柠檬草精油对副溶血性弧菌的抑菌活性及机制

目的:探究柠檬草精油(LG-EO)对副溶血性弧菌的抑菌活性和机理。方法:通过测定LG-EO对副溶血性弧菌的最低抑制浓度(MIC)、时间-杀灭分析、上清液中AKP活性、电导率和蛋白质泄漏量、细胞形态、膜电位、呼吸链脱氢酶活力及胞内DNA的含量和结构等,研究LG-EO对副溶血性弧菌的抑菌活性和机制。结果:LG-EO对副溶血性弧菌的MIC范围80~120μg/mL,在80~280μg/mL处理浓度范围,其杀灭效果随浓度和时间的增加而提高,240μg/mL LG-EO处理10 min即可灭活全部副溶血弧菌。与高于MIC的LG-EO共培养,副溶血弧菌细胞壁、膜的完整性被破坏,导致上清液中AKP活性、蛋白质含量和电导率上升,细胞边界模糊和内容物流失。菌体细胞膜电位、呼吸链脱氢酶和ATP酶活性等显著降低。基因组DNA的核酸电泳和紫外吸收光谱提示,DNA在LG-EO作用下流失严重并与主要成分柠檬醛发生互作。结论:柠檬草精油对副溶血性弧菌有较强的抑菌作用,LG-EO通过破坏细胞壁、膜构造,干扰细胞能量代谢,造成DNA流失或变性等快速杀灭副溶血性弧菌。本研究为探明LG-EO的抑制致病性弧菌机理奠定良好的基础,在水产品加工业中具有广泛的应用潜力。

宁德市南美白对虾副溶血弧菌的分离与药敏试验

为给宁德市南美白对虾(Penaeus vannmei)养殖病害提供精准用药依据,从7个海水养殖场南美白对虾体内分离病原菌,通过形态学观察、生理生化和16s rRNA鉴定,确定其分类地位,并进行药物敏感试验。结果表明,分离的9株病原菌在TCBS琼脂培养基中菌落均呈蓝-绿色,通过革兰氏染色镜检可见为革兰氏阴性菌,呈棒状、弧状、卵圆状,无芽孢。在氧化酶反应、葡萄糖、赖氨酸、鸟氨酸、甘露醇、6%盐胨水、8%盐胨水、动力等8项试验中,结果呈阳性,确定为副溶血弧菌。9株副溶血弧菌对青霉素、新霉素、四环素等3种药物耐受比例较高,对恩诺沙星、呋喃唑酮、万古霉素等6种药物均高度敏感。

舍曲林对副溶血弧菌的抑制作用

近年来关于副溶血弧菌环境和海产品分离株出现抗生素耐药性的报道日益增多,亟需寻找替代传统抗菌剂抗菌的策略以控制副溶血弧菌的污染和感染。本研究通过最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测定、生长曲线的绘制,以及运动性实验和结晶紫染色实验,并利用透射电镜观察副溶血弧菌形态的变化,来评估以舍曲林为代表的5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)类药物对副溶血弧菌的抑制活性及抗生物被膜形成能力。同时,通过检测与分析舍曲林对副溶血弧菌毒力基因转录的影响,探究舍曲林对副溶血弧菌的减毒作用。结果显示,舍曲林对副溶血弧菌的MIC为32μg/mL,MBC为64μg/mL,能够损伤其细胞膜和细胞壁,MIC下导致其干瘪皱缩,MBC下引起其涨裂、胞内物质外泄;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的泳动和群集运动,抑制率分别为88.6%和71.5%;舍曲林呈浓度依赖性地抑制副溶血弧菌的生物被膜形成,当舍曲林质量浓度分别为8、16、32和64μg/mL时,对副溶血弧菌生物被膜形成的抑制率分别为66.9%、79.5%、88.3%和89.3%;亚抑制浓度的舍曲林能显著抑制副溶血弧菌的毒力基因fliA、ompW和aphA的表达,抑制率分别为71.9%、88.7%和77.3%。实验结果表明,舍曲林对副溶血弧菌具有良好的抗菌活性与抗生物被膜形成能力,在不影响副溶血弧菌生长的浓度下,可降低其毒力基因的转录水平。

水产动物致病性副溶血弧菌双重PCR检测方法的研究

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是多种水产养殖动物的主要病原菌,尤其是可引起凡纳滨对虾幼虾呈毁灭性死亡。本研究基于gyrB和toxR两种基因序列设计2对特异性引物,建立一种副溶血弧菌快速、准确的双重PCR检测方法,扩增目的片段大小分别为285 bp和368 bp。结果表明在同一PCR反应体系中副溶血弧菌可同时扩增大小分别为285 bp和368 bp的2种基因片段,两种引物对4种其他水产动物病原菌无交叉反应;敏感性检测结果显示,该双重PCR最低能检测8.867 2×103 CFU/mL菌体浓度的副溶血弧菌,对副溶血弧菌模板DNA的检出极限为0.029 3 mg/L;对发病中国对虾糠虾幼体、水产品及虾池养殖用水进行双重PCR检测,呈阳性反应的样品可分离出优势生长的副溶血弧菌。该实验所建立的基于gyrB和toxR两种基因的双重PCR检测方法可用于副溶血弧菌引起的水产动物疾病的快速诊断及分子流行病学的调查研究。

一株副溶血弧菌噬菌体VPp1的分离鉴定及裂解性能

为探究副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的生物防治方法,从水产品市场处污水中分离出一株副溶血弧菌噬菌体VPp1。并借助噬菌斑形态、电镜、酶切等技术对其进行了分类鉴定,同时测定了其裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线以研究其裂解性能。分类鉴定结果表明,其核酸是线型双链DNA,大小在15 kb左右。具有一个正二十面体的头部,头部直径大约为44 nm,无尾,属盖噬菌体科(Tectivirus);裂解性能研究结果表明,其在双层平板上培养12 h可形成中心清亮的噬菌斑,周围有大而明显的晕环。最佳感染复数为0.0001,潜伏期为10 min,裂解量为90.3,是符合条件的潜伏期短裂解量大的理想噬菌体,可用作进一步的应用。

工厂化养殖杂色鲍致病菌副溶血弧菌的分离鉴定及其生理特性

从广东汕尾地区工厂化养殖的患病和死亡的杂色鲍(Haliotis diversicolor)及养殖海水中分离到3株优势菌,经回归感染试验,证实所分离的细菌为杂色鲍的致病菌。经形态、生理、生化等多项指标鉴定,该菌株为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),并经ATB微生物自动鉴定系统证实鉴定结果。在中国大陆,由副溶血弧菌使杂色鲍致病并大量死亡的事件,本文属首次报道。

副溶血弧菌ompA基因缺失株的生物学特性及致病性分析

[目的]外膜蛋白Omp A是一个多功能蛋白,在很多革兰氏阴性菌的环境适应性和致病性过程中发挥重要作用,而副溶血弧菌Omp A的功能尚未见报道。本试验旨在研究omp A基因(VPA1186)对副溶血弧菌生物学特性及致病性的影响。[方法]通过构建副溶血弧菌SH112株的omp A基因缺失株和互补株,开展对该基因在细菌生长特性、生物被膜形成、运动性、血清杀菌、细胞黏附、细胞毒性,组织载量以及小鼠致病性等相关生物学特性和致病性的影响研究。[结果]omp A的缺失不影响副溶血弧菌的生长速度、生物被膜形成能力和运动性。野生株和Δomp A的黏附和抗血清试验结果无显著差异。但Δomp A对Caco-2细胞的毒性作用显著低于野生株。小鼠染毒验结果显示,与感染野生株的小鼠相比,感染Δomp A的小鼠症状明显减轻,存活率更高,Δomp A在小鼠血液和肝脏中的带菌量显著低于野生株,而互补株的毒力恢复至野生株水平,表明omp A缺失能显著降低副溶血弧菌的毒力。[结论]omp A与副溶血弧菌的致病性相关,为潜在的毒力因子。

Western斑点印迹法检测致病性副溶血弧菌

目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的直接耐热溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH)进行分离纯化,建立Western斑点印迹法技术检测致病性副溶血弧菌的方法。方法:用直接耐热溶血毒素免疫小鼠得到特异性抗血清,利用棋盘方法确定免疫血清最佳工作浓度,并对致病性与非致病性副溶血弧菌分别进行特异性测定。结果:最佳免疫血清最佳工作浓度为1:3200;检测致病性副溶血弧菌为阳性,非致病性副溶血弧菌属呈阴性。结论:Western斑点印迹法技术可以特异性检测致病性副溶血弧菌,灵敏度高、操作简单,可用肉眼判定结果。

副溶血弧菌的致病性及检测方法

副溶血弧菌是沿海地区的一种嗜盐性细菌,其生长快,繁殖速度高,常通过感染多种海产品而引发人的食物中毒发生,近年来,由副溶血弧菌引起的食源性疾病日益增多,到目前为止,O3:K6型副溶血弧菌菌株已引起了亚洲、欧洲、美洲、非洲等多个国家的大流行。随着由副溶血弧菌引起疾病的规模不断增加和频发,人们对其也更加关注,各种检测方法逐渐取代传统的生化鉴定实验,尤其是在食品微生物检测、流行病学调查以及医院感染监控等方面发挥越来越重要的作用。本文就副溶血弧菌的基础特性,致病性及目前的检测方法作一综述。

副溶血弧菌感染性腹泻临床和耐药分析

目的了解副溶血弧菌感染性腹泻患者临床特征和病原菌耐药性。方法回顾性分析2016年4月至2018年10月首都医科大学附属北京同仁医院肠道门诊收治的330例副溶血弧菌感染性腹泻患者的临床特点及病原菌耐药性。结果副溶血弧菌感染性腹泻患者在青壮年组较中年组、老年组发病率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。副溶血弧菌感染性腹泻患者大便性状多为水样便(72.7%),其它症状依次为腹痛占77.3%,恶心占66.1%、呕吐占50.3%,发热占23.3%,脱水占总数的17.6%,里急后重占13.6%。330株副溶血性弧菌分离株对庆大霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、头孢曲松、氨苄西林/舒巴坦的敏感率均≥97.0%,对氨曲南敏感率仅为77.6%。结论青壮年是副溶血弧菌感染性腹泻的高发人群。副溶血弧菌感染性腹泻患者症状表现为水样便、腹痛、恶心、呕吐、发热、脱水、里急后重。副溶血弧菌对庆大霉素、左氧氟沙星、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、头孢曲松、氨苄西林/舒巴坦的敏感率高,对氨曲南敏感率较低。

副溶血性弧菌致病性及耐药性分析

目的了解宿州地区副溶血性弧菌的肠道感染情况。方法对两年中分离到的302株副溶血性弧菌进行溶血素和抗生素敏感性测定,并对患者的临床资料进行统计分析。结果两年中共检测急性腹泻患者的粪便标本3165份,检出副溶血性弧菌302株,检出率为9.5%。其中脲酶阳性48株,占副溶血性弧菌的15.9%。以7～9月副溶血性弧菌检出最多(252株),占副溶血性弧菌总检出数的83.4%。对302株副溶血性弧菌溶血素检测结果表明,耐热溶血素(TDH)阳性213株,占70.5%;不耐热溶血素(TRH)阳性43株,占14.2%。副溶血性弧菌对痢特灵(FR)的耐药率为66.3%,其次是氨苄西林(AMP),为61%。结论脲酶阴性与阳性副溶血性弧菌均有较强的致病性。

脲酶阳性副溶血弧菌实验研究

1980年以来,国外文献有报道脲酶阳性副溶血弧菌可致腹泻,但国内报道多为脲酶阴性的副溶血弧菌的研究,近年来我们在腹泻病原菌的检测中,发现了脲酶阳性的副溶血弧菌的存在,并有逐年增多的趋势,为了探讨该菌的致病性及与急性腹泻的关系,我们于1993年从急性腹泻患者中分离到42株副溶血弧菌。

副溶血弧菌胞外产物对中国对虾的致病性分析

１９９０年 ６－９月，从青岛上马镇对虾养殖场患败血症的中国对虾血淋巴内分离到副溶血弧菌２５－Ｃ菌株，利用平板玻璃纸覆盖技术，获得２５－Ｃ菌株的胞外产物（ＥＣＰ），进行成分分析和致病性研究。结果表明，副溶血弧菌２５－Ｃ菌株的胞外产物具有多种酶活性和溶血活性，是病原菌感染中国对虾的主要因素，单独注射感染即可导致中国对虾的严重发病至死亡，ＥＣＰ蛋白可以破坏中国对虾血清的体外杀菌活力，提高２５－Ｃ菌株对中国对虾的致病能力。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明，ＥＣＰ蛋白中含有２３条蛋白带。对具有溶血活性的蛋白组分进行热稳定性测试后，认为有两种溶血因子。经感染分析，发现其中具有热稳定性溶血活性和蛋白酶活性的两组蛋白对中国对虾具有明显的致病作用，可能是决定细菌毒力的主要因素。

2株副溶血弧菌不同盐度下致病性和毒力基因差异分析

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是常见的食源性致病菌和海水养殖动物致病菌,目前已知的毒力基因有tlh、tdh、trh、T3SS、pirA、pirB、toxR/S、orf8等。盐度是影响细菌基因表达的关键生态因子之一,为进一步探求副溶血弧菌的致病机理,对2株分别分离自海水和淡水养殖发病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中的副溶血弧菌在不同盐度下的生长速率、致病性进行检测,并用q-PCR方法对菌株毒力基因携带和表达情况进行定量研究。实验结果表明:海水菌株383生长速率快于淡水菌株V9,但菌株383在生长稳定期的细菌浓度明显低于菌株V9;菌株383对凡纳滨对虾的致病性明显高于菌株V9,前者的48 h半致死浓度(LD50)低于后者2个数量级;2株副溶血弧菌皆携带毒力基因tlh、T3SS1和pirA/B,但未检测到tdh、trh、T3SS2、toxR/S和orf8。部分毒力基因表达量检测结果显示,菌株383和菌株V9均为vcrD1表达量最高,其次是pirA,vopD1表达量最低;4个毒力基因不仅在2菌株间的表达量差别较大,而且盐度对同一菌株不同毒力基因表达的影响也是不同的。2株副溶血弧菌的毒力与pirA和vcrD1的表达量呈正相关性。研究结果为探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据,同时也提示,淡水养殖凡纳滨对虾要防范副溶血弧菌输入的风险。

养虾池中1株副溶血弧菌的分离和鉴定

该研究从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养虾池的水体中分离得到一株致病菌,对其进行生理生化、16S rDNA鉴定,最终确定该致病菌株为副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)。采用该菌进行凡纳滨对虾浸染实验,结果表明:该菌的致病能力较强,在1×10^(5)cfu/mL的浓度下,出现附肢发红、肝胰腺肿大的症状。

副溶血弧菌耐药谱及其对头孢类药物抗性分析

目的探讨副溶血弧菌的耐药谱及其对头孢类药物的抗性。方法采用纸片扩散法检测98株副溶血弧菌的分离株对18种常见抗生素的耐药情况,对存在3代头孢类抗生素抗性的菌株进行分离,并对其进行产超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶的情况检测。结果 98株副溶血弧菌的分离株能够对12种抗生素产生明显的耐药性,其中阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩及氨苄西林最为显著。结论副溶血弧菌对抗生素的耐药谱较宽,在临床治疗过程中应引起注意,合理选用抗生素。

桐乡市2014—2015年感染性腹泻副溶血弧菌分离株检测分析

目的了解该市感染性腹泻副溶血弧菌主要血清型、携带毒力因子情况和耐药性情况。方法对2014—2015年期间的40株副溶血弧菌分离株进行血清凝集、毒力基因检测和耐药性分析。结果分离到3种血清型:O3:K6 22株(55%),O4:K8 12株(30%),O2:KUT 2株(5%),另外10%未分型;TDH阳性24株,阳性率60%,TRH阳性0株;对除碳青霉烯类和喹诺酮类外的6大类抗生素均有耐药性,其中对β-内酰胺类、叶酸代谢途径抑制剂及氯霉素的耐药性相对较高,对两种以上抗生素耐的有4株,占10%。结论该市副溶血弧菌感染性腹泻以O3:K6为主,毒力基因tdh阳性率较高,对六大类抗生素有耐药性,但耐药性不严重。

副溶血弧菌的致病性及其检验和测定

副溶血弧菌（ＶｉｂｒｉｏＰａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）通常存在于海湾和海岸线区域以及海产品中，其致病性很强，常引起人类食物中毒，而且比例很高，目前主要侧重于预防。商检检验和测定采用的是ＳＮ０１７３－９２标准，５ｄ－６ｄ才能出阳性结果，方法繁琐，费时费力，采用《北欧食品分析委员会方法》（ＮＭＫＬＮＯ１５６－１９９７，第二版），既可以快速定性定量，又可以同时检验霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻性弧菌，使我国水产品及其它食品出口欧盟更具有方法上的针对性。