功血宁Ⅱ号冲剂对诱发排卵大鼠卵巢白细胞介素-8表达的影响

[目的]观察功血宁Ⅱ号冲剂对诱发排卵大鼠卵巢白细胞介素-8(IL-8)表达的影响,探讨该药促进卵泡发育诱发排卵的作用机制。[方法]将未成年雌性大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和功血宁Ⅱ号高、低剂量组,分别给予蒸馏水、安坤赞育丸和功血宁Ⅱ号冲剂14d后,皮下注射妊马血清促性腺激素(PMSG)+人绒毛膜促性激素(hCG)制备诱发排卵的大鼠模型。分别在卵泡发育期和排卵前期处死动物摘取卵巢。常规制备卵巢切片,免疫组化法检测各组动物卵泡不同发育时期IL-8表达。[结果]功血宁Ⅱ号组在卵泡发育期和排卵前期IL-8的阳性细胞面积、阳性面积率、积分光密度、平均光密度均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),其中高剂量组的作用较低剂量组和阳性对照组显著。排卵前期各组的上述指标均明显高于相应卵泡发育期的各组(P<0.05或P<0.01)。[结论]功血宁Ⅱ号冲剂能够通过提高IL-8的表达,吸引和激活中性粒细胞,促进卵泡发育诱发排卵。

白介素1β在大鼠卵泡发育中表达及功血宁Ⅱ号冲剂的影响

[目的]观察白介素1β(IL-1β)在大鼠卵泡发育过程中的表达以及功血宁Ⅱ号冲剂对其表达的影响,探讨该药促进卵泡发育诱发排卵的作用机制。[方法]将未成年雌性大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和功血宁Ⅱ号高、低剂量组,分别给予蒸馏水、安坤赞育丸和功血宁Ⅱ号冲剂,14d后皮下注射妊马血清促性腺激素(PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(hCG)制备诱发排卵大鼠的模型。分别在卵泡发育期和排卵前期处死动物摘取卵巢,常规制备卵巢切片,免疫组化法检测各组动物卵泡不同发育时期IL-1β表达。[结果]IL-1β在模型对照组中的表达,排卵前期的阳性细胞面积、阳性面积率、积分光密度、平均光密度均显著高于卵泡发育期(P<0.05);功血宁Ⅱ号组在卵泡发育期和排卵前期IL-1β表达的上述指标均明显高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),排卵前期的上述指标均明显高于相应卵泡发育期(P<0.05或P<0.01),其中高剂量组的作用较低剂量组和阳性对照组显著。[结论]IL-1β在大鼠卵泡发育过程中均有表达并逐渐增强。功血宁Ⅱ号冲剂能够显著提高IL-1β的表达,通过其参与卵母细胞成熟,诱导卵巢排卵因子的产生,在卵泡破裂激发排卵过程中发挥作用,促进卵泡发育诱发排卵。

滋肾调冲法对大鼠外周血内皮祖细胞影响的实验研究

[目的]观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方对骨髓单个核细胞移植大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)数量的影响,探讨该法对骨髓EPCs的动员作用。[方法]受鼠雌性大鼠经137Cs全身照射后,从尾静脉输注雄性大鼠标记4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光的骨髓单个核细胞。受鼠随机分为移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组,另取未照射大鼠尾静脉输注等量培养液为假孕对照组。骨髓移植24 h后各组给予相应药物或等容积的生理盐水。受鼠造血重建后,各组均制备假孕模型。在黄体早中晚期各组处理1/3数的大鼠,眼内眦取血,流式细胞术检测外周血EPCs的数量。血液涂片,荧光显微镜观察DAPI标记细胞的分布。[结果]荧光显微镜下显示,移植各组黄体各期血液涂片可见DAPI标记细胞,且早期数量为多,功血宁Ⅱ号组尤为明显。各组黄体早期外周血EPCs数目最多,中期略有下降,晚期明显减少(P<0.05或P<0.01)。功血宁Ⅱ号组、乌鸡白凤丸组黄体各期EPCs数目较假孕对照组显著增多(P<0.05或P<0.01);功血宁Ⅱ号组早期较移植对照组和乌鸡白凤丸组显著增多(P<0.05)。[结论]滋肾调冲法能够动员骨髓EPCs,提高外周血中EPCs数量,对EPCs进一步归巢至卵巢黄体,促进黄体血管新生具有重要作用。

滋肾调冲法对诱发大鼠排卵相关细胞因子影响的研究

滋肾调冲法是针对功能性子宫出血（简称功血）患者中具有普遍意义的证型而确立的治疗法则，主要用于血止后调理月经周期，促进排卵，其代表方是功血宁Ⅱ号冲剂。经临床和实验研究表明，滋肾调冲法通过调节下丘脑—垂体-卵巢轴功能，具有促进卵泡发育和排卵的作用。

滋肾调冲法对骨髓内皮祖细胞促进黄体血管新生的影响

目的:观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方对骨髓内皮祖细胞(EPCs)促进黄体血管新生的影响,探讨该法健全黄体功能的作用机制。方法:建立大鼠骨髓移植假孕模型,随机分为移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组,另取未骨髓移植大鼠为假孕对照组。在黄体早中晚期,各组处理相应数目动物,摘取卵巢。采用PCR法检测黄体中供体雄鼠来源的Sry基因的表达;原位杂交法检测Sry基因阳性细胞;原位杂交合免疫组化双标染色,观察EPCs向血管内皮细胞分化情况;免疫组化法检测黄体微血管密度(MVD)。结果:骨髓移植各组的黄体中均检测到Sry基因和双标记阳性细胞,假孕对照组未见;Sry基因的表达量均显著高于假孕对照组(P<0.01);功血宁Ⅱ号组显著升高(P<0.05)。黄体MVD各组早期较少,中期显著增多,晚期明显减少(P<0.01);功血宁Ⅱ号组黄体中期MVD显著增多(P<0.01)。结论:滋肾调冲法能够将骨髓EPCs归巢于黄体,并分化为血管内皮细胞,使黄体MVD增加,促进黄体的血管新生,从而达到健全黄体功能的作用。

滋肾调冲法动员骨髓内皮祖细胞与VEGF、bFGF相关性的研究

目的:观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号动员骨髓内皮祖细胞(EPCs)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的相关性,探讨该法对骨髓EPCs的动员机制。方法:建立骨髓移植假孕大鼠模型,随机分为假孕对照组、移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组。在黄体早、中、晚期,流式细胞术检测外周血EPCs数量,ELISA法检测血清VEGF、bFGF水平,并对EPCs数量和VEGF、bFGF的水平以及VEGF、bFGF之间水平的变化进行相关分析。结果:各组黄体早期外周血EPCs、VEGF、bFGF水平最高,中期略有下降,晚期明显减少(P<0.01,P<0.05)。功血宁Ⅱ号组:黄体各期EPCs数目较假孕对照组显著增多(P<0.01);早期较移植对照组和乌鸡白凤丸组显著增多(P<0.05);黄体早、中期VEGF、bFGF水平较假孕对照组、移植对照组和乌鸡白凤丸组显著升高(P<0.01,P<0.05);黄体早期EPCs数量和VEGF、bFGF以及VEGF与bFGF之间水平变化均有相关性(P<0.05,P<0.01)。结论:滋肾调冲法动员骨髓EPCs的作用与其上调血清VEGF、bFGF水平密切相关。