副干酪乳酪杆菌Glory LP16对氨苄青霉素导致BALB/c小鼠肠道菌群紊乱的恢复作用

利用动物模型评价不同浓度副干酪乳酪杆菌对肠道菌群失调的改善作用,并且研究剂量效果。将60只BALB/c小鼠分成5组,通过灌胃氨苄青霉素构建肠道菌群紊乱的模型,同时将副干酪乳酪杆菌Glory LP16以浓度为区分依据,分为对照组、模型组、低剂量组(1.6×10^(6)CFU/只)、中剂量组(1.6×10^(7)CFU/只)和高剂量组(1.6×10^(8)CFU/只),测量小鼠体质量变化,收集小鼠的结肠组织和粪便样本进行长度测量、组织病理学分析、肠道屏障、肠道通透性、肠道微生物群分析以及短链脂肪酸测定。结果表明,与模型组相比副干酪乳酪杆菌Glory LP16喂养组显著增加双歧杆菌、乳杆菌等有益菌的相对丰度,恢复结肠组织结构,增加肠道屏障相关基因的表达,提高短链脂肪酸含量且在中剂量条件下能够很好地维持肠道通道通透性,保持肠道完整性,恢复氨苄青霉素导致的BALB/c小鼠肠道菌群紊乱。

乳酸盐与渗透胁迫对干酪乳酪杆菌Zhang的损伤机理及保护措施

目的:探究乳酸盐与渗透压胁迫对干酪乳酪杆菌Zhang的抑制作用并寻求解决方案。方法:分别使用乳酸钠、乳酸铵与氯化钠对菌体营造有机盐胁迫与渗透压胁迫,测定完全抑制浓度并绘制耐渗透曲线,通过测定菌体密度、活菌数、细胞损伤来观察LCZ受到的生理损伤与相容性溶质的保护效果。通过分批培养与恒定pH分批培养探究渗透压升高的关键因素,通过稀释发酵液以达到降低渗透压的效果,测定稀释后样品菌体密度、活菌数、干重得率的变化。结果:乳酸铵由于自身特性对LCZ具有强烈抑制作用;乳酸钠对LCZ的抑制作用较为温和,对LCZ起到的主要抑制作用是高渗抑制。L-脯氨酸对高渗环境下LCZ生物量积累及细胞活性均有显著保护作用,最优添加量为2 g/L。稀释发酵液处理对恒定pH补料培养菌体密度与活菌数的提升效果显著,最终发酵液OD_(600nm)与活菌数可达到19.68±0.429与(3.439±0.110)×10^(10)CFU/mL,分别是未稀释处理的1.61倍与1.46倍。结论:L-脯氨酸能够在一定程度上缓解高渗下LCZ的活性损伤。通过稀释发酵液处理降低发酵后期渗透压,能极大地提升发酵水平及细胞活性,研究结果为工业化生产及应用提供参考。

基于基因组测序分析3株不同来源副干酪乳酪杆菌的黏附特性及糖代谢途径

副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)ZY-1来源于西藏灵菇,L.paracasei S-NA5与L.paracasei S-NB分离自新疆老酸奶。本研究通过体外评价菌株的表面特性和黏附性能,结合全基因组测序,比较分析3株菌株黏附作用相关基因的差异性。菌株S-NB的胃肠道耐受能力和黏附Caco-2细胞性能均优于S-NA5和ZY-1。3株菌均含有2个胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)合成基因簇,其中菌株ZY-1的EPS合成基因簇1与S-NA5和S-NB差别较大。同时预测到脂磷壁酸合成相关基因以及蛋白类黏附素的相关结构域,S-NB菌株的黏附蛋白基因编码产物的二级结构预测分析结果表明,11种黏附蛋白的二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主。另外,在3株菌中发现完整的乳糖和半乳糖、低聚果糖和菊糖以及母乳低聚糖代谢途径,呈高度保守。

副干酪乳酪杆菌PC-01不同表型菌落的基因组分析

目的:探究副干酪乳酪杆菌PC-01经高密度发酵后,不同表型菌落的基因组差异。方法:采用第2代测序技术,对高密度发酵的10株具有不同表型特征的副干酪乳酪杆菌PC-01分离株进行全基因组测序,通过比较基因组学方法揭示这10株分离株之间的差异。结果:10株副干酪乳酪杆菌PC-01分离株的基因组大小为2.69~2.83 Mb,GC含量为46.50%~46.64%,CDs数目为2793~3406个,不同菌落的基因组大小、GC含量存在较小差异。功能注释结果显示不同菌株编码碳水化合物、蛋白质代谢以及参与氨基酸及其衍生物合成和降解的基因数量及种类均存在差异。基于核心基因构建系统发育树,发现具有相似菌落形态的菌株在同一分支。单核苷酸多态性(SNPs)结果表明:每两个相同菌落形态的不同分离株存在相同的突变位点,这也进一步证实菌落形态与基因型相关联。分析发现10株分离株中均存在糖基转移酶(eps J、pbp F、pon A等)及ABC蛋白家族(yhe S、bce B、bce A、pcr A和uvr A等)相关基因发生非同义突变,使菌株在高密度发酵过程中,能更好地适应环境而存活下来。菌落PC-01-3和PC-01-4与其它菌落形态具有明显差异,lta S基因发生非同义突变。脂磷壁酸合酶(Lta S)的缺乏会导致细菌表现出细胞分裂受损和生长缺陷,这可能是导致菌落形态差异的主要原因。结论:从全基因组水平完成了副干酪乳酪杆菌PC-01的10个分离株的比较分析,解析了同一菌株高密度发酵后不同表型菌落之间的差异,为副干酪乳酪杆菌PC-01的后续研究提供数据支持。

副干酪乳酪杆菌Glory LP16对调节小鼠肠道菌群功能的影响

为探究副干酪乳酪杆菌Glory LP16调节肠道菌群的功能,该实验3组小鼠分别灌胃1.6×10^(6)、1.6×10^(7)、1.6×10^(8) CFU副干酪乳酪杆菌Glory LP16,测定干预14 d后小鼠体质量、肠道菌群、结肠组织病理学变化、肠道屏障、肠道通透性及短链脂肪酸含量。结果显示,干预14 d后,各组小鼠粪便中双歧杆菌、乳杆菌含量均显著增加(P<0.05),产气荚膜梭菌含量显著下降(P<0.05),而肠杆菌和肠球菌的含量无显著变化(P>0.05);高剂量组副干酪乳酪杆菌Glory LP16显著降低血清脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)含量和D⁃乳酸含量(P<0.05),显著上调黏蛋白1、黏蛋白2和紧密连接蛋白(Claudin⁃1、Occludin、ZO⁃1)基因的表达水平,粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量显著增加,且小鼠肠道无明显水肿和炎症细胞浸润,对小鼠生长无不良影响。

副干酪乳酪杆菌K56表面蛋白及其黏附性能分析

本实验以副干酪乳酪杆菌K56(Lacticaseibacillus paracasei K56)为研究对象,研究其在胃肠道环境中的耐受性、黏附特性等益生性能,通过激光共聚焦显微镜观察和液相色谱-质谱分析,探讨副干酪乳酪杆菌K56表面蛋白在介导肠道细胞黏附中的作用。副干酪乳酪杆菌K56在人工胃液中处理3 h后存活率达(88.78±3.31)%,转接入肠液中继续培养2 h存活率高达(91.57±2.24)%,其胃肠道耐受性好,抑菌活性和抗氧化能力强。副干酪乳酪杆菌K56对二甲苯的表面疏水性为(26.24±0.53)%,5 h的自凝聚率达到(28.47±1.19)%。去除表面蛋白的副干酪乳酪杆菌K56对黏蛋白、胶原蛋白和Caco-2细胞的黏附率降低,质谱鉴定发现副干酪乳酪杆菌K56的表面蛋白包括LPXTG基序蛋白和多种兼职蛋白,推测副干酪乳酪杆菌K56表面蛋白在黏附过程中发挥重要作用,可介导与胞外基质、肠上皮细胞的特异性黏附。本研究结果可为副干酪乳酪杆菌K56在乳品制造、膳食补充剂等领域进一步开发和利用提供理论研究依据。

副干酪乳酪杆菌甲基化转移酶突变体响应渗透胁迫的代谢组学研究

DNA甲基化是一种重要的表观遗传调控机制,与细菌的许多生理功能密切相关。该研究采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术,针对渗透胁迫环境比较分析了副干酪乳酪杆菌Zhang甲基化转移酶突变体及其野生型的代谢组,探究其显著差异代谢物质。通过进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析等多变量统计分析,同时结合数据库检索和质谱信息匹配,共筛选到10个显著差异代谢物(P<0.05)。这些代谢产物主要包括皮质醇、18-羟基皮质酮、脱氧肌苷、甜菜碱醛以及糖衣去氧胆酸等代谢物质,涉及到类固醇激素生物合成、嘌呤代谢、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢以及初级胆汁酸代谢等多条代谢通路。该研究结果有助于揭示DNA甲基化介导副干酪乳酪杆菌Zhang适应渗透胁迫环境的分子机制。

干酪乳酪杆菌Zhang在酸和低温胁迫下“活的非可培养”态的诱导研究

为探究干酪乳酪杆菌Zhang(Lacticaseibacillus casei Zhang)在酸和低温胁迫下能否形成活的非可培养(viable but non-culturable,VBNC)状态。该实验将L.casei Zhang置于不同pH值(2.5、3、4、5、6)的MRS液体培养基中,在4℃条件下进行酸和低温胁迫,不同时间点取样,然后采用平板计数法、荧光显微镜和流式细胞术3种方法对胁迫后的菌体进行活性测定。实验结果显示,低温条件下L.casei Zhang在pH值为2.5、3、5、6胁迫下未获得VBNC态;L.casei Zhang在pH 4的MRS液体培养基低温胁迫120 d获得了VBNC态,革兰氏染色观察到VBNC态细胞长度变短变弯曲。该研究为L.casei Zhang VBNC态的机理研究提供了一定的参考依据。

副干酪乳酪杆菌PC-01复配剂量对发酵乳产品特性的影响

副干酪乳酪杆菌PC-01是1株分离自我国拉萨地区自然发酵酸牦牛乳中,且具有益生特性的菌株。该试验以菌株PC-01为研究对象,探究了该菌株不同起始添加量对发酵乳发酵及贮藏期间产品特性的影响,探究该菌株是否适合复配于发酵乳中。结果表明,PC-01的添加不会加快产品到达发酵终点的时间。同时,PC-01的添加对发酵乳发酵及贮藏期间的pH值及滴定酸度无显著性影响(P>0.05),且保持活菌数持续上升。贮藏结束时,PC-01低、中、高剂量组活菌数分别由(6.27±0.022)、(6.74±0.027)、(7.008±0.004)lg CFU/mL上升到(7.84±0.010)、(8.13±0.013)、(8.22±0.004)lg CFU/mL。此外,PC-01的添加可以提高发酵乳的黏度,在贮藏14 d后添加PC-01组发酵乳黏度显著高于对照组(P<0.05)。菌株PC-01对发酵乳质构的影响与添加量有关,在添加中、低剂量时,产品与对照组的质构特征更为相近。综上,副干酪乳酪杆菌PC-01的添加在不改变发酵乳基本特性的同时,可以提高贮藏期间产品的稳定性,并保持有效的活菌数,适合应用于发酵乳中。该研究为该菌株发酵乳产品的开发提供依据,为实际应用奠定基础。

干酪乳酪杆菌Zhang的益生特性及其在发酵乳制品中的应用研究

益生菌因具有维护肠道健康,调节免疫力及预防和(或)治疗人体慢性疾病等功效,故在基础研究、产业转化和临床医学中备受重视。受益于公众对益生菌认知度的不断提升,其产品已流行于日常消费场景。发酵乳制品作为益生菌发挥健康功效的重要产品形式,兼备菌株益生作用与乳制品健康功效,具有重要应用价值。本文以一株在科学循证和产业转化领域均有深远影响力的益生菌——干酪乳酪杆菌Zhang为例,重点阐述其益生特性及在发酵乳制品中的应用研究,为后续深入解析该菌株功能属性提供理论借鉴依据。

干酪乳杆菌Zhang分类学地位及潜在益生相关基因分析

干酪乳杆菌Zhang是本研究团队筛选出的具有优良特性的益生乳酸菌菌株。传统方法难以区分干酪乳杆菌及其近缘物种。因最近乳杆菌的系统分类进行了更新,故导致Zhang的分类地位需重新确认。本研究利用比较基因组学方法分析Zhang的分类学地位、耐药基因、致病性基因和环境抗性基因特征,探究该菌株基因组上携带的细菌素基因簇和潜在益生基因。比较基因组学结果显示Zhang与副干酪乳酪杆菌模式菌株ATCC 25302^(T)的平均核苷酸一致性值是98.49%,通过分类学数据库比对和系统发育分析确认Zhang的分类学地位为副干酪乳酪杆菌。Zhang的基因组不含有耐药基因、致病性基因和环境抗性基因。在其基因组上注释到核心肽、Lan T转运和引导切割及免疫或运输功能等Carnocin细菌素基因簇。此外,Zhang的基因组编码了谷胱甘肽合成、核黄素合成、黏附因子和分泌胞外多糖等潜在益生基因。本研究更新了Zhang的分类学地位为副干酪乳酪杆菌,揭示其不含有耐药基因、致病性基因及环境抗性基因,并注释到多个潜在益生基因,为该菌株进一步开发及产业化提供了数据参考。

干酪乳酪杆菌Zhang VBNC态在不同复苏基质中的代谢物组学研究

利用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术(UPLC-Q-TOF MS)检测分析了干酪乳酪杆菌Zhang(Lacticaseibacillus casei Zhang,L.casei Zhang)VBNC态在液体MRS培养基、脱脂乳二种复苏基质中的代谢物差异。结果显示:在正离子和负离子模式下分别检测到2735种和1717种代谢物质。采用Metaboanalyst 5.0及SIMCA 14.1软件对代谢物进行分析,结合P<0.05、差异倍数>2和VIP≥1相结合的条件,共筛选出差异代谢物22种,归属于氨基酸、糖类、维生素、脂类和嘌呤类5大类,其中,甘氨酸、L-谷氨酰胺、低聚木糖和烟酰胺等18种代谢物在液体MRS培养基中的相对含量显著高于脱脂乳,其余4种(S-核糖基-L-高半胱氨酸、乳糖、核黄素和(R)-3-羟基丁酸酯)代谢物在脱脂乳中相对高些,并从成分角度研究分析了这些代谢物在L.casei Zhang VBNC态复苏中的可能作用,为初步探讨L.casei Zhang VBNC态的复苏机理提供了参考。

热灭活副干酪乳酪杆菌N1115对海马神经细胞发育的影响

目的探究热灭活副干酪乳酪杆菌N1115对原代培养的海马神经细胞发育的影响。方法出生24h内Wistar乳鼠经断头后剥离海马组织,立即进行原代海马神经细胞分离培养。培养7d后的原代海马神经细胞被随机分为空白对照组(C组)、热灭活副干酪乳杆菌N1115干预组(N组),C组不做干预,仅加入DMEM高糖培养液,N组加入经热灭活处理的N1115菌悬液,两组细胞于37℃,5%CO_(2)的细胞孵箱分别培养6、24h,培养结束后MTT法检测海马神经细胞活力,RT-PCR和Westernblot测定原代海马神经细胞的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、γ-氨基丁酸A型受体α1亚型(γ-aminobutyric acid type A receptorα1,GABAAα1)、γ-氨基丁酸B型受体1亚型(γ-aminobutyricacidtypeBreceptor1,GABAb1)和5-羟色胺受体1A(HTR1-A-5-hydroxytryptamine receptor 1A Gene,5HT1A)的mRNA及蛋白表达情况。结果与C组相比,干预6、24 h时,原代海马神经细胞的细胞活率明显上升(P<0.05);干预6 h时BDNF基因表达量升高(P<0.01),GABAb1的基因表达量降低(P<0.01)。干预6、24h时,BDNF、5HT1A的蛋白表达量均升高(P<0.05),GABAAα1、GABAb1的蛋白表达量均降低(P<0.01)。结论热灭活副干酪乳酪杆菌N1115可以显著提高海马神经细胞的活率,增加BDNF的分泌和5HT1A的表达,并抑制GABAAα1、GABAb1的表达,展现出调控神经细胞发育和神经递质功能表达的潜力。

植物乳植杆菌J26组合物对高脂饮食诱导肥胖小鼠的减肥作用研究

胞外多糖是一类来源广泛的生物活性分子,具有调节肠道菌群的潜力。文章利用单因素及响应面优化实验确定副干酪乳酪杆菌(副干酪乳杆菌)JY56胞外多糖的最优发酵条件:发酵温度为30℃,发酵时间为26 h,发酵pH为6.0。进一步制备了植物乳植杆菌J26与副干酪乳酪杆菌JY56胞外多糖组合物(J26&JY56 Exopolysaccharide Composition, JEC)。为了研究组合物JEC对肥胖的影响,采用高脂饮食诱导建立肥胖小鼠模型。经饮食干预10周后,结果表明,组合物JEC减缓体重增加的效果显著(P<0.05),缓解了由于长期摄入高脂饮食造成的肝脏脂肪堆积,基本恢复到正常水平。其中,JEC组小鼠血清中的TNF-α(301.77±9.87) ng/L、IL-6(225.39±10.09) ng/L、IL-1β(21.92±1.58) ng/L和IFN-γ(180.90±8.52)ng/L含量明显低于高脂饮食诱导的肥胖模型小鼠组(HFD)(P<0.05)。此外,JEC组的肝细胞中未观察到明显的脂滴空泡和坏死细胞,以及炎症细胞浸润现象。植物乳植杆菌J26与副干酪乳酪杆菌JY56胞外多糖组合物JEC具有对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的减肥作用。

副干酪乳酪杆菌N1115的巨噬细胞免疫活化产物促进原代海马神经细胞发育

目的初步探究副干酪乳酪杆菌N1115活菌介导免疫途径对体外培养的原代海马神经细胞发育的影响。方法以适宜浓度的副干酪乳酪杆菌N1115活菌悬液为实验组,以肽聚糖(PGN)、脂多糖(LPS)为阳性对照,以RPMI1640培养基为空白对照,分别与RAW264.7细胞共培养,获得共培养上清液及细胞总RNA,测定细胞因子的表达及分泌情况。各组上清液经离心后以适当的比例与原代海马神经细胞共培养,收集共培养上清液,提取细胞总RNA,测定神经细胞突触发育相关基因的表达情况;原代海马神经细胞免疫荧光染色后对突触前后膜相关蛋白——突触后膜致密蛋白95(PSD95)、突触生长蛋白(SYP)及神经细胞成熟标志物——微管相关蛋白2(MAP-2)、双皮质素(DCX)进行定量分析,对神经细胞的形态发育进行测量。结果与空白对照相比,N1115活菌干预RAW264.7细胞后,细胞免疫功能激活,白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA相对表达量分别提高7471%、926%,分泌量分别提高184.16 pg/mL、12320.76 pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);N1115活菌的激活能力强于PGN,但弱于LPS,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照相比,N1115活菌-RAW264.7细胞共培养上清液干预原代海马神经细胞后,10%上清干预组原代海马神经细胞活率提升19.25%,差异有统计学意义(P<0.05),突触前后膜SYP、PSD95 mRNA相对表达量分别提高137%、159%,差异有统计学意义(P<0.05)。N1115活菌上清干预组神经细胞的突起总长度(489.88μm)较空白对照组(381.51μm)增加,胞体面积(2092.22μm^(2))、轴突长度(184.78μm)、突起总长度、平均突起长度(108.38μm)、分支点(4.84个)较两阳性对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论副干酪乳酪杆菌N1115可激活巨噬细胞的免疫调节功能,从而促进神经细胞的形态发育以及突触功能。

利用副干酪乳酪杆菌SCFF20高效生物合成纳米硒颗粒:一种潜在的亚硒酸盐生物转化工厂(英文)

【目的】硒(Se)是人体必需的微量元素,在维持人体生理代谢中起着至关重要的作用。在硒的各种形态中,纳米硒颗粒(selenium nanoparticles,Se NPs)被发现具有较高的生物利用度和较低的毒性。本研究拟筛选一株能将亚硒酸盐高效合成纳米硒颗粒的益生菌菌株。【方法】从14株潜在益生菌中筛选出一株能有效将亚硒酸钠转化为Se NPs的耐硒菌株副干酪乳酪杆菌SCFF20。利用扫描电子显微镜X射线能量色散谱仪(scanning electron microscopy coupled with energy-dispersive X-ray,SEM-EDX)、动态光散射(dynamic light scattering,DLS)、X射线衍射仪(X-ray diffractometer,XRD)、拉曼光谱(Raman spectroscopy)和傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)对副干酪乳酪杆菌SCFF20产生的Se NPs进行纯化、冷冻干燥和系统表征。【结果】SEM-EDX分析表明,Se是生物纳米硒颗粒的主要成分。合成的Se NPs呈球形、多分散、平均粒径约为500.62 nm。XRD图谱和拉曼光谱证实所制备纳米硒颗粒的生物无定形性质。FTIR分析证明蛋白质、胞外多糖和脂质包覆在Se NPs表面。电感耦合等离子体发射光谱(inductively coupled plasma-optical emission spectroscopy,ICP-OES)测得Se NPs的还原率为91.42%。【结论】本研究证实了副干酪乳酪杆菌SCFF20作为纳米硒生产益生菌的潜力,可作为安全生产生物源纳米硒的生物工厂以便用于营养补充剂和功能食品。

母婴群体乳杆菌组成及优势种副干酪乳酪杆菌的遗传差异性

肠道中的有益细菌影响人体健康,一般认为早期是通过母乳喂养构建了婴儿肠道菌群。目前对不同人群的母婴群体间有益细菌组成差异及是否具有族群特异性证据很少。【目的】探究不同民族母婴群体间乳杆菌的组成及占优势种——副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)的垂直传递和遗传差异,为开发个性化的益生菌株提供理论基础。【方法】从我国3个不通婚的民族共39对健康母婴对分离乳杆菌,基于基因外重复回文序列PCR分型技术(repetitive extragenic palindromic PCR,rep-PCR)结合功能基因(gro EL基因)序列鉴定菌株,对最常见种L.paracasei的83株菌采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)进行种群遗传差异分析。【结果】三个民族母婴对乳杆菌种类组成和数量存在差异,共分离原乳杆菌属的菌株945株,根据最新修订的分类学隶属于4属1种。汉族母婴以黏膜黏液乳杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus,20.07%)、L.paracasei(16.54%)和奶酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus casei,11.90%)为优势种,和田维吾尔族母婴以L.casei(13.55%)、L.paracasei(12.69%)和唾液宿主关联乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius,11.47%)为优势种,海南黎族母婴以口腔黏液乳杆菌(Limosilactobacillus oris,24.55%)、L.paracasei(15.85%)和加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri,10.87%)为优势种。83株L.paracasei划分为11个rep-PCR群,基于MLST等位基因谱也分为11群、31个序列型(sequence type,STs),不同民族菌株的ST存在特异性,同源重组事件很少;来自同一对母子的L.paracasei分离株有相同的STs,同一种族母婴群体的L.paracasei遗传相似性更高。【结论】不同民族母婴群体乳杆菌菌群组成存在明显差异,来源相同的L.paracasei菌株遗传相似性更高,支持菌株水平上的垂直传递和种族间的特异性。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品对小鼠免疫功能的影响

目的研究杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115(Lacticaseibacillus paracasei N1115)发酵乳饮品对小鼠免疫脏器指数、免疫球蛋白、巨噬细胞、NK细胞、B淋巴细胞及T淋巴细胞的影响。方法将SPF级6~8周龄雄性Balb/c小鼠随机分为对照组以及杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组,每组15只,连续灌胃30 d,进行免疫脏器指数测定、免疫球蛋白测定、碳廓清能力测定、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定、脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、血清溶血素测定和抗体细胞生成实验。结果杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组的小鼠碳廓清指数显著高于对照组(t=3.9262,P=0.0007;t=6.0001,P<0.0001;t=5.3144,P<0.0001),腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率显著高于对照组(t=3.8121,P=0.0015;t=4.2572,P=0.0004;t=4.9763,P=0.0005)。结论杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品具有增强小鼠非特异性免疫力的功能,可为副干酪乳酪杆菌N1115的开发利用提供科学依据。

抑制副溶血性弧菌的乳酸菌筛选鉴定及其生物学特性研究

目的:丰富功能性乳酸菌资源库,寻找具有副溶血性弧菌拮抗能力的优良乳酸菌出发菌株。方法:采用牛津杯抑菌试验筛选具有广谱抑菌潜力的乳酸菌菌株,通过生长代谢性能、胃肠液耐受性能、耐盐性、抗生素敏感性、抑菌谱等指标探讨其生物学特性。结果:以副溶血性弧菌为指示菌,筛选得到6株乳酸菌,经形态学、生理生化、分子生物学鉴定,分别归类于类干酪乳酪杆菌、发酵黏液乳杆菌和植物乳植物杆菌。其中,类干酪乳酪杆菌A1抑菌活性最佳,24 h内菌落总数超过1×10~9 CFU/mL,发酵液pH值稳定在4.1左右,经人工模拟胃液处理2 h后,存活率为54.61%,再经人工模拟肠液处理8 h后,存活率仍可达45.46%,经10%NaCl胁迫处理24 h后,活菌总数>1×10~5 CFU/mL。同时,类干酪乳酪杆菌A1细菌素粗提物对13种致病菌呈良好抑菌活性,具有广谱抑菌潜力,且对8种常见抗生素未见耐药性。结论:筛选得到了能够抑制副溶血性弧菌且生物学特性优良的类干酪乳酪杆菌A1。

副干酪乳酪杆菌ZY-1内源性质粒分析及其表达系统的构建与应用

高效稳定的乳杆菌表达载体的构建是实现其菌种改良和个性化菌株开发的关键。本研究从副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei) ZY-1中分离出4个内源性质粒并进行功能分析。通过将pLPZ3与pLPZ4的复制子rep,与pNZ5319质粒的氯霉素乙酰转移酶报告基因cat、pUC19的复制子ori构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体pLPZ3N与pLPZ4N,进一步加上启动子Pldh3和mCherry红色荧光蛋白,获得表达载体pLPZ3E与pLPZ4E。pLPZ3与pLPZ4质粒大小分别为6 289 bp和5 087 bp,GC含量分别为40.94%和39.51%。2个穿梭载体可成功转化至乳酪杆菌属中,pLPZ4N的转化效率(5.23×10^(2)-8.93×10^(2)CFU/μg)略高于pLPZ3N。乳酸菌表达载体pLPZ3E与pLPZ4E转化至副干酪乳酪杆菌S-NB后,成功获得了mCherry红色荧光蛋白的表达。以P_(ldh3)为启动子构建的重组表达载体pLPZ4E-lacG转化得到的重组菌,其β-半乳糖苷酶酶活性高于野生型菌株。本研究成功构建了大肠杆菌-乳酪杆菌穿梭载体和表达载体,为乳酪杆菌基因工程菌株的研发提供了新的工具。