加味塔布森-2提取工艺优化及其对破骨细胞分化的抑制作用

目的优化蒙药加味塔布森-2(MT-2)的提取工艺,并考察按最优工艺所制提取物对破骨细胞分化的抑制作用。方法采用网络药理学方法筛选MT-2工艺优化的指标性成分;以上述指标性成分的度值和含量计算综合评分,在单因素实验的基础上,使用Box-Behnken设计-响应面法优化MT-2的提取工艺并验证。以核因子κB受体激活蛋白配体(100 ng/mL)诱导RAW264.7细胞以制备破骨细胞分化模型,考察按最优工艺所制MT-2提取物(18.6、37.2、74.4 ng/mL)对破骨细胞分化的抑制作用。结果网络药理学筛选所得指标性成分包括绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷、异绿原酸A、1,5-二咖啡酰奎宁酸、羟基红花黄色素A、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)。MT-2最优提取工艺为乙醇体积分数60%,料液比1∶14(g/mL),提取时间94 min,提取2次;3次验证实验所得平均综合评分为95.50,与预测值(95.75)的相对误差为-0.26%。与破骨分化模型细胞比较,经最优工艺所制MT-2提取物处理后的细胞多为单核圆形细胞,破骨细胞数量均显著减少(P<0.05),且这种抑制作用有随药物质量浓度增加而增强的趋势。结论优化的MT-2提取工艺稳定、可行;所得提取物可抑制破骨细胞分化。

基于HPLC-Q-Exactive-MS/MS整合网络药理学研究加味塔布森-2有效成分及其抗骨质疏松机制

目的鉴定加味塔布森-2入血成分,并结合网络药理学阐述其治疗骨质疏松的作用机制。方法采用HPLC-Q-Exactive-MS/MS对加味塔布森-2入血成分进行鉴定;在此基础上结合SwissTarget Prediction与SuperPred数据库进行入血成分的靶点预测,同时在DisGeNET数据库中搜索骨质疏松相关的疾病靶点,利用Cytoscape软件构建“入血成分-靶点-疾病”网络模型,运用String数据分析平台进行蛋白互作网络分析,并且利用David数据库对核心靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析,最后使用分子对接对网络药理学内容进行初步验证。结果最终确定入血成分21个,通过网络药理分析得到加味塔布森-2抗骨质疏松的核心靶点11个。对11个核心靶点进行GO功能注释和KEGG通路分析后,发现加味塔布森-2抗骨质疏松的信号通路主要包括HIF-1、雌激素、MAPK、甲状腺素、TNF、mTOR、PI3K/AKT等。结论该方法初步明确了加味塔布森-2的入血成分及潜在作用机制,为加味塔布森-2药理作用机制的进一步研究提供科学依据。

基于代谢组学技术的蒙药加味塔布森-2改善大鼠肾阳虚作用研究探析

本研究采用代谢组学技术探究蒙药加味塔布森-2(modified tabusen-2,MT-2)对肾阳虚(kidney yang deficiency,KYD)大鼠改善作用。所有动物实验均在内蒙古医科大学医学伦理委员会的指导和标准下进行。随机将SD大鼠分为空白组、模型组、金匮肾气丸组(1.26 g·kg^(-1))和MT-2高、中、低剂量组(1.512、0.756和0.378 g·kg^(-1)),每组6只。采用肌肉注射氢化可的松(hydrocortisone,HC)建立KYD大鼠模型,通过生化指标以及观察其临床表征认定造模成功后,各组进行ig给药,空白组与模型组ig同样体积生理盐水,连续给药8周。给药结束后采集各组血清,进行血清生化指标与UPLC-Q-exactive-MS分析。通过代谢组学分析挖掘MT-2药物干预的生物标志物,并对MT-2调控KYD的代谢通路进行分析。结果显示MT-2可显著降低KYD大鼠血清肌酐(creatinine,Cr)的含量;显著升高促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)以及黄体生成素(luteinizing hormone,LH)的含量(P<0.05)。血清样本中,筛选出KYD大鼠疾病发展的生物标志物皮质酮、L-苯丙氨酸、DL-色氨酸等38个,MT-2通过回调其中的皮质酮、去氧皮质酮、L-苯丙氨酸等18个生物标志物及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢、类固醇激素生物合成等13条相关代谢通路发挥改善KYD作用。蒙药MT-2主要通过调节氨基酸类、类固醇类以及脂类等代谢物发挥改善KYD大鼠的作用。

蒙药蓝刺头及其复方制剂的急性毒性实验研究

目的:进行蒙药蓝刺头及其复方制剂的急性毒性实验研究。方法:根据预实验,因无法测其半数致死量(LD50),故以最大给药浓度和最大灌胃给药体积给药。结果:蒙药蓝刺头、塔布森-2及加味塔布森-2配成的最大浓度分别为0.62 g/mL、0.53 g/mL和0.60 g/mL,给药量分别为24.80 g/kg、21.20 g/kg和24.00 g/kg。给药后观察14 d,记录各组小鼠的体质量、摄食量及死亡情况,观察结束后立即解剖,观察主要脏器、称重并拍照。结论:蒙药蓝刺头及其复方对小鼠机体无损害现象,未发生明显急性毒性反应,为临床用药安全提供参考。