吲哚胺加双氧酶的表达调控THP-1巨噬细胞的极化

目的研究吲哚胺加双氧酶(IDO)对巨噬细胞表型转化的影响。方法以10 ng/mL佛波酯诱导THP-1人单核细胞,建立分化的巨噬细胞模型,分别以100 U/mL IFN-γ和100 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激分化的THP-1细胞,获得M1型和M2型巨噬细胞,利用实时定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞术和Western blot法检测巨噬细胞HLA-DR、CC型趋化因子受体7(CCR7)、IL-12p35、IL-10、CXCR4和IDO的表达变化。采用细胞转染实验对分化的THP-1细胞进行IDO的过表达和针对IDO基因的siRNA干扰实验,检测其IL-12p35、CCR7、IL-10和CXCR4的表达变化。结果 IFN-γ可诱导THP-1细胞向M1型发生转化并上调IDO的表达。而在巨噬细胞内过表达IDO促进THP-1向M2型极化,沉默细胞内的IDO基因则导致THP-1细胞极化为M1型。结论 IDO表达可调控巨噬细胞极化。

胆酸盐、游离脂肪酸、黄体素对β-胡萝卜素-15,15′-加双氧酶活性的影响

用体外实验研究了胆酸盐、游离脂肪酸、黄体素对 β 胡萝卜素 15 ,15′ 加双氧酶 ( βCDIOX)活性的影响。结果表明 ,4和 8mmol·L -1的牛磺胆酸钠显著 (P <0 0 5 )或极显著 (P <0 0 1)促进 βCDIOX的活性 ,而且牛磺胆酸钠和胆酸对 βCDIOX活性的促进作用相近 ,脱氧胆酸钠的作用高于前两者 ,但差异不显著 (P >0 0 5 ) ;5mmol·L-1油酸对βCDIOX活性的促进作用显著高于对照 (P <0 0 5 ) ;软脂酸、硬脂酸对 βCDIOX活性无促进作用 ,亚油酸、亚麻酸能促进 βCDIOX活性 ,但差异不显著 (P >0 0 5 ) ;随着黄体素浓度的增加 ,βCDIOX活性逐步降低 ,黄体素生成的维生素A很少。

日粮V_A和油脂对肉鸡β-胡萝卜素-15及15'-加双氧酶活性的影响

通过饲养试验研究日粮VA和油脂对肉鸡β-胡萝卜素-15及15'-加双氧酶活性的影响。结果表明:无VA组的血清、肝脏VA水平低于对照组(P<0.01),小肠和肝脏βCDIOX活性显著高于对照组(P<0.05);硬脂酸组、豆油组肝脏VA水平低于对照组(P<0.01),豆油组的肠黏膜和肝脏βCDIOX活性高于对照组(P>0.05),硬脂酸组的肠黏膜βCDIOX活性低于对照组,肝脏βCDIOX活性高于对照组,但差异均不显著(P>0.05)。结果证实:日粮VA水平和油脂组成均不同程度的影响机体β-胡萝卜素-15及15'-加双氧酶活性,进而影响β-胡萝卜素的体内转化。

影响β-胡萝卜素-15,15’-加双氧酶活性的因素

类胡萝卜素具有抗氧化、提高动物繁殖机能、提高免疫应答、防癌、抗肿瘤、沉积于畜禽体内改善畜产品品质等作用。影响类胡萝卜素在体内转化的因素有很多 ,它们或者影响类胡萝卜素的吸收 ,进而影响类胡萝卜素的转化 ,或者直接影响β-胡萝卜素 -1 5 ,1 5’-加双氧酶 (β-Carotene dioxygenase,β CDIOX)的活性。关于对类胡萝卜素吸收的影响 ,前人已做过很多研究 ,而对影响类胡萝卜素转化的研究较少 ,所以作者主要对影响β-胡萝卜素的转化的因素进行综述。

人近端肾小管上皮细胞诱导表达吲哚胺2,3-加双氧酶的实验研究

目的了解培养的人近端肾小管上皮HK2细胞株吲哚胺2,3-加双氧酶(IDO)的诱导表达情况及其影响因素。方法实验分为不同浓度(0、500、1000、2000U/ml)γ-干扰素(IFN-γ)刺激培养组和IFN-γ2000U/ml刺激12、24、48、72h不同时点培养组,以10%胎牛血清DMEM培养基作为正常对照组。RT-PCR检测不同培养条件下HK2细胞IDOmRNA的表达,免疫细胞化学染色检测24h后HK2细胞IDO的表达,高效液相色谱法检测培养基中犬尿氨酸、色氨酸浓度。结果正常HK2细胞不表达IDOmRNA和IDO蛋白。不同浓度IFN-γ刺激后,HK2细胞IDO mRNA的表达呈剂量依赖性升高,与正常对照组相比差异显著(P<0.05),同时IDOmRNA表达还呈时间依赖性地增高,以48h为最佳刺激时间。免疫组化染色显示,经IFN-γ刺激24h后,HK2细胞IDO蛋白表达增强,高效液相色谱检测显示刺激组培养基上清中犬尿氨酸特异性代谢率升高,表明表达的IDO具有生物活性,并且其活性呈IFN-γ剂量依赖性地升高。结论IFN-γ刺激培养的HK2细胞IDO表达升高并具有活性,推测病理状态下人肾小管上皮细胞诱导表达的IDO有可能参与了肾小管-间质的病理损害过程。

白花丹参顺式还原酮加双氧酶基因的克隆、分子特征和表达调控分析

目的:获得白花丹参参与乙烯和多胺合成的顺式还原酮加双氧酶(acireductone dioxygenase,ARD)基因(命名为SmARD)序列,并进行生物信息学分析和初步的表达特性研究。方法:利用全长cDNA文库技术,从两年生白花丹参根中获得目的基因SmARD序列。利用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找该基因的开放读码框,prosite分析蛋白质的基本结构域。用半定量RT-PCR检测其在白花丹参幼苗根、茎、叶和成花中的表达情况。结果:得到688 bp的SmARD基因全长序列。具有一个591 bp的开放读码框,编码196个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量23.27 kDa。使用预测的SmARD蛋白序列在NCBI中进行蛋白保守域分析,发现SmARD与ARD/ARD′家族具有很高的同源性。半定量RT-PCR表明,SmARD在白花丹参幼苗根、茎、叶和成花等组织中均有转录水平的表达,但是在根部表达最强。水分亏缺处理3 d,150 mmol.L-1NaCl处理1 d,4℃低温处理1 d和100μmol.L-1ABA处理1 d均抑制SmARD的表达,100μmol.L-1茉莉酸甲脂(MJ)和10μmol.L-1乙烯利(ETH)处理1 d诱导SmARD的表达。结论:首次得到白花丹参的顺式还原酮加双氧酶(ARD)基因序列,为其参与白花丹参响应逆境和次生代谢产物合成的信号调节功能研究奠定了基础。

吲哚加双氧酶1抑制剂在恶性肿瘤治疗中的研究进展

近年来,免疫治疗已成为肿瘤治疗的新兴疗法,随着对肿瘤免疫微环境研究的不断深入,人们开始关注吲哚加双氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)这样一个介导肿瘤免疫逃逸的代谢酶。针对IDO1的小分子抑制剂在Ⅰ/Ⅱ期临床试验中联合PD-1免疫检查点抑制剂显示可以明显改善患者的反应率,然而,备受关注的一项Ⅲ期临床试验ECHO-301,IDO1抑制剂Epacadostat与抗PD-1抗体Pembrolizumab联合治疗进展期黑色素瘤却由于未能达到预期疗效而提前终止。鉴于Ⅰ/Ⅱ期临床试验取得的成功,针对IDO1小分子抑制剂的大量临床试验仍在进行中。文章主要针对进入临床试验阶段的IDO1小分子抑制剂在恶性肿瘤治疗中的研究进展、ECHO-301项目Ⅲ期临床试验失败的可能原因以及IDO抑制剂的临床应用前景进行综述。

水稻白叶枯病菌酸性还原酮加双氧酶的鉴定分析

酸性还原酮加双氧酶(ARD)催化很多原核和真核生物中的甲硫氨酸急救途径(MSP)倒数第二步。本研究鉴定了水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae(Xoo)中的酸性还原酮加双氧酶,命名为xard。Xoo菌株PXO99A、MAFF311018和KACC10331中的xard核苷酸序列完全相同。xard基因突变菌株在甲硫基腺苷(MTA)为唯一硫源时不能正常生长。这一结果证明Xard在MSP中起作用。xard突变体和野生型菌株PXO99A接种水稻IR24后病斑长度数据表明该基因突变对Xoo在水稻上的毒性没有影响。

同源扩增栀子藏红花素生物合成途径酶基因保守区

获得功能基因是对植物次生代谢产物代谢途径进行遗传操作的必要条件。通过引入脱氧次黄嘌呤碱基和分解引物,大幅度降低高简并度引物的简并程度,并优化PCR扩增体系和扩增条件,从栀子果实中成功扩增出藏红花素生物合成途径的两个关键酶——玉米黄素剪切加双氧酶(zeaxanthin cleavage dioxygenase,ZCD)和糖基转移酶(glucosyltransferase,GTase)基因的保守区段,分别长170 bp和250 bp。研究结果为今后获得全长基因,并应用于植物藏红花素生物合成途径的调控奠定了基础。

RNA m^(6)A甲基化修饰酶调控肿瘤的功能及其抑制剂的研究进展

RNA修饰在生命活动和疾病的发生和发展中发挥着重要的作用。氮6-甲基腺嘌呤(N~6-methyladenine,m^(6)A)修饰是信使RNA中广泛存在的甲基化修饰,是动态变化的。近年来在肿瘤中发现m^(6)A修饰酶和结合蛋白表达异常,可通过改变靶基因的RNA m^(6)A修饰水平来调控肿瘤的进展。该文综述了m^(6)A的去甲基化酶和甲基转移酶,包括α-酮戊二酸依赖的加双氧酶FTO(FTOα-ketoglutarate dependent dioxygenase)、AlkB同源蛋白5(AlkB homolog 5,ALKBH5),甲基转移酶样3(methyltransferase like 3,METTL3)在多种肿瘤中发挥的重要功能,以及m^(6)A修饰酶的小分子抑制剂的研究进展。

氧化应激对断奶仔猪色氨酸分解代谢的影响

旨在研究氧化应激对断奶仔猪色氨酸分解代谢产物及关键酶活性的影响。采用单因子试验设计,选用24头28±1日龄断奶长白×大白仔猪,分别饲养在24个猪栏中,经过预饲后随机分为3个处理组,每个处理组8个重复,每个重复1头猪。氧化应激组:仔猪腹腔注射10 mg.kg-1体质量Diquat,自由采食;正常对照组:仔猪腹腔注射无菌生理盐水,自由采食;采食配对组:仔猪腹腔注射无菌生理盐水,控制采食量与氧化应激组仔猪相同。所有仔猪自由饮水,试验期7 d。结果表明,与对照组和采食配对组相比,氧化应激组:(1)氧化应激降低了仔猪生长性能,极显著降低血清SOD(超氧化物歧化酶)(P<0.01)和GPx(谷胱甘肽过氧化物)活性(P<0.01),血清MDA(丙二醛)含量极显著增加(P<0.01);(2)氧化应激降低了血清Trp(色氨酸)水平,显著或极显著增加了血清Kyn(犬尿氨酸)含量(P<0.05或P<0.01)及Kyn/Trp比值(P<0.01),血清5-HT(5-羟色胺)含量显著增加(P<0.05);(3)氧化应激显著增加了肝脏TDO(色氨酸2,3-加双氧酶)总活性(P<0.05),全酶(P<0.05)和酶蛋白活性(P<0.05),对十二指肠IDO(吲哚胺2,3-加双氧酶)活性无显著影响。结果提示,Diquat诱导的氧化应激主要通过增强肝脏TDO活性来增加断奶仔猪色氨酸分解代谢。

芳香烃龙胆酸降解途径蛋白质组学的研究

芳香烃是一类重要的环境污染物,微生物降解是其主要的处理方法。研究显示降解过程中产生保守型和诱导型的各一组同工酶。目前,仅有保守型的龙胆酸加双氧酶(GDOI)及其下游片段被克隆。产碱假单胞菌NC IB9867(P25X)的突变株--SNZ28 GDO I被打断,在龙胆酸诱导的情况下,该突变株仍能检测到龙胆酸加双氧酶活性。采用二维蛋白电泳分析突变株SNZ28在有和没有龙胆酸诱导条件下的蛋白质表达差异。电泳结果显示了两者存在有15个蛋白点的差异。通过MALD I-TOF和Q-TOF分析,其中的12个蛋白质点与数据库中已知多肽片段有同源性。其中,P4点与青枯菌(Ralstonia species)龙胆酸1,2加双氧酶同源。该结果在蛋白质组学上证实了GDO II的存在。

嗜酸硫杆菌属硫氧化系统研究进展

硫化矿的酸溶解和化学氧化过程中(H+和Fe3+作用下,金属硫化矿中分解),伴随着硫元素转变成多聚硫S8或硫代硫酸盐的过程。对嗜酸硫杆菌属硫氧化过程的研究表明,胞外环状多聚硫S8可能通过细胞外膜蛋白巯基活化成线状-SnH后,被转运到细胞周质区域,进而被硫加双氧酶氧化成SO32-,活化过程中同时生成少量H2S;这些酶促反应不需要辅助因子参与,不释放电子。胞外硫代硫酸盐通过未知途径进入细胞周质。细胞周质中的SO32-主要经由亚硫酸-受体氧化还原酶氧化成SO42-,S2O32-可能经由硫代硫酸盐-辅酶Q氧化还原酶、硫代硫酸盐脱氢酶、连四硫酸盐水解酶等氧化为硫酸,少量H2S则经由硫化物-辅酶Q氧化还原酶氧化为多聚硫,后者再经由SO32-和S2O32-氧化生成最后产物SO42-。这些生物氧化过程释放的电子进入呼吸链参与产生细菌生长代谢所需的能量。然而,关于A.ferrooxidans硫氧化系统中各种硫化合物的酶催化氧化机制的研究仍很缺乏,胞内外硫化合物的转运机制、是否存在胞外酶催化氧化等仍然有待解决。另外,硫的型态和价态、酶催化反应的细胞微区域以及硫氧化系统中一些关键酶的分离及其表达基因的鉴定等问题都还有待进一步研究。基于对这些事实的分析,提出了一个嗜酸硫杆菌属硫氧化系统的模型。

胸腺肽α1对白血病细胞介导免疫耐受的影响及其分子机制的研究进展

胸腺肽α1(Thymopeptide alpha-1,Tα1)是从胸腺素中分离纯化的一种小分子生物活性多肽激素,是一种生物反应调节剂(biological response modifiers,BRMs),可调节淋巴细胞发育和分化,促进淋巴细胞分化成熟,刺激T细胞增殖,从而调节免疫功能。吲哚胺2,3-加双氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO)是一种含铁血红素单体蛋白,是肝脏以外唯一可催化色氨酸分子沿犬尿氨酸途径分解代谢的关键限速酶,而色氨酸是T细胞增殖必需的氨基酸。研究发现Tα1与IDO具有相关性[1],本文就Tα1及IDO对白血病患者T细胞亚群的影响以及IDO与T细胞亚群之间的相互关系作一综述。

维生素A胡萝卜素与牛的繁殖机能

维生素A是牛的必需的重要维生素,对其繁殖机能有重要影响。日粮中缺维生素A或不足均会导致公母牛的繁殖机能降低。本文将讨论V_A对公母牛繁殖机能的影响,以及补充V_A或胡萝卜素的作用。一、V_A和胡萝卜素的代谢饲料中的胡萝卜素含有一个不能被取代的β—芷香酮环,它在小肠粘膜细胞中被β—胡萝卜素15,15′—加双氧酶裂解成为视黄醛,在小肠粘膜中再生成视黄醇,进入淋巴、肝和血液循环。研究指出,日粮中V_A主要以棕榈酸酯形式存在,在小肠中被胰腺分泌的视黄基酯水解酶水解。V_A几乎全部以游离醇形式吸收,在肠细胞粘膜中重新酯化,

维生素 A、胡萝卜素与牛的繁殖机能

维生素 A 是牛必需的重要维生素,对其繁殖机能有重要影响。日粮中缺少维生素 A(V_A)或不足均会导致公母牛的繁殖机能降低。本文将讨论 V_A 对公母牛繁殖机能的影响,以及补充 V_A 或胡萝卜素的作用。一、V_A 和胡萝卜素的代谢饲料中的胡萝卜素含有一个不能被取代的β—芷香酮环,在小肠粘膜细胞被β—胡萝卜素15、15′—加双氧酶裂解成为视黄醛,在小肠粘膜中再生成视黄醇。

三个与肉质相关候选基因的研究进展

随着人们生活水平的提高,消费者对肉制品的特性要求也越来越高,畜禽的肉制品研究已经成为当今育种的一个热点,分子育种手段的快速发展,加快了育种速度,与畜禽相关的候选基因是现代育种学关注的焦点。笔者对三个与畜禽肉品质性状相关的候选基因在分子及其肉品质育种中的研究进展进行综述,为今后的育种方向提供参考。

第47届国际化学奥林匹克理论试题(5-8题)

碳水化合物是生命体的最重要的能量来源。单糖葡萄糖是活细胞的能量来源之一，但是对于糖尿病患者而言却非常危险。高含量的葡萄糖可能会导致高血糖症甚至死亡。这就是为什么人们尽可能避免摄入过多碳水化合物特别是葡萄糖的原因。

食管癌组织中IDO1的表达及犬尿酸对间皮素CAR-T细胞功能的影响

目的:探讨食管癌组织中吲哚加双氧酶1(IDO1)的表达,及其代谢产物犬尿酸对间皮素嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)功能的影响。方法:利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中数据分析食管癌组织中IDO1的表达对患者生存的影响;采用密度梯度离心法获得健康供者外周血单个核细胞,并用细胞免疫磁珠分选出CD8+T细胞;采用病毒感染的方法制备间皮素CAR-T细胞,用200μmol/L犬尿酸处理48 h后,采用流式细胞术检测细胞表面标志物的表达和细胞内因子分泌的水平,检测其对KYSE510细胞的杀伤能力。以未用犬尿酸处理的间皮素CAR-T细胞作对照。结果:高表达IDO1的食管癌患者预后较差。与对照组相比,犬尿酸处理组间皮素CAR-T细胞表面抑制性分子PD-1表达上调(P <0. 05),而激活性分子CD28表达下降(P <0. 05),效应因子IFN-γ和IL-2分泌减少(P <0. 05);与KYSE510细胞共孵育后,间皮素CAR-T细胞CD107a表达降低,杀伤能力下降(P <0. 05)。结论:犬尿酸可以抑制间皮素CAR-T细胞的功能。