加味四妙方通过调控蛋白多糖降解治疗大鼠痛风性关节炎的机制研究

目的:基于蛋白多糖降解探讨加味四妙方对单钠尿酸盐(MSU)诱导的大鼠痛风性关节炎(GA)的作用及其作用机制。方法:将6只SD大鼠随机分为空白组和模型组,每组3只,模型组向关节腔内注射0.1 mL MSU溶液(100 mg/mL)建立GA模型,对照组注射等体积生理盐水。24 h后对两组大鼠的滑膜组织进行转录组测序,筛选出差异表达基因。体外培养家兔膝关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色、RT-PCR法检测不同代数软骨细胞中蛋白多糖(PGs)的表达。采用Western blot与qRT-PCR法检测不同浓度MSU(200、500、1000µmol/L)处理后MMP-3的蛋白及mRNA表达。将33只SD大鼠随机分为空白组、模型组、给药组,每组11只。膝关节注射0.1 mL MSU溶液(100 mg/mL)制备大鼠痛风性关节炎模型,免疫组化检测滑膜组织中MMP-3的表达,番红固绿染色法检测大鼠关节软骨细胞蛋白多糖的表达。结果:MMP-3是显著上调的差异表达基因,与Jak/STAT信号通路、TGF-β信号通路、趋化因子信号通路、IL-17信号通路等密切相关。体外验证发现,与空白组比较,经250、500、1000µmol/L MSU刺激24 h后,MMP-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与空白组比较,MMP-3 mRNA表达水平经250µmol/L MSU刺激后明显升高(P<0.01),经500、1000µmol/L MSU刺激后其表达显著升高(P<0.001)。与空白组比较,经250、500µmol/L MSU刺激后,各组软骨细胞蛋白多糖表达均显著降低(P<0.05);与250µmol/L MSU组比较,10%和20%加味四妙方含药血清(MSM)组均能有效逆转上述结果(P<0.001)。与500µmol/L MSU组比较,20%MSM能够有效上调蛋白多糖的表达(P<0.05)。与空白组比较,模型组软骨细胞蛋白多糖mRNA表达显著降低(P<0.001);与模型组相比,10%MSM与20%MSM均能有效增加其mRNA表达(P<0.001,P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠膝关节肿胀明显(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组能明显抑制其关节肿胀(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组MMP-3表达增加且关节软骨表层蛋白多糖丢失;与模型组相比,各给药组对上述现象均有明显改善作用。结论:加味四妙方通过抑制MMP-3生成调控蛋白多糖降解从而治疗痛风性关节炎。

去多糖处理对加味四妙方抗炎镇痛作用的影响

目的观察经去多糖处理后加味四妙方的抗炎、镇痛作用以及对痛风性关节炎的影响,筛选加味四妙方抗痛风的有效部位群。方法采用醋酸刺激致小鼠扭体反应试验、二甲苯致小鼠耳肿胀试验、尿酸钠结晶致大鼠足肿胀试验。结果全方经去多糖工艺处理后,仍保持显著的抗炎、镇痛作用,且有量效关系。结论去多糖处理不影响全方的抗炎、镇痛作用。

加味四妙方有效部位群抗实验性痛风作用的研究

目的观察加味四妙方有效部位群(简称A组合)不同剂量的抗炎、镇痛及降尿酸作用。方法采用化学刺激致小鼠扭体反应、二甲苯致小鼠耳肿胀、小鼠急性高尿酸血症模型,观察加味四妙方及其有效部位群不同剂量的镇痛、抗炎和降尿酸作用。结果全方在3 h处对高尿酸小鼠有一定降尿酸作用(P<0.05);对醋酸致小鼠扭体反应有明显的镇痛作用(P<0.01)。A组合大剂量组能明显降低小鼠高尿酸水平(P<0.01);对二甲苯所致耳肿胀、醋酸所致扭体均表现出明显抗炎和镇痛作用(P<0.01)。A组合中剂量组在1、3h能降低小鼠高尿酸水平(P<0.05,P<0.01);对二甲苯所致耳肿胀、醋酸所致扭体反应均有明显的抑制作用(P<0.01)。小剂量组能抑制小鼠血尿酸的升高(P<0.05);对二甲苯所致耳肿胀有明显抗炎作用(P<0.01),但未表现出镇痛作用。结论加味四妙方有效部位群代表了全方药效的物质基础,各剂量组在镇痛、降尿酸和抗炎方面有一定量效关系。

加味四妙方治疗尿酸性肾病模型大鼠的实验研究

目的探讨加味四妙方对尿酸性肾病大鼠的肾功能、血脂代谢、尿液生化和肾组织病理方面的影响。方法采用酵母、腺嘌呤制作尿酸性肾病大鼠模型。大鼠随机分为正常组(ZC组)、模型组(MX组)、别嘌醇组(XY组)、加味四妙方组(SMF组),给予相应干预。检测给药后大鼠肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿酸(UA)],血脂四项[胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)],尿液生化[N-乙酰-β-D葡萄糖苷酶(NAG),β2微球蛋白(β2-MG)]和24 h尿蛋白代谢的变化情况;观察肾组织病理改变。结果 1与正常组比较,模型组的BUN、Scr、UA、TC、TG、HDL和LDL、NAG、β2-MG和24 h尿蛋白均有显著的统计学差异(P<0.01)。2与模型组比较,加味四妙方组的BUN、Scr、UA、TC、LDL、NAG、β2-MG和24 h尿蛋白代谢显著降低(P<0.01);别嘌醇组的UA显著降低(P<0.01),而别嘌醇组的Scr、TC、TG、HDL差异无统计学意义(P>0.05)。3肾组织病理改变显示,加味四妙方组和别嘌醇组较模型组肾小管内尿酸盐结晶减少,炎性细胞浸润减少,肾小管-间质损伤较轻,其中加味四妙方组损伤最轻,与别嘌醇组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论加味四妙方能够显著改善尿酸性肾病大鼠的肾功能、血脂代谢、尿液生化,减轻肾组织病理损害。

加味四妙方对高尿酸血症合并急性痛风性关节炎模型大鼠踝关节组织NLRP3 mRNA及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的探讨加味四妙方治疗高尿酸血症(HUA)合并急性痛风性关节炎(GA)的可能作用机制。方法48只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,加味四妙方低、中、高剂量组,西药组,每组8只。各组造模与灌胃同时进行。加味四妙方低、中、高剂量组分别给予加味四妙方16.8、33.6、67.2g/(kg·d)灌胃,西药组给予别嘌醇0.09g/kg+秋水仙碱0.05mg/100g灌胃,空白组及模型组给予10ml/kg蒸馏水灌胃。各组连续给药7d。除空白组外,其余各组腹腔注射3%氧嗪酸钾溶液建立HUA模型,再于大鼠右踝关节腔内注射尿酸钠溶液诱导GA模型。观察大鼠踝关节周径变化,检测大鼠血尿酸(SUA)、C反应蛋白(CRP)水平,大鼠踝关节组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果与空白组相比,模型组大鼠踝关节周径明显增加,血清SUA、CRP水平升高,踝关节组织NLRP3 mRNA及IL-1β、TNF-α表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比,加味四妙方组中、高剂量组和西药组大鼠踝关节周径缩小,血清SUA、CRP水平降低,踝关节组织NLRP3 mRNA、IL-1β、TNF-α表达均降低(P<0.05)。与加味四妙方高剂量组比较,西药组血清CRP水平、踝关节组织NLRP3 mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论加味四妙方可缓解HUA合并GA关节肿胀,降低血清SUA水平,其作用机制可能与调控NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌有关。

加味四妙方抗高尿酸血症及痛风性关节炎药效学分析

目的:考察加味四妙方抗高尿酸血症及痛风性关节炎的作用。方法:SD大鼠60只随机分为空白组、模型组、别嘌醇组(60 mg·kg-1)、加味四妙方高、中、低剂量组(24,12,6 g·kg-1)6组(n=10)。除空白组外,其他组喂食次黄嘌呤饲料,喂饲后第1,3,5天sc氧嗪酸钾复制高尿酸血症模型,于喂饲后第1天ig给药,连续5 d。检测血尿酸(UA),尿UA水平及血液、肝脏黄嘌呤氧化酶(XO)活性。新西兰兔40只随机分为模型组、秋水仙碱组(0.3 mg·kg-1)、加味四妙方高、中、低剂量组(12,6,3 g·kg-1)5组(n=8)。连续ig给药5 d后,各组家兔膝关节腔注射尿酸钠结晶(MSU)诱导痛风性关节炎模型。检测关节肿胀度,关节液白细胞计数(WBC),白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)水平及关节囊、滑膜组织病变程度。结果:高尿酸血症模型大鼠与空白组比较,血UA,尿UA及血液XO,肝脏XO均明显上升(P<0.01);加味四妙方高、中、低剂量组能降低高尿酸血症模型大鼠血UA,尿UA(P<0.01,P<0.05),且能显著降低血液XO(P<0.01)。对由MSU引起的家兔膝关节肿胀,在致炎后1,3,5 h,痛风模型家兔与空白组比较,关节液WBC及IL-1β,IL-6含量均明显上升(P<0.01);加味四妙方高、中剂量组能抑制其肿胀度(P<0.01,P<0.05),显著降低关节液WBC及IL-1β,IL-6含量(P<0.01,P<0.05),且高剂量组能减轻关节组织病变程度(P<0.05)。结论:加味四妙方对高尿酸血症模型大鼠有降UA作用,并对痛风模型家兔有良好的抗炎作用,其作用机制可能与降低XO活性,抑制关节IL-1β,IL-6合成与释放有关。

加味四妙方治疗湿热浊瘀型慢性尿酸性肾病的临床观察

目的评价加味四妙汤治疗湿热内蕴型慢性尿酸性肾病的临床疗效。方法 70例慢性尿酸性肾病患者,随机分为2组。两组疗程均为3个月。观察肾功能[肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)]、C反应蛋白(CRP)、血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、尿微量白蛋白/尿肌酐(U-MA/U-Cr)、尿β2微球蛋白(Uβ2-MG)、尿沉渣红细胞计数的变化以及中医临床征候表现。结果与对照组比较,加味四妙方组总有效率提高,组间差异显著(P<0.05)。在改善血Scr、UA、BUN、CRP、T、E2以及降低U-MA、Uβ2-MG和尿沉渣红细胞计数方面,加味四妙方组均优于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论加味四妙汤联合基础治疗湿热浊瘀型慢性尿酸性肾病疗效显著。

四妙方加味对2型糖尿病模型小鼠和慢性脂肪肝模型大鼠的影响

目的：观察四妙方加味对2型糖尿病模型（T2DM）小鼠血糖、血脂及肝脏组织病理的影响及对慢性脂肪肝模型大鼠血脂、肝指数、Lee’s指数、脂肪指数的影响。方法：①通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立，T2DM小鼠模型，选取成模小鼠随机分为6组：对照组，模型组，四妙方加味低、中、高剂量组和二甲双胍组，另设空白对照组。每天灌胃给予相应药物或蒸馏水，3周后测小鼠血糖及血清中总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）含量，计算肝重指数并观察小鼠肝组织病理变化。（④灌胃给予高脂乳剂建立慢性脂肪肝大鼠模型，造模成功的大鼠随机分组5组，即模型组，阿托伐他汀组，四妙方低、中、高剂量组。另设空白对照组。各组口服给予相应的药物或蒸馏水。8周后取血测血清中TC、TG含量，称取大鼠脂肪的重量、肝脏重量，计算Lee’s指数和脂肪指数。结果：①与模型组比较，二甲双胍组和四妙方加味低、中、高剂量组小鼠血糖含量均显著下降（P〈0．05或P〈0．01）；四妙方加味中、高剂量组TC含量明显低于模型组（P〈0．05或P〈0．01）；四妙方加味各组TG含量均显著下降（P〈0．05或P〈0．01）；二甲双胍组和四妙方加味比较，二者血糖、血脂、肝指数水平上无明显差异（P〉0．05）。与模型组比较，四妙方加味中、高剂量组，均未发生脂肪变性和重度水样变性，脂肪变性指标差异不明显，水样变性指标有显著差异（P〈0．01）。与二甲双胍相比，四妙方加味对肝组织的损伤有较强的缓解作用。（④与对照组比较，四妙方加味中、高剂量组及阿托伐他汀组能降低血清中TC、TG含量（P〈0．05或P〈0．01）。四妙方加味低剂量组大鼠与模型组大鼠比较，脂肪指数降低（P〈0．05）；中、高剂量及阿托伐他汀组大鼠与模型组大鼠比较，肝指数、Lee’s指数、脂肪指数均降低（P〈0．05或P〈0．01）。四妙方加味组与阿托伐他汀组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：四妙方加味不仅具有显著的降糖作用。还能够降低血脂；且相较于二甲双胍，四妙方加味能抑制糖尿病小鼠肝脏肿大，减轻肝脏组织病理变化，对T2DM肝脏损伤具有一定的保护作用。

加味四妙丸有效部位群抗高尿酸血症作用及其机制

目的探讨加味四妙丸(MSW)有效部位群(EFC)对高尿酸血症大鼠血清尿酸水平的影响及其作用机制。方法采用由次黄嘌呤和尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾制备持续性大鼠高尿酸血症模型,记录每日摄食量,收集末次造模后12 h尿液,ig给予模型大鼠MSW 50 g·kg-1以及EFC 12.5,25和50 g·kg-1,连续5 d;采用尿酸排泄抑制剂烟酸制备高尿酸血症模型,ig给予模型大鼠MSW 50 g·kg-1以及EFC50 g·kg-1,连续3 d。末次给药后,取血和肝组织。全自动生化仪检测大鼠血清和尿液中尿酸水平,酶比色法测定血清、肝组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)、分光光度法检测红细胞、肝组织中嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)和尿酸酶等活性。结果与正常对照组相比,2种高尿酸血症模型大鼠血清尿酸水平均明显升高(P<0.01),MSW和EFC 50 g·kg-1均可显著降低2种模型大鼠血尿酸水平(P<0.01)。EFC 12.5和25 g·kg-1可降低由氧嗪酸钾制备的持续性高尿酸血症大鼠血尿酸水平(P<0.05),MSW和EFC各剂量组均可明显升高模型动物红细胞PNP活性(P<0.01),EFC 25和50 g·kg-1还可显著降低血清XOD活性(P<0.05,P<0.01)。对由烟酸复制的大鼠高尿酸血症模型,MSW 50 g·kg-1和EFC 50 g·kg-1均能升高肝组织尿酸酶活性(P<0.05),EFC50 g·kg-1能显著降低模型大鼠血清中XOD活性(P<0.01)。结论 EFC能降低高尿酸血症模型大鼠的尿酸水平,其机制可能与其抑制血清XOD活性使尿酸合成减少以及激活尿酸酶活性促进尿酸分解有关。

重组人干扰素α2b凝胶联合加味补中益气四妙方治疗宫颈高危HPV感染的临床疗效观察

目的:研究探讨重组人干扰素α2b凝胶与加味补中益气四妙方联合治疗宫颈高危人乳头瘤病毒(HPV)感染患者的治疗效果。方法:选取某院2018年1月~2020年1月宫颈高危HPV感染患者100例作为研究对象,使用随机对照法将其分为研究组和对照组各50例,研究组使用重组人干扰素α2b凝胶联合加味补中益气四妙方共同治疗,对照组使用重组人干扰素α2b凝胶单独治疗,比较两组患者治疗效率,记录并比较两组患者治疗前后HPV病毒载量与中医症候积分变化情况,比较两组患者治疗前后血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与干扰素-α(INF-α)指标变化情况。结果:研究组治疗总有效率90.00%高于对照组74.00%(P<0.05);治疗前两组患者HPV病毒载量与中医症候积分无明显差异,研究组治疗后HPV病毒载量低于对照组(P<0.05),中医症候积分低于对照组(P<0.05);两组患者治疗前TNF-α与INF-α无明显差异,治疗后研究组患者TNF-α低于对照组(P<0.05),INF-α高于对照组(P<0.05)。结论:重组人干扰素α2b凝胶联合加味补中益气四妙方可有效提高临床治疗效率,降低患者HPV病毒载量,改善炎症反应。

从“心部于表”论述加味四妙勇安方治疗急性放射性皮炎

急性放射性皮炎是放疗相关常见不良反应,严重影响患者生活质量。中医药为我国的特色治疗方法,外用药在治疗急性放射性皮炎方面可发挥明显优势。以“心部于表”为理论指导的皮肤病与急性放射性皮炎在临床表现及治疗用药方面有契合之处。故以入心经为主的中药创立加味四妙勇安方,在“心部于表”的理论指导下治疗急性放射性皮炎取得了较好的疗效,为中医药治疗急性放射性皮炎提供新的思路。