焦磷酸显色法检测PCR产物及酶活性（英文）

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学领域的一项具有划时代意义的技术,但定量PCR产物或测定能生成焦磷酸的酶活性仍需要新技术的发展。本文提供了一种PCR产物定性及定量检测方法(Color PCR kit)及其用途;该方法通过焦磷酸(pyrophosphate,PPi)显色测定PCR的副产物PPi。利用试剂盒中的试剂与PPi反应,最终生成物为甲暨(formazan),呈红色。根据显色现象(红色)判断PCR的阳性结果,由目测实现PCR的定性检测;或通过测定490 nm处的吸光度值定量检测PCR过程中生成的副产物PPi的含量,定量检测PCR产物的生成量;目测情况下Color PCR kit可检测到2.5 ng水平的PCR产物,用紫外分光光度计可检测到低限为1 pg;Color PCR kit法比琼脂糖凝胶电泳检测法(低限为4 ng)灵敏。Color PCR kit还可用于连接酶和转移酶活性的测定。