加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响

目的:研究加味四君子汤含药血清对胃癌细胞SGC-7901凋亡相关因子表达的影响,进一步探讨其具体抗肿瘤作用机制。方法:40只SD大鼠随机分为加味四君子汤低、中、高剂量组(0.213,0.426,0.853 g·kg^(-1)),空白组,每组10只,空白组给予等体积的生理盐水灌胃,各组连续灌胃10 d,末次给药1.5 h后,水合氯醛腹腔麻醉,心脏采血,分离血清,56℃灭菌,0.22μm过滤,制备加味四君子汤高、中、低剂量组含药血清,各剂量组含药血清孵育胃癌细胞SGC-7901,运用流式细胞仪检测细胞早期和晚期凋亡情况,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测肿瘤抑制基因p53,c-核蛋白类基因(c-Myc),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),凋亡相关基因B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达,运用细胞免疫荧光技术检测p53,c-Myc,Caspase-3,Bcl-2蛋白的相对表达量情况。结果:与空白组比较,加味四君子汤含药血清高剂量组细胞凋亡比率显著升高(P<0.01),且可使胃癌细胞SGC-7901早期+晚期凋亡率达到22.58%(P<0.01)。Real-time PCR结果显示加味四君子汤中剂量组能显著促进Caspase-3 mRNA表达(P<0.01),加味四君子汤高剂量组能显著上调p53及c-Myc mRNA表达量(P<0.01),加味四君子汤高剂量组显著抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.01)。免疫荧光结果显示加味加味四君子汤高剂量组能使c-Myc,Caspase-3,p53蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:加味四君子汤含药血清能抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡相关分子p53,c-Myc,Caspase-3的表达,发挥抗肿瘤作用。

加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响

目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。

基于NF-κB信号通路的玉屏风散加味含药血清对RLE-6TN细胞炎症反应的影响

目的观察玉屏风散加味含药血清对大鼠肺上皮Ⅱ型细胞RLE-6TN炎症反应的影响,基于核因子(NF)-κB信号通路探讨其作用机制。方法采用脂多糖诱导RLE-6TN细胞炎症反应,将细胞分为对照组、模型组、地塞米松血清组和5%、10%、20%中药血清组,分别以不同血清干预细胞24 h。试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,荧光染色检测细胞活性氧(ROS)含量,Hoechst/PI双染观察细胞凋亡情况,ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β含量,RT-qPCR检测细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA表达,Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κBp65、IκBα蛋白表达。结果与对照组比较,模型组RLE-6TN细胞上清液LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),IκBαmRNA表达显著降低(P<0.01),p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα比值显著升高(P<0.01);与模型组比较,20%中药血清组和地塞米松血清组细胞RLE-6TN细胞上清液LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β及细胞ROS含量显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),TLR4、MyD88 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),IκBαmRNA表达显著升高(P<0.01),p-NF-κBp65/NF-κBp65、p-IκBα/IκBα比值显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论玉屏风散加味含药血清可减轻RLE-6TN细胞炎症反应,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关。

四君子汤及拆方含药血清对胃癌细胞株侧群细胞的生长抑制研究

目的:考察四君子汤及拆方含药血清对胃癌细胞株侧群(Side population,SP)细胞的生长抑制作用。方法:选择不同分化程度的人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823,以荧光染料Hoechst 33342染色,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞仪检测并分选出SP细胞和non-SP细胞;MTT法观察两组细胞的体外增殖活性;克隆形成实验考察两组细胞的集落形成能力;应用中药血清药理学方法,酶标仪MTT比色法观察四君子汤及拆方不同剂量、不同浓度含药血清对胃癌细胞SP细胞的生长抑制作用。结果:胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901和BGC-823中SP细胞比例分别为3.40%、2.00%、1.07%,与non-SP细胞相比,SP细胞具有较强的体外增殖活性(P<0.05)和较强的克隆形成能力(P<0.01);加药组以20%高剂量血清组最为明显。四君子汤及拆方含药血清对这3株细胞的SP细胞增殖均有明显的抑制作用,呈剂量和浓度依赖性。结论:四君子汤及拆方含药血清能明显抑制胃癌SP细胞的生长。

四君子汤含药血清对RNA干扰后的大肠癌SW480细胞超微结构、端粒长度及h TERT表达的影响

目的:运用四君子汤含药血清干预经RNA干扰后的大肠癌SW480细胞,观察其超微结构、端粒相对长度、端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA及蛋白表达变化,探讨四君子汤含药血清防治溃疡性结肠炎癌变的可能机制。方法:培养人大肠癌SW480细胞,经RNA干扰后,予低、中、高不同剂量的四君子汤含药血清,空白胎牛血清,美沙拉嗪含药血清,分别干预48h,运用透射电镜观察细胞超微结构,荧光定量PCR(SYBR Green法)和Westernblotting技术检测端粒相对长度、hTERT mRNA及蛋白表达变化。结果:经不同剂量四君子汤含药血清和美沙拉嗪含药血清干预后,RNA干扰后的大肠癌SW480细胞出现了自噬现象。各给药组端粒长度均明显小于空白组(P<0.05),其中四君子汤低剂量组端粒长度与美沙拉嗪组相当(P>0.05),中、高剂量组端粒长度大于美沙拉嗪组(P<0.05)。各给药组hTERT mRNA和蛋白表达明显低于空白组(P<0.05),其中四君子汤中剂量组hTERT mRNA表达明显低于美沙拉嗪组(P<0.05),低、高剂量组hTERT mRNA明显高于美沙拉嗪组(P<0.05),低、中剂量组hTRET蛋白表达明显低于美沙拉嗪组(P<0.05),高剂量组hTRET蛋白表达与美沙拉嗪组相当(P>0.05)。结论:四君子汤含药血清可能通过诱导细胞自噬,减缓炎症反应,下调hTERT表达,降低端粒酶活性,缩短端粒长度,抑制癌细胞增殖,达到防治溃疡性结肠炎相关癌变的效用。

黄芪四君子汤含药血清对人肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨黄芪四君子汤含药血清对人肝癌细胞株(SK-HEP-1)增殖、迁移和凋亡的影响。方法体外培养SK-HEP-1细胞模型并随机分为血管内皮生长因子组(VEGF组)、空白组、中药组、西药组,分别加入20 ng/mL VEGF、20 ng/mL VEGF+空白组大鼠血清、20 ng/mL VEGF+中药组含药血清、20 ng/mL VEGF+西药组含药血清,每个培养孔总反应体积为200μL。MTT比色法检测各组对SK-HEP-1细胞增殖的影响,Transwell法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光Real-time PCR法检测细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。结果与空白组和VEGF组比较,中药组含药血清可明显抑制肝癌SK-HEP-1细胞增殖,抑制细胞的迁移能力,显著提高细胞的早期凋亡率和总凋亡率,上调Caspase-3 mRNA基因表达,P均<0.05,而中药组和西药组组间差异无统计学意义。结论黄芪四君子汤含药血清对人肝癌细胞株SK-HEP-1具有抑制细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡的作用;其诱导凋亡的机制可能与上调Caspase-3基因表达有关。

四君子汤含药血清抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的观察四君子汤含药血清对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡的抑制作用,从而探讨四君子汤防治老年性白内障的机制。方法 30只SD大鼠随机分为2组,分别用四君子汤(1.725 g·kg^(-1)·d^(-1))和生理盐水灌胃,用药7 d后经腹主动脉采血,离心提取四君子汤含药血清和空白血清冻存备用。细胞实验分为4组:阴性对照组、过氧化氢组(300μmol·L^(-1)过氧化氢作用4 h)、空白血清组(300μmol·L^(-1)过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%空白血清作用12 h)和四君子汤含药血清组(300μmol·L^(-1)过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%四君子汤含药血清作用12 h),流式细胞仪检测HLEC细胞周期;透射电子显微镜观察各组HLEC超微结构的改变。结果流式细胞仪检测结果示:过氧化氢组G1期细胞比例为(67.127±2.615)%,较阴性对照组明显增加,S期细胞比例为(24.603±2.547)%、G2期细胞比例为(8.270±1.149)%,均较阴性对照组减少,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。四君子汤含药血清组G1期细胞比例为(41.517±20.008)%,较过氧化氢组明显减少,S期细胞比例为(38.423±10.213)%、G2期细胞比例为(20.060±11.004)%,均较过氧化氢组明显增加,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。透射电子显微镜结果显示:阴性对照组胞膜完整,各细胞器结构正常;过氧化氢组细胞表面微绒毛消失,染色质凝集成块分布于核膜下,核膜欠完整,细胞质内可见溶酶体;空白血清组细胞质内空泡增多,线粒体、内质网等细胞器结构仍可见;四君子汤含药血清组胞膜完整,细胞质内可见少许空泡,线粒体、内质网等细胞器结构清晰。结论四君子含药血清能有效抑制过氧化氢诱导的HLEC凋亡,这可能是四君子汤防治老年性白内障的机制之一。

加味六君子汤含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和凋亡的影响

目的:观察加味六君子汤含药血清对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法:以加味六君子汤不同浓度含药血清培养BGC-823细胞后,以MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化。结果:浓度为10%、15%、20%、30%、40%的含药血清作用于BGC-823细胞24、48、72小时后,细胞存活率显著降低,且与时间和剂量呈依赖关系。浓度为10%、15%、20%的含药血清作用于BGC-823细胞24小时后,G2期细胞增多,S期细胞减少。加药组BGC-823细胞凋亡率分别为(13.27±0.88)%、(19.97±0.60)%和(33.09±0.58)%,与空白对照组相同浓度空白血清细胞凋亡率(0.34±0.02)%、(0.19±0.04)%和(0.18±0.03)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:加味六君子汤含药血清对BGC-823细胞生长有明显抑制作用,并可诱导BGC-823细胞凋亡。

加味孔圣枕中丹含药血清调控SIRT1/PGC-1α通路改善氧糖剥夺再灌注PC12细胞的线粒体功能

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12细胞的线粒体功能的改善作用及机制。方法采用大鼠PC12细胞构建体外OGD/R细胞模型。细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清)、10%空白血清组(对照组)。采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选合适的氧糖剥夺时间(2、4、6、8 h);MTT法检测细胞活性;线粒体压力测试(MST)法检测细胞氧气消耗速率(OCR);流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测PC12细胞SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果与正常组比较,氧糖剥夺2、4、6、8 h后的PC12细胞活性均明显下降(P<0.05),选择氧糖剥夺6 h作为后续实验造模时间。与正常组比较,模型组的细胞活性明显下降(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显降低(P<0.05);细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,加味孔圣枕中丹10%、5%含药血清组的细胞活性明显提高(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显升高(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论加味孔圣枕中丹含药血清能改善OGD/R损伤PC12细胞的线粒体功能障碍,抑制神经元凋亡,促进神经元存活,其作用机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

四君子汤含药血清抑制甲状腺癌侧群细胞生长的实验研究

目的评估四君子汤含药血清对甲状腺癌细胞株(KMH-2和8305C)生长的抑制作用。方法 SD大鼠模型制备四君子汤含药血清;MTT试验检测四君子汤含药血清对甲状腺癌细胞株KMH-2和8305C体外增殖的影响;Annexin V/PI双染法检测四君子汤含药血清对KMH-2和8305C细胞凋亡的影响;流式细胞仪技术筛选和鉴定KMH-2和8305C的侧群细胞;并采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cytochrome C和Caspase-3的表达水平变化。结果四君子汤含药血清显著抑制KMH-2和8305C细胞增殖和诱导细胞凋亡;KMH-2和8305C细胞中存在一定比例侧群细胞(1.45±0.01)%和(1.75±0.01)%,侧群细胞中ALDH、CD44和ABCG2蛋白表达水平较高;四君子汤含药血清可以上调Bax、下调Bcl-2、促进Cytochrome C释放,激活Caspase-3介导的细胞凋亡途径。结论四君子汤含药血清对甲状腺癌细胞中侧群细胞生长有抑制作用,而且这种抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡产生。

四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞RhoA、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P<0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与RhoA/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。

四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖及RhoA、p21、Cdk2表达的影响

目的 探究四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖及Rho GTP酶(RhoA)、p21、细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdk2)表达的影响。方法 分别制备大鼠空白血清及四君子汤含药血清,MTT法检测IEC-6细胞增殖,RT-qPCR法检测p21、Cdk2 mRNA表达,Western blot法检测RhoA、p21、Cdk2及磷酸化Cdk2(p-Cdk2)蛋白表达。结果 与对照组比较,10%、20%四君子汤含药血清可促进给药24 h后细胞增殖(P<0.01),提高RhoA蛋白表达,Cdk2 mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01);各剂量四君子汤含药血清可促进给药48、72 h后细胞增殖(P<0.01),降低p21 mRNA和蛋白表达(P<0.01),升高p-Cdk2蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。与DFMO组比较,各剂量四君子汤含药血清可促进给药48 h后细胞增殖(P<0.01),提高RhoA及p-Cdk2蛋白表达(P<0.01);10%、20%四君子汤含药血清可促进给药72 h后细胞增殖(P<0.01),降低p21 mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01),提高Cdk2 mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 四君子汤含药血清可促进正常小肠上皮细胞增殖,其机制与影响多胺调控RhoA、p21、Cdk2表达有关。

加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将体外培养的兔关节软骨细胞按随机数表分为6组:空白对照组,模型组,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组及Wnt信号通路阻断剂组,后五组予白介素-1β诱导为退变软骨模型,然后予不同剂量的含药血清及s FRP-3干预。采用流式细胞仪检测细胞生长及周期情况,实时荧光定量PCR检测Wnt/β-catenin mRNA的表达。结果流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,模型组及加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组细胞生长情况明显减慢。实时荧光定量PCR检测结果显示,与模型组相比,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组β-catenin mRNA均有降低。结论加味独活寄生合剂含药血清对白介素-1β诱导为退变软骨模型有一定的保护作用,其作用机制可能与调控Wnt信号通路有关。

加味三棱丸含药血清对子宫内膜异位症内膜细胞芳香化酶及环氧合酶-2的影响

目的:观察子宫肌瘤与子宫内膜异位症(内异症)患者在位内膜芳香化酶(aromatase)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达上的差异,探讨加味三棱丸(SLW)含药血清对内异症在位内膜芳香化酶、COX-2表达的影响。方法:Western blot和RT-PCR方法分别检测子宫肌瘤组、给予SLW含药血清前后内异症组芳香化酶、COX-2蛋白和mRNA的表达,发光免疫分析法及放射免疫分析法分别检测上述各组细胞上清中雌二醇及前列腺素E2的含量。结果:以未给药的内异症内膜组为对照,子宫肌瘤组芳香化酶、COX-2 mRNA蛋白的表达,分泌雌二醇及前列腺素E2水平均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.05)。SLW5.0,2.5g·kg-1·d-1组芳香化酶、COX-2蛋白和mRNA的表达低于对照组,差异有显著性或极显著性(P<0.05或P<0.01)。SLW1.25g·kg-1·d-1组芳香化酶mRNA和蛋白、COX-2蛋白的表达也明显低于对照组(P<0.01),但COX-2 mRNA的表达与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。SLW5.0,2.5,1.25g·kg-1·d-1组分泌的雌二醇和前列腺素E2水平明显低于对照组(P<0.05)。结论:SLW可抑制子宫内膜异位症在位内膜细胞芳香化酶和COX-2的表达,从而降低局部雌激素及前列腺素E2的水平。

加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬相关基因Atg5和Beclin1 mRNA表达的影响

目的探讨加味丹参饮含药血清预处理对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬及其相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达的影响。方法将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为空白血清组(CG)、缺氧/复氧组(HRG)、加味丹参饮含药血清组(JDG)、JDG+自噬抑制剂(3-MA)组(JIG)、JDG+自噬激动剂(RAPA)组(JAG)。倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化;MTT比色法测定心肌细胞存活率;透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达。结果与CG比较,HRG镜下心肌细胞变性坏死程度增加,细胞存活率下降(P<0.01),电镜下自噬体增多,实时荧光定量PCR示Atg5、Beclin1 mRNA表达上调;与HRG相比,JDG及JAG镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,细胞存活率显著升高(P<0.01),电镜下自噬体增加,Atg5、Beclin1 mRNA表达进一步上调(P<0.05)。结论加味丹参饮预处理通过上调自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA表达,增强细胞自噬,保护缺氧/复氧损伤H9C2心肌细胞。

加味独活寄生合剂及含药血清主要成分超高效液相色谱-四级杆-时间飞行质谱仪分析

目的:通过超高效液相色谱-四级杆-时间飞行质谱仪(UPLC-Q-TOF)分析加味独活寄生合剂及含药血清,筛选出其主要物质成分及入血清成分。方法:采用Agilent Extend C18(2.1 mm×50 mm,1.8μm)色谱柱,流动相:乙腈-水(水中含0.1%甲酸,质谱级)按规定条件进行梯度洗脱,流速:0.4 mL/min,进样量:2μL,质谱检测条件:离子化方式为电喷雾离子化(ESI),准确质量数用ESI-L Low Concentration Tuning Mix(G1969-85000)校正,正离子分析模式,通过比较样品峰、保留时间等质谱信息,并结合提取离子流图及与对照品、相关文献数据对比进行化学成分确认。结果:(1)加味独活寄生合剂UPLC-Q-TOF分析确认了47个共有峰,通过分析比对主要包括亚麻酸甲酯、腺苷、邻苯二甲酸二异丁酯、金合欢基丙酮、十二酸甘油酯等47个化合物,主要来源为加味独活寄生合剂处方中的独活、桑寄生、杜仲、秦艽等,当前的条件分析尚未检测到细辛的药物成分。(2)加味独活寄生合剂含药血清UPLC-Q-TOF分析指认33个共有峰,通过分析比对主要包括邻苯二甲酸二异丁酯、金合欢基丙酮、十二酸甘油酯、邻苯二甲酸丁辛酯、桃叶珊瑚苷等33个化合物,主要来源为加味独活寄生合剂处方中的独活、桑寄生、杜仲、制天南星、黄芩、木瓜、威灵仙等。当前的条件分析加味独活寄生合剂含药血清中尚未检测到细辛、肉桂、秦艽、当归4味药物成分。结论:UPLC-Q-TOF指认了加味独活寄生合剂47个共有峰,含药血清33个共有峰,从整体上系统地反映加味独活寄生合剂的物质化学信息,初步确认了33个入血化学成分,以提示加味独活寄生合剂的药效物质基础,为药效实验提供了参考和依据。

加味丹参饮含药血清对骨髓间充质干细胞增殖及分泌bFGF、VEGF的影响

目的:探讨加味丹参饮含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖率、分泌碱性成纤维生长因子(bFGF)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用不同浓度的加味丹参饮含药血清诱导MSCs,并分为大、中、小剂量组(15 g/kg·d、10 g/kg·d、5 g/kg·d),另取未用加味丹参饮含药血清诱导的MSCs为空白对照组。检测各组MSCs(用MTT法)在490 nm处的光吸收值,并检测各组bFGF、VEGF的含量(用ELISA法)。结果:诱导第1天时,加味丹参饮含药血清各组均不能促进MSCs增殖,中、大剂量组与空白对照组比较,MSCs增殖明显下降(P<0.01);诱导第2天、第3天时,加味丹参饮中、大剂量组MSCs增殖均明显高于空白对照组(P<0.01)。诱导第1天时,加味丹参饮各组bFGF、VEGF的分泌均未增加,小剂量组与空白对照组比较,其分泌明显减少(P<0.01);诱导第2天、第3天时,加味丹参饮中、大剂量组bFGF、VEGF的分泌均明显高于空白对照组(P<0.01)。结论:剂量为10 g/(kg·d)、15 g/(kg·d)的加味丹参饮血清能促进MSCs增殖,并能促进MSCs分泌bFGF、VEGF。

加味芎蝎散含药血清对哮喘小鼠巨噬细胞表型及气道重塑蛋白表达的影响

目的观察加味芎蝎散含药血清对哮喘小鼠巨噬细胞活力、M1/M2表型、炎症介质[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-8(IL-8)]m RNA水平及基质金属蛋白酶(MMP9)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)蛋白的影响,探讨加味芎蝎散调控巨噬细胞极化,进而探讨其对Th1/Th2免疫平衡、组织重塑的相关机制。方法建立哮喘小鼠模型并分离提取肺巨噬细胞,同时制备加味芎蝎散含药血清。设立空白组、模型组及加味芎蝎散含药血清高剂量组、低剂量组,根据分组给予相应处理措施。干预24 h后,细胞增殖和毒性法检测细胞活力,免疫荧光法(IF)检测细胞M1标志物iNOS、M2标志物CD206的表达,荧光定量PCR法检测炎症因子TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8的mRNA水平,免疫印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP9)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白变化。结果与正常组比较,模型组巨噬细胞活力增加,iNOS/CD206比例下调,TNF-α、IL-8水平增高,IL-4减低,MMP9和CollagenⅠ蛋白表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,加味芎蝎散含药血清高、低剂量组巨噬细胞活力减低,iNOS/CD206比例上调,TNF-α、IL-8水平减低,IL-4升高,MMP9和CollagenⅠ蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味芎蝎散含药血清可减弱巨噬细胞M2表型极化,调节TH1/TH2免疫平衡,抑制气道重塑蛋白表达。

加味茵陈汤含药血清对体外大鼠肝细胞损伤模型的作用

目的建立肝细胞体外损伤模型,并观察加味茵陈汤含药血清对体外肝细胞损伤模型的作用。方法加味茵陈汤(茵陈、栀子、大黄、三七、丹参、赤芍、生地、丹皮、白芍、柴胡)用自动煎药包装机制成汤剂(2g生药／ml),利用改进的Seglen胶原酶(Ⅳ型)原位灌注分离大鼠肝细胞,培养液中加入不同浓度D-氨基半乳糖(D-GalN,0．2μg／ml、1μg／ml、5μg／ml、25μg／ml、125μg／ml)培养24 h,于培养1、3、6、12、24 h取上清测定ALT、AST、LDH,同步测定肝细胞的MTT反应以建立肝细胞体外损伤模型;以确定剂量中药加味茵陈汤(30 g／kg体质量,相当于60 kg体质量成人剂量10倍)灌胃给予大鼠制备中药药物血清,于肝细胞体外损伤模型加入含5％、10％、15％浓度中药血清培养24 h,以NS及正常大鼠血清做对照,于培养1、3、6、12、24

加味芎藭汤含药血清对ICAM-1、VCAM-1和PS含量的影响

目的观察加味芎藭汤含药血清对血管内皮细胞分泌细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子(VCAM-1)和颗粒膜蛋白(PS)含量的影响。方法体外培养血管内皮细胞,随机将细胞分为DMSO溶媒对照组,AngⅡ模型组,卡托普利对照组,30%、20%、10%、5%加味芎藭汤含药血清组,MTT法检测细胞的增殖活性,用Elisa法分别检测细胞培养上清中的ICAM-1,VCAM-1,PS的含量。结果加味芎藭汤含药血清可降低内皮细胞分泌的ICAM-1、VCAM-1,升高内皮细胞分泌的PS。结论加味芎藭汤对血管内膜的黏附能力具有调节的功效。