滋肾调冲法对大鼠外周血内皮祖细胞影响的实验研究

[目的]观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方对骨髓单个核细胞移植大鼠外周血内皮祖细胞(EPCs)数量的影响,探讨该法对骨髓EPCs的动员作用。[方法]受鼠雌性大鼠经137Cs全身照射后,从尾静脉输注雄性大鼠标记4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光的骨髓单个核细胞。受鼠随机分为移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组,另取未照射大鼠尾静脉输注等量培养液为假孕对照组。骨髓移植24 h后各组给予相应药物或等容积的生理盐水。受鼠造血重建后,各组均制备假孕模型。在黄体早中晚期各组处理1/3数的大鼠,眼内眦取血,流式细胞术检测外周血EPCs的数量。血液涂片,荧光显微镜观察DAPI标记细胞的分布。[结果]荧光显微镜下显示,移植各组黄体各期血液涂片可见DAPI标记细胞,且早期数量为多,功血宁Ⅱ号组尤为明显。各组黄体早期外周血EPCs数目最多,中期略有下降,晚期明显减少(P<0.05或P<0.01)。功血宁Ⅱ号组、乌鸡白凤丸组黄体各期EPCs数目较假孕对照组显著增多(P<0.05或P<0.01);功血宁Ⅱ号组早期较移植对照组和乌鸡白凤丸组显著增多(P<0.05)。[结论]滋肾调冲法能够动员骨髓EPCs,提高外周血中EPCs数量,对EPCs进一步归巢至卵巢黄体,促进黄体血管新生具有重要作用。

滋肾调冲法对骨髓内皮祖细胞促进黄体血管新生的影响

目的:观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号方对骨髓内皮祖细胞(EPCs)促进黄体血管新生的影响,探讨该法健全黄体功能的作用机制。方法:建立大鼠骨髓移植假孕模型,随机分为移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组,另取未骨髓移植大鼠为假孕对照组。在黄体早中晚期,各组处理相应数目动物,摘取卵巢。采用PCR法检测黄体中供体雄鼠来源的Sry基因的表达;原位杂交法检测Sry基因阳性细胞;原位杂交合免疫组化双标染色,观察EPCs向血管内皮细胞分化情况;免疫组化法检测黄体微血管密度(MVD)。结果:骨髓移植各组的黄体中均检测到Sry基因和双标记阳性细胞,假孕对照组未见;Sry基因的表达量均显著高于假孕对照组(P<0.01);功血宁Ⅱ号组显著升高(P<0.05)。黄体MVD各组早期较少,中期显著增多,晚期明显减少(P<0.01);功血宁Ⅱ号组黄体中期MVD显著增多(P<0.01)。结论:滋肾调冲法能够将骨髓EPCs归巢于黄体,并分化为血管内皮细胞,使黄体MVD增加,促进黄体的血管新生,从而达到健全黄体功能的作用。

滋肾调冲法动员骨髓内皮祖细胞与VEGF、bFGF相关性的研究

目的:观察滋肾调冲法代表方功血宁Ⅱ号动员骨髓内皮祖细胞(EPCs)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的相关性,探讨该法对骨髓EPCs的动员机制。方法:建立骨髓移植假孕大鼠模型,随机分为假孕对照组、移植对照组、功血宁Ⅱ号组和乌鸡白凤丸组。在黄体早、中、晚期,流式细胞术检测外周血EPCs数量,ELISA法检测血清VEGF、bFGF水平,并对EPCs数量和VEGF、bFGF的水平以及VEGF、bFGF之间水平的变化进行相关分析。结果:各组黄体早期外周血EPCs、VEGF、bFGF水平最高,中期略有下降,晚期明显减少(P<0.01,P<0.05)。功血宁Ⅱ号组:黄体各期EPCs数目较假孕对照组显著增多(P<0.01);早期较移植对照组和乌鸡白凤丸组显著增多(P<0.05);黄体早、中期VEGF、bFGF水平较假孕对照组、移植对照组和乌鸡白凤丸组显著升高(P<0.01,P<0.05);黄体早期EPCs数量和VEGF、bFGF以及VEGF与bFGF之间水平变化均有相关性(P<0.05,P<0.01)。结论:滋肾调冲法动员骨髓EPCs的作用与其上调血清VEGF、bFGF水平密切相关。