[目的]探讨加味丹栀逍遥散对慢性不可预知性温和应激(CUMS)抑郁小鼠模型的干预作用及可能机制.[方法]C57BL/6N小鼠分为正常组、模型组、加味丹栀逍遥散组和氟西汀组.采用CUMS复制抑郁模型,模型成功后灌胃给药4周.末次给药后进行行为学测...[目的]探讨加味丹栀逍遥散对慢性不可预知性温和应激(CUMS)抑郁小鼠模型的干预作用及可能机制.[方法]C57BL/6N小鼠分为正常组、模型组、加味丹栀逍遥散组和氟西汀组.采用CUMS复制抑郁模型,模型成功后灌胃给药4周.末次给药后进行行为学测试,采用串联质谱标签法(TMT)蛋白质组学分析小鼠肝脏差异蛋白的表达谱,通过Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)通路富集加味丹栀逍遥散抗抑郁的相关通路和蛋白;血液生化检测总胆固醇及总胆汁酸含量.[结果]与正常组相比,模型组小鼠糖水偏好率下降,自主活动次数减少,加味丹栀逍遥散给药后上调小鼠糖水偏好率及自主活动次数.蛋白组学结果显示模型组与加味丹栀逍遥散给药组之间肝脏差异表达蛋白20个,其中上调11个,下调9个.KEGG通路富集分析发现差异表达蛋白主要参与了胆固醇代谢、初级胆汁酸的合成等.生化检测发现,与正常组相比,模型组总胆固醇含量下降而胆汁酸含量升高,加味丹栀逍遥散给药能显著增加总胆固醇含量而减少总胆汁酸含量.[结论]加味丹栀逍遥散具有良好的抗抑郁效应,其机制可能与调节肝脏胆固醇异常代谢、降低血液总胆汁酸有关.展开更多
目的:运用网络药理学方法探究加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的作用机制,并通过分子对接和动物实验验证加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点。方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology d...目的:运用网络药理学方法探究加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的作用机制,并通过分子对接和动物实验验证加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点。方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、中医药百科全书数据库(The encyclopedia of traditional Chinese medicine,ETCM)等筛选加味丹栀逍遥散的化学成分及作用靶点。使用DisGeNet、人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)等查询抑郁症相关靶点,并采用STRING扩充二级靶点得到抑郁症的全部靶点。将加味丹栀逍遥散活性成分相关靶点与抑郁症靶点取交集,得到加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的相关靶点。借助Cytoscape软件构建蛋白质互作(protein-protein interaction,PPI)网络。使用DAVID对潜在靶点进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析。通过AutoDock对核心靶点及成分进行分子对接。48只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组8只和造模组40只,造模组小鼠建立慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型,6周后将造模组小鼠分为CUMS组、氟西汀组(20 mg·kg^(-1))及加味丹栀逍遥散低(15.9 kg·L^(-1))、中(31.8 kg·L^(-1))、高(47.7 kg·L^(-1))剂量组,每组8只,以10 mL·kg^(-1)体积灌胃给予相应药物,正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水,每天1次,持续28天。采用蔗糖偏好实验、悬尾实验和旷场实验评估小鼠的行为学能力;HE染色观察小鼠脑部海马区病理学变化;DCX染色观察海马区新生神经元变化;Western Blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及BDNF蛋白表达水平。结果:网络药理学分析显示,加味丹栀逍遥散活性成分164个,对应靶点332个;抑郁症相关靶点1432个;将加味丹栀逍遥散相关靶点和抑郁症相关靶点取交集,得到加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点147个;PPI网络分析得到9个核心靶点;KEGG富集分析发现,潜在靶点主要涉及细胞凋亡、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)信号通路等。分子对接结果表明山柰酚、柚皮素、槲皮素与AKT结合能力最强。动物实验结果显示,与正常组比较,CUMS组小鼠糖水偏好率、p-AKT、BDNF蛋白表达水平显著降低(P<0.01),悬尾不动时间显著升高(P<0.05);与CUMS组比较,加味丹栀逍遥散组小鼠的糖水偏好率、p-AKT、BDNF蛋白表达水平显著上升(P<0.05),悬尾不动时间显著降低(P<0.05)。HE染色显示,CUMS组小鼠海马组织CA3区神经元结构松散,细胞数量减少,排列不规则;给予加味丹栀逍遥散干预的小鼠CA3区神经元结构更加完整,细胞数量接近正常组。免疫荧光显示,CUMS小鼠海马DG区DCX阳性细胞数量明显减少;给予加味丹栀逍遥散干预的小鼠海马DG区DCX阳性细胞数量显著增加。结论:加味丹栀逍遥散治疗抑郁症具有多成分-多靶点-多通路的特点,其作用机制可能与促进细胞增殖、影响神经元的新生有关。展开更多
文摘[目的]探讨加味丹栀逍遥散对慢性不可预知性温和应激(CUMS)抑郁小鼠模型的干预作用及可能机制.[方法]C57BL/6N小鼠分为正常组、模型组、加味丹栀逍遥散组和氟西汀组.采用CUMS复制抑郁模型,模型成功后灌胃给药4周.末次给药后进行行为学测试,采用串联质谱标签法(TMT)蛋白质组学分析小鼠肝脏差异蛋白的表达谱,通过Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)通路富集加味丹栀逍遥散抗抑郁的相关通路和蛋白;血液生化检测总胆固醇及总胆汁酸含量.[结果]与正常组相比,模型组小鼠糖水偏好率下降,自主活动次数减少,加味丹栀逍遥散给药后上调小鼠糖水偏好率及自主活动次数.蛋白组学结果显示模型组与加味丹栀逍遥散给药组之间肝脏差异表达蛋白20个,其中上调11个,下调9个.KEGG通路富集分析发现差异表达蛋白主要参与了胆固醇代谢、初级胆汁酸的合成等.生化检测发现,与正常组相比,模型组总胆固醇含量下降而胆汁酸含量升高,加味丹栀逍遥散给药能显著增加总胆固醇含量而减少总胆汁酸含量.[结论]加味丹栀逍遥散具有良好的抗抑郁效应,其机制可能与调节肝脏胆固醇异常代谢、降低血液总胆汁酸有关.
基金the National Natural Science Foundation of China(8197339)Henan Science Fund for Distinguished Young Scholars(20300410249)Henan Science and Technology Research Project(22102310233).
文摘目的:运用网络药理学方法探究加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的作用机制,并通过分子对接和动物实验验证加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点。方法:基于中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、中医药百科全书数据库(The encyclopedia of traditional Chinese medicine,ETCM)等筛选加味丹栀逍遥散的化学成分及作用靶点。使用DisGeNet、人类孟德尔遗传数据库(online mendelian inheritance in man,OMIM)等查询抑郁症相关靶点,并采用STRING扩充二级靶点得到抑郁症的全部靶点。将加味丹栀逍遥散活性成分相关靶点与抑郁症靶点取交集,得到加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的相关靶点。借助Cytoscape软件构建蛋白质互作(protein-protein interaction,PPI)网络。使用DAVID对潜在靶点进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路富集分析。通过AutoDock对核心靶点及成分进行分子对接。48只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组8只和造模组40只,造模组小鼠建立慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型,6周后将造模组小鼠分为CUMS组、氟西汀组(20 mg·kg^(-1))及加味丹栀逍遥散低(15.9 kg·L^(-1))、中(31.8 kg·L^(-1))、高(47.7 kg·L^(-1))剂量组,每组8只,以10 mL·kg^(-1)体积灌胃给予相应药物,正常组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水,每天1次,持续28天。采用蔗糖偏好实验、悬尾实验和旷场实验评估小鼠的行为学能力;HE染色观察小鼠脑部海马区病理学变化;DCX染色观察海马区新生神经元变化;Western Blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及BDNF蛋白表达水平。结果:网络药理学分析显示,加味丹栀逍遥散活性成分164个,对应靶点332个;抑郁症相关靶点1432个;将加味丹栀逍遥散相关靶点和抑郁症相关靶点取交集,得到加味丹栀逍遥散治疗抑郁症的潜在靶点147个;PPI网络分析得到9个核心靶点;KEGG富集分析发现,潜在靶点主要涉及细胞凋亡、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)信号通路等。分子对接结果表明山柰酚、柚皮素、槲皮素与AKT结合能力最强。动物实验结果显示,与正常组比较,CUMS组小鼠糖水偏好率、p-AKT、BDNF蛋白表达水平显著降低(P<0.01),悬尾不动时间显著升高(P<0.05);与CUMS组比较,加味丹栀逍遥散组小鼠的糖水偏好率、p-AKT、BDNF蛋白表达水平显著上升(P<0.05),悬尾不动时间显著降低(P<0.05)。HE染色显示,CUMS组小鼠海马组织CA3区神经元结构松散,细胞数量减少,排列不规则;给予加味丹栀逍遥散干预的小鼠CA3区神经元结构更加完整,细胞数量接近正常组。免疫荧光显示,CUMS小鼠海马DG区DCX阳性细胞数量明显减少;给予加味丹栀逍遥散干预的小鼠海马DG区DCX阳性细胞数量显著增加。结论:加味丹栀逍遥散治疗抑郁症具有多成分-多靶点-多通路的特点,其作用机制可能与促进细胞增殖、影响神经元的新生有关。