,或分别转染需肌醇酶1α(inositol-requiring kinase 1α,IRE-1α)小干扰RNA(siRNA)、X盒结合蛋白1(X-boxbinding protein 1,XBP-1)siRNA,再予以NE刺激;同时设单纯NE组和空白对照组。试剂盒检测ROS的生成水平;Westernblotting检测干预后ERS相关信号分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,pPERK)、活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、磷酸化IRE-1α(pIRE-1α)及XBP-1蛋白表达量的变化;实时荧光定量PCR检测剪切的XBP-1(XBP-1s)mRNA水平;ELISA和免疫荧光检测MUC5AC在各组细胞中的蛋白表达情况。结果·与空白对照组相比,NE刺激24 h后细胞ROS含量增加,GRP78、ATF6、pPERK及pIRE-1α蛋白水平均显著升高(均P<0.05),XBP-1s mRNA及蛋白表达也明显增加(均P<0.05),同时MUC5AC蛋白表达增加(均P<0.05);NAC及4-PBA预处理后均使上述ERS相关蛋白表达较单纯NE组降低(均P<0.05),MUC5AC蛋白水平降低(均P<0.05);转染IRE-1αsiRNA或XBP-1 siRNA,细胞中MUC5AC蛋白表达也较单纯NE组明显降低,同时XBP-1s mRNA及蛋白表达也有明显下降(均P<0.05)。结论·NE通过产生ROS引起ERS反应,诱导MUC5AC蛋白表达及分泌增加,ERS通路IRE-1α/XBP-1在其中发挥着一定的作用。

转录因子X盒结合蛋白1参与视网膜色素上皮抗氧化防御机制

【目的】视网膜色素上皮(RPE)的氧化损伤在年龄相关性黄斑变性(ARMD)的发病机制中起着核心作用。本研究旨在探讨内质网应激及其重要的转录因子X盒结合蛋白1(XBP1)在丙烯醛引起的RPE氧化损伤中起到的作用,从而为阐明ARMD的发病机制提供思路。【方法】用75μmol/L丙烯醛分别处理人视网膜色素上皮细胞系(ARPE-19)2~24 h,观察内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及XBP1的表达。用XBP1 si RNA转染细胞,下调XBP1蛋白水平,用Western blot检测抗氧化基因Nrf2、SOD2在蛋白水平的表达;用DCF染色观察细胞活性氧产物(ROS)的产生;用TUNEL染色观察细胞凋亡改变。细胞用XBP1 si RNA或对照si RNA预处理后,加入丙烯醛,检测RPE细胞的凋亡情况。7只XBP1^(flox/flox)小鼠,一眼视网膜下注射Cre腺病毒,对侧眼视网膜下注射GFP腺病毒作对照。1周后取眼球。其中3只小鼠用TRIzol提取RPE的RNA,用实时RT-PCR法,检测XBP1的下游基因ERdj4和p58IPK在RNA水平的表达。另4只小鼠眼球作视网膜冰冻切片,观察腺病毒在视网膜下腔的表达,用免疫荧光染色法检测XBP1以及抗氧化基因Nrf2和SOD2在RPE的表达。【结果】丙烯醛分别处理RPE细胞2 h和4 h,GRP78的表达明显增加。处理6 h XBP1蛋白激活。XBP1表达的下调伴有抗氧化基因Nrf2和SOD2表达的减少,细胞内ROS的增加,并诱发细胞的凋亡。敲低XBP1以后丙烯醛对细胞的毒性作用明显增加。通过视网膜下注射Cre腺病毒成功转染XBP1^(flox/flox)小鼠RPE。与对照组相比,转染Cre腺病毒的小鼠RPE内的XBP1蛋白表达明显减少,RPE内的ERdj4和p58IPK RNA水平显著下调;抗氧化基因Nrf2和SOD2表达明显减少。【结论】丙烯醛作用于RPE细胞,激活内质网应激以及转录因子XBP1。抑制XBP1引起RPE内抗氧化基因表达的减少,ROS的产生增加,并且增加丙烯醛的细胞毒性。XBP1参与RPE细胞内抗氧化应激防御机制。

X-盒结合蛋白1的生理及病理生理学作用

X-盒结合蛋白1(XBP-1)是未折叠蛋白反应的重要组分,有剪接型XBP-1(XBP-1S)和非剪接型XBP-1(XBP-1U)两种形式。当细胞处于内质网应激状态时,XBP-1由活化转录因子6(ATF6)诱导,经IRE1α非传统剪接,转录有功能的XBP-1S,活化未折叠蛋白反应。XBP-1是一种重要的转录因子,对细胞生长和分化具有重要调控作用,并与人类多种疾病的发生和发展相关。

转录因子X盒结合蛋白1转染对神经干细胞在缺氧环境下grp78、EDEM表达及抗凋亡能力的影响

目的将X盒结合蛋白1基因以重组腺病毒为载体转染胚鼠海马神经干细胞,观察其在缺氧环境下是否可以使移植后干细胞内grp78、EDEM表达增加以及对干细胞抗凋亡能力的影响。方法取孕16d SD大鼠胚鼠的海马组织进行神经干细胞的分离、克隆、nestin免疫荧光检测,以及传代和扩增。将重组腺病毒Ad-XBP1-EGFP质粒转染胚鼠海马神经干细胞,得到基因修饰后的胚鼠海马神经干细胞。选取未转染的神经干细胞标记为对照组、未转染组;选取转染后的神经干细胞标记为转染组。未转染组和转染组用CoCl2诱导缺氧,24h后WesternBlot检测3组神经干细胞中xbp-1,grp78,EDEM,bcl-2及bax表达,流式细胞术检测NSCs和XBP1-NSCs的凋亡情况。结果在缺氧条件下,与未转染组相比,转染组的grp78表达增加,EDEM表达水平上升,bcl-2水平上升,而bax水平下降(P<0.05);转染组神经干细胞凋亡程度较未转染组减轻(P<0.05)。结论可以利用重组腺病毒作为载体成功将X盒结合蛋白1基因导入胚鼠海马神经干细胞中;转染后的神经干细胞在缺血缺氧条件下grp78、EDEM水平上升,抗凋亡能力较普通神经干细胞明显增加。

X盒子结合蛋白1对肾小管上皮细胞脂质代谢的影响研究

目的明确拼接型和非拼接型X盒子结合蛋白1对肾小管上皮细胞脂质代谢的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞,采用脂质体2000转染拼接型和非拼接型XBP-1质粒,培养48h后,免疫细胞化学和Western blot检测XBP-1表达,反转录PCR检测脂肪酸合成酶和乙酰辅酶A羧化酶mRNA表达,免疫细胞化学检测脂肪分化相关蛋白表达,油红O检测细胞内脂滴。结果 HKC细胞转染XBP-1拼接型和非拼接型质粒48h后,免疫细胞化学和Western blot证实XBP-1蛋白均明显升高。而拼接型XBP-1质粒转染上调了FASN和ACC mRNA表达,细胞内ADRP表达升高,细胞内脂滴增多。非拼接型XBP-1质粒对FASN、ACC mRNA,ADRP和细胞内脂滴未产生影响。结论拼接型XBP-1上调可导致肾小管上皮细胞脂质代谢关键酶升高和细胞内脂质沉积,可能是多种肾脏脂质沉积疾病的调控因子之一。

行为学训练对缺血性脑损伤大鼠脑组织X盒结合蛋白1表达的影响

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后对细胞核转录因子X盒结合蛋白1（XBP1）表达的影响,探讨穿梭箱行为学训练对脑缺血再灌注大鼠脑组织XBP1的调节作用及机制.方法：应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,训练组于造模1d后开始给予穿梭箱训练,采用免疫组织化学检测不同时间点大脑皮质内XBP1的表达.结果：正常对照组大鼠大脑皮质内XBP1少量表达,缺血再灌注后高于正常对照组,训练组大脑皮质内XBP1阳性表达较缺血再灌注组明显增多.结论：穿梭箱训练上调脑缺血诱导的XBP1表达,对脑缺血再灌注大鼠皮质神经元的具有保护作用.

内质网应激相关因子X-盒结合蛋白-1在人体肝癌组织中的表达

目的研究内质网应激(ERS)相关因子X-盒结合蛋白(XBP)-1在肝癌组织中的表达情况,以此证实肝癌演进中是否存在ERS反应的活化。方法病理学诊断确定的45例肝癌组织、15例癌旁组织和15例正常肝组织,采用逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹法检测XBP-1 mRNA和蛋白表达。结果 RT-PCR结果表明,肝癌组织中XBP-1 mRNA表达(0.444 6±0.035 7)显著高于癌旁组织(0.421 8±0.033 8)、正常肝组织(0.402 7±0.026 9)(P<0.05)。Western印迹结果表明肝癌组织中XBP-1蛋白的表达量显著高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.05)。结论肝癌发生及发展过程中存在ERS反应的激活。