AlkB同源蛋白5去除前mRNA加工因子6的mRNA甲基化修饰调控肝细胞癌的细胞增殖

目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkBhomolog5,ALKBH5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的细胞增殖中的作用。方法通过癌症基因组图谱数据库分析ALKBH5和前mRNA加工因子6(pre-mRNA processing factor 6,PRPF6)在HCC组织中的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的mRNA和蛋白表达水平。荧光原位杂交确定ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的亚细胞定位。在免疫沉淀复合物中检测PRPF6的N6-甲基腺苷甲基化水平。通过过表达和敲低基因表达的方法,将Huh7细胞和Hep3B细胞分别进行转染,分组为sh-NC组(阴性对照转染细胞)、sh-ALKBH5实验组(ALKBH5干扰序列转染细胞)、sh-ALKBH5+ex-PRPF6实验组(ALKBH5干扰序列转染+PRPF6 pcDNA 3.1过表达质粒转染细胞),并采用CCK-8和染色增殖试验检测各组细胞的增殖情况。裸鼠异种移植瘤实验验证ALKBH5和PRPF6在体内的生物学功能。蛋白质印迹法检测各组细胞中AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果HCC细胞中ALKBH5的表达上调,可以去除PRPF6的甲基化修饰。体外和体内实验结果显示,ALKBH5可通过调节PRPF6的表达参与HCC细胞的恶性增殖。此外,敲低ALKBH5会抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化,而PRPF6的过表达则有助于AKT和mTOR的磷酸化。结论ALKBH5能促进HCC细胞的增殖,相关机制是通过ALKBH5/PRPF6/AKT/mTOR轴实现的。

LC-MS/MS测定菊花不同加工方式下8种农药的加工因子

目的:通过考察菊花中8种易检出农药在不同加工方式下的加工因子,为菊花服用安全性评估提供参考依据。方法:使用菊花农药残留阳性样品,模拟菊花常用的加工方法(水煎煮、冲泡、70%乙醇提取),并采用液相色谱-质谱法测定加工过程中菊花各阶段的农药残留量,计算农药转移率和加工因子。结果:采用水煎煮和冲泡法,8种农药的转移率差异较大,呈现与农药的极性正相关的变化规律;而采用70%乙醇提取,8种农药转移至终产品中的残留量均较高。结论:通过对不同加工方式下菊花农药加工因子进行研究,为菊花中农药残留限度的制定提供参考依据,并为科学评估菊花中农药残留风险提供数据支持。

人参中五氯硝基苯残留的加工因子测定及其在膳食暴露评估中的应用

目的测定五氯硝基苯(PCNB)在人参Panac ginseng C. A. Mey.不同加工方式下的加工因子,以应用于人参膳食风险评估。方法分别考察水煎煮、水浸泡、75%乙醇提取3种加工方式PCNB的转移率,采用硫酸磺化法进行前处理,GC-ECD法测定10批人参药材、1批药液及加工后药渣中PCNB的残留水平。结果 10批人参药材中PCNB的超标率为50%,PCNB最高残留量为14. 0 mg/kg。测得水煎煮、水浸泡、75%乙醇提取3种方式的加工因子分别为0. 002、0. 04、0. 98。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于人参药材和含人参中成药的质量控制。

鸡蛋中药物残留加工因子与监测结果分析

目的分析鸡蛋中药物残留膳食暴露加工因子的确定与监测样品结果。方法按监测计划采集样品并制备模拟样品,应用超高压液相色谱-串联质谱测定15种药物残留含量,并计算加工因子与去除率。结果120份样品检出氧氟沙星5份(2.5~65.8μg/kg),环丙沙星1份(2.4μg/kg)。煮蛋器15 min加工因子为0.10~0.87,微波加热(60s)加工因子为0.10~0.92。结论加工处理过程能显著降低食物中药物残留量,降低人群膳食暴露风险,蒸蛋器加热与微波烹调2种加工处理方式相比较,微波烹调过程对药物残留的去除作用小。监测结果分析表明,在不同地区、不同品种和不同参数间的药物残留检出率无统计学差异。

野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31基因克隆及真核表达载体的构建

目的构建野生型和突变型小鼠前体mRNA加工因子31(pre-mRNA processing factor 31,PRPF31)基因的真核表达载体。方法通过逆转录聚合酶链反应(reverse tran-scriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增小鼠PRPF31野生型全长编码序列、体外定点突变获得331del12突变型PRPF31的cDNA编码序列,将上述两序列分别克隆入pGEM-T Easy载体,经限制性内切酶NheⅠ和EcoRⅠ双酶切后,再克隆入pTracer-CMV真核表达载体,予DNA测序鉴定。结果PCR成功扩增出野生型和突变型PRPF31基因,DNA序列分析证实两种基因的真核表达载体构建成功。结论野生型和突变型PRPF31基因真核表达载体的构建,为研究PRPF31基因突变引起视网膜色素变性的机制奠定了基础。

阿维菌素和氟啶胺在柑橘汁加工过程中的残留行为及加工因子研究

为评价阿维菌素和氟啶胺在柑橘汁商业化加工过程中的残留行为及加工因子,以普通甜橙为试验材料,以5倍最高推荐施药剂量在重庆和湖南进行田间试验,按照橙汁典型商业化加工过程进行加工,采用QuEChERS前处理结合超高效液相色谱-串联质谱联用技术(UPLC-MS/MS)对各加工单元的农药残留进行检测分析。结果表明,在柑橘汁加工过程中,榨汁是降低阿维菌素和氟啶胺残留最有效的过程;除柑橘皮精油中2种农药发生明显富集外,其余加工产品中农药残留加工因子均小于1。该研究结果可为监测阿维菌素和氟啶胺在柑橘及其制品中的农药残留行为及膳食暴露风险评估提供参考。

拟南芥RNA加工因子的开花调控机制

开花调控是植物生长发育中很重要的过程。拟南芥分子遗传学分析表明,MADS-box转录因子FLC、RNA结合蛋白(FCA、FPA和FLK)和mRNA3′端加工因子(FY)都参与了这一过程。开花因子通过抑制FLC表达来促使植物开花;RNA结合蛋白通过转录后调控来调节FLC的表达以调控拟南芥开花。此外,microRNAs也参与这一过程。本文通过综述上述几个相关因子的调控过程,来阐述RNA加工因子参与的拟南芥开花调控机理。

农药残留加工因子及其在膳食暴露评估中的应用

从初级农产品到入口的食品通常需要各种加工处理,而加工过程会影响食品中的农药残留水平,从而影响来源于初级农产品检测数据的风险评估结果的准确性,因此在风险评估模型中纳入农药残留加工因子有助于真实反映农药残留膳食暴露风险。本文以常用的食品加工技术如清洗、去皮、烹调、榨汁、杀菌及其他相关技术为出发点,综述了典型的加工方式对食品中农药残留的影响以及目前相应的加工因子在农药残留暴露评估中的应用情况,为掌握食品中农药在加工过程中的残留动态、改进食品加工技术提供参考,也为农药残留膳食暴露评估提供依据,进而真实反映人群中农药残留的暴露风险。

氟硅唑和宁南霉素在橙汁加工过程中的残留动态与膳食风险评估

目的:为明确氟硅唑和宁南霉素在柑橘及其加工制品中的安全性,在重庆、湖南两地进行田间实验,并按照橙汁商业化加工工艺进行加工,得到橙汁加工过程中氟硅唑和宁南霉素的残留动态及加工因子,并进行膳食风险评估。方法:分别采用QuEChERS(quick,easy,cheap,effective,rugged,and safe)方法和固相萃取法结合超高效液相色谱-串联质谱联用技术建立氟硅唑和宁南霉素在柑橘及其加工产品中的定量分析方法。结果:建立的方法准确度和灵敏度良好。在0.01、0.1、0.2 mg/kg(皮精油基质为0.05、0.5、2、20 mg/kg)加标水平下氟硅唑平均回收率为78.5%~108.4%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.5%~6.6%。在0.05、0.5、5 mg/kg(皮精油基质为0.05、0.5、5、20 mg/kg)加标水平下,宁南霉素平均回收率为88.3%~105.6%,RSD为0.3%~8.7%。在橙汁加工过程中,榨汁过程是降低氟硅唑和宁南霉素残留的高效途径,初榨果汁中两种农药残留量降低了93.3%~98.6%。皮渣中氟硅唑和宁南霉素易发生富集,精油中宁南霉素残留量降低而氟硅唑发生富集,其余加工产品中加工因子均小于1。氟硅唑和宁南霉素对不同年龄段人群的急性和慢性膳食暴露风险均低于100%,无不可接受风险。结论:本研究可为监测氟硅唑和宁南霉素在柑橘及其产品中的残留行为及膳食暴露风险评估提供参考,助推两种农药在柑橘生产中防病的科学应用。

四种杀菌剂在白及初加工过程中的残留变化

为明确白及初加工过程中多菌灵、三唑酮、戊唑醇和苯醚甲环唑的残留变化规律和加工因子,在实验室条件下,模拟白及的清洗、水煮和烘干3个初加工过程,采用超高效液相色谱串联质谱法(ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UHPLC-MS/MS)检测白及初加工各阶段的农药残留浓度,并计算加工因子。结果表明,白及不同加工过程对4种杀菌剂残留浓度的影响差异较大。清洗过程使农药残留浓度降低4.6%~57.8%,加工因子为0.42~0.95,在清水中分别添加质量分数2%淀粉、2%食盐和2%小苏打对农药的去除效果可提升1.4~7.3倍;水煮过程使农药残留浓度降低38.6%~67.8%,加工因子为0.32~0.61;烘干过程由于浓缩效应使农药残留浓度升高2.1~3.2倍,加工因子为2.08~3.23。白及依次经2%食盐水清洗、水煮4 min、60℃烘干的初加工全过程对4种杀菌剂的降解作用大于因脱水造成的浓缩作用,可降低4种杀菌剂在干白及产品中的残留风险,全过程加工因子为0.34~0.67。因此,以鲜白及中4种杀菌剂残留评价经此初加工后干白及中4种杀菌剂残留的安全性是可行的,研究结果可为白及产品的安全风险评估提供基础数据参考。

欧盟、美国和日本加工农产品中农药残留评估现状

本文介绍了欧盟、美国和日本评估加工农产品中农药残留的数据要求和试验准则,以及开展膳食摄入风险评估和推荐农药最大残留限量(MRL)的方法,汇总了用于农药残留评估的加工农产品及其分类,分析了加工农产品中农药MRL制定现状,为进一步提高我国相关领域技术提供借鉴。比较分析结果表明,欧盟和美国在农药登记资料要求中明确提出了加工试验数据要求并且制定了相应的试验准则,美国在试验准则中描述了加工农产品中农药MRL的推荐原则;美国和日本制定了一定数量的加工农产品中农药MRL,欧盟建立了适用于监管农药MRL的加工因子数据库;欧盟、美国和日本均在相关法规中规定了加工农产品中农药残留的合规性判定。

农产品加工过程中的农药残留规律研究

为探究农产品加工过程中的农药残留规律,以大米农产品为例,以五氟磺草胺、吡唑醚菌酯、氯虫苯甲酰胺3种农药作为代表,对大米脱壳、碾米、淘洗、蒸煮等加工过程中农药的残留水平进行分析。结果表明,脱壳加工的农药去除率为85.47%,大部分农药残留在稻壳中;碾米加工的农药去除率为64.617%,通过剥落米糠可降低糙米表面农药残留;淘洗加工的农药去除率为70.053%,随着淘洗次数增多,农药残留水平下降;蒸煮加工的农药去除率为45.536%,农药因高温的作用残留水平下降,在稻谷收获后,经加工处理的整个过程,农药残留的去除率为99.161%。各加工过程中的加工因子均小于1,通过农产品加工过程可以有效去除农药残留。

加工对铁皮石斛中8种神经毒性农药残留的影响

[目的]分析测定8种神经毒性农药在铁皮石斛中以烘烤方式下加工成铁皮枫斗的加工因子。[方法]采用烘烤的加工方式将铁皮石斛鲜条加工成干样,用超高效液相色谱-串联质谱法测定农药在加工前后的残留水平,并计算不同烘烤时间的加工因子。[结果]建立超高效液相色谱-串联质谱法测定8种农药及其代谢物在铁皮石斛中残留分析方法。于70℃条件下烘烤12 h,茚虫威、三唑磷和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐加工因子平均值分别为5.4、4.8和4.8,位列前3;烘烤48 h,所有农药的加工因子在1.0~3.0。[结论]铁皮石斛鲜条在70℃烘烤12~48 h,所有农药的加工因子大于1.0,此结果可用于铁皮石斛加工时的质量控制。

不同清洗和加工方式对苹果中残留吡虫啉的去除效果

以苹果中残留吡虫啉为研究对象,根据中国家庭在苹果食用前的清洗习惯,选择6种不同清洗方式（清水冲洗、清水浸泡后再冲洗、食用盐溶液浸泡后再冲洗、食用醋溶液浸泡后再冲洗、食用碱溶液浸泡后再冲洗和果蔬清洗剂溶液浸泡后再冲洗）清洗苹果。研究表明,清水浸泡后再冲洗对苹果残留吡虫啉的去除效果最好,去除率为53.46%~84.23%,加工因子为0.157 7~0.465 4。在苹果加工方式中,清水浸泡后再冲洗、去皮对苹果残留吡虫啉去除率为91.20%~97.64%,加工因子为0.023 6~0.088 0。清水浸泡后再冲洗、去皮、榨汁对苹果残留吡虫啉的去除率为93.26%~97.85%,加工因子为0.021 5~0.067 4。此研究为评估不同的清洗、加工方式对苹果中残留农药的去除效果,对食品风险性评估具有重要指导意义。

加工过程对农药残留的影响研究进展

加工过程对农药残留的影响常用加工因子(Processing Factors,PF)来表示。加工不仅可以改善果蔬的食用特性,还对果蔬中农药残留具有重要影响。果蔬在食用前通常经历加工处理有清洗、去皮、烹饪等,某些农产品还会通过腌制、脱水等处理以改善保藏时间和食品风味。本文以常用的家庭处理为出发点,综述了加工过程对农药残留的影响,为确定合适的家庭处理方法提供参考,为膳食暴露评估提供数据依据,从而最大程度的减少食品中农药残留量,以维护消费者身体健康。

加工方式对芒果干制过程中保鲜类农药残留量的影响

为研究不同加工方式对芒果干制过程中保鲜类农药残留量的影响,以芒果干的加工过程为例,研究清洗、去皮、护色、硬化、热烫及干燥等各个加工环节对芒果中常用保鲜类农药咪鲜胺、多菌灵、甲基硫菌灵及代谢物2-氨基苯并咪唑残留量变化规律的影响。结果表明:在芒果干制的过程中,随着加工环节的增加,芒果中常用保鲜类农药总体呈逐渐下降的趋势;去皮对咪鲜胺的影响最大,降解率达94.82%;干燥脱水的过程使得芒果干中4种农药的残留量增加,与真空干燥相比,恒温干燥箱干燥可以较大程度的去除芒果干制过程中的大部分农药残留,农药去除效果较好。

我国菠菜及其加工制品卫生指标的判定与探讨

食品安全关系到消费者健康和公平贸易,而产品标准是一切规则的判定依据。本文系统论述了原料食品和加工食品中卫生指标最大残留限量的设定依据,并对各种菠菜及其制品卫生指标的判定和存在的问题进行了分析。建议采用以科学的风险评估作为设定标准指标的基础,结合产品加工过程中的加工因子和浓缩因子来确定卫生指标的最大残留限量,统一产品的判定依据,原料和产品指标要存在合理科学的连贯性。

三唑磷在柚子茶加工过程中的残留水平变化

为了解柚子茶加工过程中三唑磷残留的变化动态,通过田间喷施5倍最高推荐剂量的三唑磷溶液以强化农药在柚子上的残留,然后按照柚子茶加工工艺进行加工,采用Qu ECh ERS前处理技术结合气相色谱法检测三唑磷的含量,考察柚子茶加工过程对三唑磷残留量的影响。结果表明:三唑磷主要残留于柚的外果皮中,其残留量为全果的7.3倍,而果肉中的残留量不足全果的3%。清洗可去除全果中28.5%的残留量;脱苦与浸糖处理均可显著降低外果皮中三唑磷的残留量,其加工因子分别为0.83和0.60;柚子茶成品中三唑磷残留量为0.18 mg/kg,最终加工因子为0.069。

清洗及烹饪对芥菜和普通白菜中残留虫螨腈和高效氯氰菊酯膳食暴露风险的影响

为明确不同清洗和烹饪方式对芥菜和普通白菜中残留2种脂溶性农药(虫螨腈和高效氯氰菊酯)膳食暴露风险的影响,模拟厨房常用5种清洗方式(食用盐水、食用小苏打水、淘米水、自来水、食用醋水溶液)分别清洗芥菜和普通白菜,以及4种烹饪方式(煮、蒸、炒、腌制)烹饪加工后,利用QuEChERS样品前处理及气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)、超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法检测样品加工前后虫螨腈和高效氯氰菊酯的残留量变化,计算加工因子,并根据我国3个代表性人群(儿童、育龄妇女、一般人群)的膳食数据,估算加工前后农药膳食暴露量变化以及对长期膳食暴露风险的贡献率(ADIi%)和短期膳食暴露风险(%ARfD)的影响,评价了清洗和烹饪加工过程对减少农药残留膳食暴露风险以及降低膳食暴露风险评估不确定性的作用。结果表明:芥菜采用食用小苏打水清洗,普通白菜采用食用盐水清洗,对2种农药残留的去除效果最好,显著优于自来水清洗;经过清洗、烹饪后,其加工因子(PFTotal)在芥菜中介于0.06~0.24(虫螨腈)和0.04~0.11(高效氯氰菊酯)之间,在普通白菜中介于0.05~0.21(虫螨腈)和0.06~0.11(高效氯氰菊酯)之间,清洗及烹饪加工使得2种农药的估算暴露风险值降低了76%~96%。研究表明,日常厨房加工可不同程度降低虫螨腈和高效氯氰菊酯残留对我国代表性人群的长期及短期膳食暴露风险,针对芥菜和普通白菜而言,厨房加工可使高效氯氰菊酯残留的%ARfD<100%,但不能使虫螨腈残留的%ARfD<100%。

五种加工方式对黄瓜中10种农药残留的去除效果

在实验室模拟沉积农药条件下,通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)和气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测技术,研究了经水洗、水煮、炒制、去皮和腌制5种加工方式后,多菌灵、吡虫啉、啶虫脒、乙霉威、霜霉威、丙溴磷、氯氰菊酯、三唑磷、敌敌畏和嘧霉胺10种农药在黄瓜中的残留量变化情况。结果表明:在5种加工方式中,以去皮处理对农药的去除效果最明显,其中丙溴磷和氯氰菊酯的加工因子(PF)均为0.04,其他4种加工方式对农药去除效果的强弱顺序为水煮>炒制、水洗、腌制;农药的log Kow(辛醇水分配系数)值跟农药的去除效果直接相关,经水洗和水煮2种加工方式处理后,农药的log Kow值越小,越易被去除。另外,水洗、水煮和炒制处理,在0~10 min内随处理时间延长农药残留量呈减小的趋势,10种农药的PF变化范围为:水洗时PF在1.00~0.62之间,水煮时PF在0.86~0.37之间,炒制时PF在1.13~0.52之间。