前体mRNA剪接及剪接调节因子SR蛋白和Tra2蛋白

在高等真核生物中,前体mRNA的剪接及其调节是一个复杂的、由多因子参与的过程,它对基因的正常功能的发挥起着重要的作用,任何一种剪接调节因子的异常变化均有可能导致疾病的发生。因此,研究参与前体mRNA剪接调控的相关因子的功能及作用机制,对前体mRNA剪接机制的阐明,无疑是相当必要的。本文着重介绍了两类重要的mRNA剪接调节蛋白——SR蛋白和Tra2蛋白的研究近况,以期对前体mRNA剪接机制的研究的重要性和复杂性有更多的了解。

上皮细胞剪接调节因子-1真核表达载体的构建及表达

目的构建人内皮细胞剪接因子-1真核表达载体pcDEF3-ESRP1,并观察其在HeLa细胞的表达。方法以HeLa细胞cDNA为模板,用RT-PCR方法扩增ESRP1全编码区基因片段,将其连接入真核表达载体pcDEF3,并通过酶切及测序进行鉴定;通过脂质体介导法将真核表达载体pcDEF3-ESRP1转染至HeLa细胞,Western blot检测外源性ESRP1蛋白在HeLa细胞中的表达。结果 RT-PCR扩增得到人ESRP1 cDNA片段,重组质粒经酶切鉴定和DNA序列分析确定得到真核表达载体pcDEF3-ESRP1;Western blot实验证实转染重组质粒的HeLa细胞存在外源性的人ESRP1表达。结论成功构建人ESRP1真核表达载体pcDEF3-ESRP1,为进一步研究ESRP1的生物学功能奠定了实验基础。