加味孔圣枕中丹含药血清调控SIRT1/PGC-1α通路改善氧糖剥夺再灌注PC12细胞的线粒体功能

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12细胞的线粒体功能的改善作用及机制。方法采用大鼠PC12细胞构建体外OGD/R细胞模型。细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清)、10%空白血清组(对照组)。采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选合适的氧糖剥夺时间(2、4、6、8 h);MTT法检测细胞活性;线粒体压力测试(MST)法检测细胞氧气消耗速率(OCR);流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测PC12细胞SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果与正常组比较,氧糖剥夺2、4、6、8 h后的PC12细胞活性均明显下降(P<0.05),选择氧糖剥夺6 h作为后续实验造模时间。与正常组比较,模型组的细胞活性明显下降(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显降低(P<0.05);细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,加味孔圣枕中丹10%、5%含药血清组的细胞活性明显提高(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显升高(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论加味孔圣枕中丹含药血清能改善OGD/R损伤PC12细胞的线粒体功能障碍,抑制神经元凋亡,促进神经元存活,其作用机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

基于网络药理学和实验验证探讨加味孔圣枕中丹治疗痴呆的分子机制

目的:基于网络药理学和分子对接技术研究加味孔圣枕中丹(JWKSP)治疗痴呆的作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM)筛选JWKSP活性成分及靶点;利用DrugBank、disGeNET数据库以及治疗靶点数据库(TTD)筛选痴呆靶点。活性成分作用靶点和疾病靶点交集获得JWKSP治疗痴呆的潜在作用靶点,Metascape数据库进行潜在作用靶点的基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路归类分析。Cytoscape 3.6.0软件构建JWKSP-中药-活性成分-潜在作用靶点-通路网络。AutoDock 4.2.6软件进行分子对接验证实验。体内复制大鼠血管性痴呆(VD)模型,JWKSP灌胃给药干预30 d,Morris水迷宫实验评价其记忆力,免疫组织化学法检测大脑皮质脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平。结果:筛选获得JWKSP活性成分88个,对应痴呆潜在作用靶点80个,主要涉及血液循环、血管直径调节、化学突触传递调控等生物过程;铵离子结合、儿茶酚胺结合、神经递质结合等分子功能以及膜微区等细胞组分。通路分析显示,JWKSP可能通过神经活性配体-受体相互作用、间隙连接、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等发挥抗痴呆作用。分子对接结果显示,JWKSP活性成分槲皮素、熊果酸、丹参酮ⅡA等分别与其对应的潜在作用靶点白蛋白(ALB)、白细胞介素-6(IL-6)、BDNF等具有较好的结合力和稳定性。体内实验结果表明,JWKSP可延长VD大鼠象限内游泳时间,提高大脑皮质BDNF表达水平。结论:JWKSP通过神经活性配体-受体相互作用、AMPK、VEGF等信号通路发挥调节胆碱能系统、抑制凋亡、改善神经炎症、血管新生等作用,这可能是JWKSP治疗痴呆的作用机制。

加味孔圣枕中丹对慢性脑缺血致痴呆大鼠胼胝体神经细胞凋亡的影响

目的:观察加味孔圣枕中丹对慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠胼胝体神经细胞凋亡的影响,探讨本方防治血管性痴呆的可能机制。方法:双侧颈总动脉永久结扎(2VO)法建立慢性脑缺血致血管性痴呆大鼠模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、加味孔圣枕中丹组和贝伐单抗组,药物干预30 d。ELISA法测定血清凋亡抑制因子Livin及VEGF水平,TUNEL法检测胼胝体神经细胞凋亡,免疫组织化学染色法测定胼胝体Caspase-3表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清VEGF水平、胼胝体神经细胞凋亡指数及Caspase-3蛋白表达显著升高,血清Livin水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,加味孔圣枕中丹组大鼠血清Livin及VEGF水平显著升高,胼胝体神经细胞凋亡指数及Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:加味孔圣枕中丹通过升高Livin和VEGF水平,下调Caspase-3表达,发挥抗神经细胞凋亡作用,这可能是其防治慢性脑缺血致血管性痴呆的机制之一。

加味孔圣枕中丹对慢性脑缺血痴呆大鼠VEGF表达和微血管密度的影响

目的观察加味孔圣枕中丹对慢性脑缺血致血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力及脑血管内皮生长因子(VEGF)表达和微血管密度(MVD)的影响,探讨该方影响血管生成、改善学习记忆能力的可能机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、加味孔圣枕中丹组和贝伐单抗组,除假手术组外,其余组均采用双侧颈总动脉永久结扎法建立慢性脑缺血痴呆大鼠模型。造模24 h后,加味孔圣枕中丹组及贝伐单抗组均给予加味孔圣枕中丹水煎浓缩液16 m L/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组给予等容量生理盐水灌胃,均1次/d,连续30 d。贝伐单抗组另给予贝伐珠单抗注射液2 mg/kg腹腔注射,1次/2周。干预结束后,Morris水迷宫检测各组大鼠逃避潜伏期评价学习记忆能力,免疫组化法检测皮质及胼胝体VEGF和CD34表达情况,以CD34标记MVD。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05),胼胝体VEGF表达水平升高(P<0.05),皮质和胼胝体MVD显著升高(P均<0.05);与模型组比较,加味孔圣枕中丹组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),皮质及胼胝体VEGF表达水平、MVD均显著升高(P均<0.05);与贝伐单抗组比较,加味孔圣枕中丹组皮质VEGF表达水平及MVD均显著升高(P均<0.05)。结论加味孔圣枕中丹能上调慢性脑缺血大鼠脑组织VEGF表达,促进脑组织血管生成,这可能是其改善痴呆模型大鼠学习记忆能力的作用机制之一。

加味孔圣枕中丹对局灶性脑缺血模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的研究加味孔圣枕中丹对局灶性脑缺血模型大鼠神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、P53表达的影响。方法线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为模型组、银杏叶组及加味孔圣枕中丹组,另设假手术组(n=10)。灌胃给药,连续14 d。观察大鼠神经功能症状评分,荧光TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法测定Bcl-2、P53表达。结果与模型组比较,加味孔圣枕中丹能显著降低局灶性脑缺血大鼠Zea Longa和网屏实验评分,降低神经细胞凋亡率和P53蛋白表达,增强Bcl-2蛋白表达(P均<0.05)。结论加味孔圣枕中丹能改善脑缺血引起的神经功能损伤,其机制可能与调控凋亡相关蛋白表达、抑制脑缺血引起的神经细胞凋亡相关。

加味孔圣枕中丹对局灶性脑缺血大鼠神经行为学及VEGF表达的影响

目的观察加味孔圣枕中丹对局灶性脑缺血大鼠神经行为学及血管内皮生长因子(vasular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、银杏叶组和加味孔圣枕中丹组(n=10),分别灌胃给予生理盐水、银杏叶片混悬液及加味孔圣枕中丹水煎浓缩液18 mL·kg-1·d-1,连续14 d。神经行为学采用平衡木试验、Bederson评分评价;RT-PCR和免疫组织化学法测定缺血脑组织VEGF mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠平衡木试验评分显著降低,Bederson评分显著升高,VEGF蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,加味孔圣枕中丹组大鼠平衡木试验评分显著升高,Bederson评分显著下降,VEGF mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论加味孔圣枕中丹能上调缺血后脑组织VEGF基因和蛋白表达,这可能是其改善MCAO大鼠神经功能损伤、治疗脑缺血的作用机制之一。

加味孔圣枕中丹治疗中风后痴呆52例

中风后痴呆即脑血管病性痴呆，为一系列脑血管供血障碍导致脑组织损害引起的痴呆。笔者近年在千金孔圣枕中丹基础上加味治疗中风后痴呆52例，取得较满意的疗效。现报告如下。

加味孔圣枕中丹治疗儿童多动综合征56例

儿童多动综合征（简称儿童多动症）是儿童时期常见的一种行为障碍综合征,近年来发病率逐年上升,以注意力不集中、冲动任性、记忆力差、学习困难为主要表现,而临床肝肾阴虚较为常见。2006年2月—2009年3月,笔者采用加味孔圣枕中丹治疗儿童多动症56例,总结报道如下。

孔圣枕中丹加味方治疗心肾两虚型失眠的临床观察

【目的】观察孔圣枕中丹加味方治疗心肾两虚型失眠的临床疗效和安全性。【方法】将70例心肾两虚型失眠患者随机分为治疗组和对照组,每组各35例。治疗组给予孔圣枕中丹加味方口服治疗,对照组给予佐匹克隆片口服治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前、治疗2周后和治疗4周后匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)评分、中医证候积分的变化情况,并评价2组患者的临床疗效和安全性。【结果】(1)临床疗效方面:治疗4周后,治疗组的总有效率为88.57%(31/35),对照组为62.86%(22/35),组间比较,治疗组的疗效有优于对照组趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)睡眠质量方面:治疗2周和4周后,2组患者的PSQI评分均较治疗前降低,差异均有统计学意义(P<0.05),但组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)中医证候方面:治疗2周和4周后,治疗组的中医证候积分均较治疗前明显降低(P<0.05),而对照组的中医证候积分较治疗前有降低趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05);组间比较,治疗组在治疗2周和4周后对中医证候积分的降低作用均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。(4)安全性方面:治疗过程中,治疗组无明显不适;对照组出现2例头晕,3例口干口苦,未予停药或特殊处理。【结论】孔圣枕中丹加味方治疗心肾两虚型失眠疗效确切,可有效改善患者的睡眠质量和中医证候,且具有较高的安全性。

针药结合干预阿尔茨海默病抑郁症状效果分析

目的:探析阿尔茨海默病伴发抑郁症状患者采取针药结合治疗的效果。方法:将厦门市仙岳医院2017年12月~2019年12月收治的60例阿尔茨海默病伴发抑郁症状的患者按照随机分组的原则分成对照组(常规西医治疗)、观察组(针刺结合孔圣枕中丹加味治疗),对比两组患者治疗前后抑郁自评量表(self-rating depression scale,SDS)、汉密尔顿抑郁量表(hamilton depression scale,HAMD)、简易精神状态评价量表(mini-mental state examiniation,MMSE)及治疗总有效率等指标。结果:和对照组相比,观察组的SDS评分、HAMD评分明显较低(P<0.05);观察组患者MMSE评分明显高于对照组患者(P<0.05);观察组的治疗总有效率明显高于对照组患者(P<0.05)。结论:针刺结合孔圣枕中丹加味用于阿尔茨海默病患者的治疗中能获得较为理想的效果,能够促使患者的抑郁症状明显改善,从而改善其精神状态,提升治疗效果,对改善患者治疗预后有着积极的作用。