低温保存皮肤的细胞骨架在细胞力传导中的作用

细胞骨架是细胞质内由微丝、微管、中间丝和一些辅助蛋白组成的蛋白细丝网状结构,它决定和维持细胞的形态。皮肤在低温保存时组织细胞体积发生较大变化,因此产生较为明显而且复杂的力学影响,由于细胞骨架的存在,使其没有足够的顺应性而受损。细胞骨架是组织细胞低温损伤的重要因素,研究低温保存时细胞骨架在细胞力传导中的作用对于提高皮肤低温保存效果意义重大。

甘草总黄酮对阿司匹林损伤人胃黏膜上皮细胞的保护作用及机制研究

目的探讨甘草总黄酮对阿司匹林损伤人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的保护作用及可能机制。方法 2017年3—11月,选取GES-1细胞株,分为6组,对照组:加DMEM培养基;阿司匹林组:阿司匹林18.5 mmol/L与GES-1共同培养24 h;甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组:GES-1分别以甘草总黄酮(3、6、12mg/L)预处理2 h后再加阿司匹林18.5 mmol/L共同培养24 h;PD98059组:GES-1以甘草总黄酮12 mg/L预处理2 h后,加PD98059 10μmol/L处理1 h,再加阿司匹林18.5 mmol/L共同培养24 h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,采用Western blotting法检测细胞磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)、B淋巴细胞癌2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果与对照组比较,阿司匹林组、甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组、PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达升高,SOD活性、Bcl-2表达降低(P<0.05);与阿司匹林组比较,甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组、PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达降低,SOD活性、Bcl-2表达升高(P<0.05);与甘草总黄酮低组、甘草总黄酮中组、甘草总黄酮高组比较,PD98059组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、LDH活性、MDA含量、p-ERK1/2、Bax表达降低,SOD活性、Bcl-2表达升高(P<0.05)。结论甘草总黄酮可通过促增殖、抗凋亡、抗氧化应激等途径减轻阿司匹林诱导的GES-1损伤,其机制可能与抑制ERK1/2信号通路有关。

基质金属蛋白酶-1/13与信号通路激酶ERK1/2在兔骨关节炎软骨中的表达

目的利用家兔膝关节前交叉韧带切断(ACLT)及内侧半月板前1/3切除的方法制作骨关节炎(OA)模型,测定关节炎发病的不同时期,关节软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1),基质金属蛋白酶-13(MMP-13)以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平的变化情况,探索它们之间的变化规律及关系。方法实验组家兔30只行ACLT及内侧半月板前1/3切除术造模,分别于术后4w、8w、12w处死10只,假手术对照组家兔10只于术后12w处死。进行股骨髁关节软骨退变的大体评分;取退变的软骨组织,用Westernblot印记杂交方法测定软骨组织中MMP-1,MMP-13和ERK1/2的蛋白表达水平。结果ACLT及内侧半月板前1/3切除术后4w即可见软骨退变,8w和12w时退变进一步加重,对照组无明显软骨退变,不同组动物关节软骨评分差异有统计学意义。MMP-1和ERK1/2的蛋白表达在正常对照组水平均较低,造模4w开始升高,到第8w及第12w持续升高;而MMP-13在造模4w时表达开始升高,造模第8w时持续升高,但在造模第12w时MMP-13的蛋白表达下降。结论家兔膝关节ACLT及内侧半月板前1/3切除制作OA模型的方法简便可行,MMP-1和MMP-13在骨关节炎的发病过程中有不同程度的升高,可以作为OA研究的评价指标。本实验结果提示,在OA发展的过程中,MMP-1和MMP-13的表达不平行,两者上游信号调控通路可能存在差异。蛋白激酶ERK1/2的表达水平从造模第4w开始持续升高,说明ERK1/2信号转导通路在骨关节炎发病过程中持续发挥作用。

脂肪因子Chemerin体外表达与妊娠期糖尿病胰岛素抵抗研究

目的探讨脂肪因子Chemerin与妊娠期糖尿病(GDM)胰岛素抵抗(IR)的内在联系。方法复苏、传代及诱导分化GDM前脂肪细胞,构建Chemerin过表达载体,进行载体转化、培养和提取;以3个过表达梯度(1.0μg、2.5μg、5.0μg)转染传代脂肪细胞,以无转染组为对照;Q-PCR检测Chemerin、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、IRS-2磷脂酰肌醇-3激酶[PI3K(P85a)]mRNA表达,Western blot检测Chemerin、IRS-1、IRS-2、PI3K蛋白表达及IRS-1、IRS-2酪氨酸磷酸化水平,[3H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取测定法检测不同浓度转染组细胞葡萄糖摄取率的变化。结果 (1)Chemerin mRNA及蛋白表达随转染浓度梯度升高而表达量增加,所构建Chemerin过表达载体有效;(2)随Chemerin表达增加,IRS-1/2、PI3K mRNA及蛋白表达未出现明显变化,但存在IRS-1磷酸化程度稍有增加,IRS-2磷酸化程度变化不明显;(3)脂肪细胞葡萄糖摄取率与Chemerin过表达浓度变化无明显关系。结论 Chemerin在GDM血清及网膜脂肪组织中的高表达与GDM胰岛素抵抗的发生无必然联系。

生理浓度丁酸钠对Caco-2细胞肠屏障作用中JNK通路的效应

目的 观察生理浓度丁酸钠作用Caco-2细胞肠屏障时JNK细胞信号通路的作用及与AMPK通路的关系.方法 建立Caco-2细胞单层肠屏障模型,分成不加药物的对照组（Con组）、仅添加2 mmol/L丁酸钠的生理浓度丁酸钠组（2BA组）、仅加入JNK特异性抑制剂的20μmol/LSP600125组（SP组）、20 μmol/L SP600125＋生理浓度丁酸钠组（Mix组）.检测各组处理后24、48、72 h跨上皮细胞电阻（TER）、CCK-8法吸光度及72 h菊粉-FITC透过率、流式细胞仪检测细胞凋亡水平、吖啶橙（AO）/碘化丙啶（PI）双染法荧光显微镜检测凋亡率、Western blot法检测JNK、AMPK、ACC等蛋白的表达.结果 2BA组TER在药物作用后24、48、72 h均明显高于Con组,以72 h时最显著,此时2BA组为（509.64±12.62）Ω·cm2,而Con组为（459.30±7.62）Ω·cm2 （P＜0.05）;Mix组TER为（261.01±9.22）Ω·cm2较2BA组（509.64±12.62）Ω·cm2低.Mix组72 h CCK-8吸光度为0.47±0.13、72 h菊粉-FITC为（7.89±0.80）cm/h、流式细胞仪凋亡水平为（61.23±1.54）％及AO/PI双染荧光显微镜凋亡结果为9.7±1.3,均比2BA组的0.98±0.08、（4.05±1.38）cm/h、（15.90±5.95）％、5.5±1.3高（P＜0.05）.2BA组p-AMPK、p-ACC水平较Con组和Mix组上调（P＜0.05）.Mix组p-JNK水平与2BA组相比显著下调（P＜0.01）.结论 生理浓度丁酸钠可增强肠屏障功能,而JNK特异性抑制剂可破坏这一作用,提示JNK在生理浓度丁酸钠增强肠屏障功能起协同作用,这一作用可能与AMPK活化有关.

骨细胞在力学信号感受过程中的作用

目的 综述骨细胞在力学信号感受过程中的作用.资料来源与选择国内外公开发表的相关学术论文及研究报告.资料引用引用文献资料57篇.资料综合主要对骨细胞的生物学特点,骨细胞与成骨细胞之间的差异,骨细胞的特殊结构在力传导中的作用,骨细胞是骨组织的力学感受器,骨细胞力学感受过程中的信息传递,骨细胞与失重性骨丢失等6个方面进行综述.结论 骨细胞是骨组织中的力学感受器,其感受机械刺激,通过细胞网络传递信号,在骨重塑过程中调节成骨细胞和破骨细胞的功能.

机械负荷调节猪腰椎间盘细胞表达α5β1整合素的体外研究

目的研究α5β1整合素在体外培养的猪腰椎间盘细胞中的表达和机械负荷对其的影响。方法取10只年龄5～6周、体重25～30kg的猪,处死后12h内,无菌条件下切取完整的腰椎,剔除腰椎周围的韧带和软组织,尤其是椎间盘周围的韧带。从腹侧一次性切开椎间盘取出髓核(nucleuspulpous,NP),仔细分离纤维环(anulusfibrous,AF),将两者立即置于Hanks平衡盐溶液中,制成细胞悬液。分别对腰椎间盘的AF和NP细胞施加1MPa、1Hz,3h/d,共3d的周期性液压,通过对细胞的形态学观察、Western免疫印迹和免疫组织化学染色,检测α5β1整合素在正常腰椎间盘AF细胞和NP细胞中的表达及周期性压力对其的影响。结果经周期性液压后,NP细胞的存活率大于90%,AF细胞的存活率大于85%,加压后的AF细胞和NP细胞均可见体积缩小。α5β1整合素在正常腰椎间盘AF细胞和NP细胞中的表达呈强阳性。Western免疫印迹结果显示:加压后α5β1整合素在AF细胞中的表达均明显减少,P值分别为0.000、0.003,与对照组比较差异有统计学意义;α5β1整合素在NP细胞中的表达也明显减少,P值分别为0.001、0.015,与对照组比较差异有统计学意义。结论机械负荷可引起腰椎间盘细胞中α5β1整合素的变化,提示α5β1整合素在腰椎间盘细胞中可能发挥力学传感器的作用。

口腔黏膜扁平苔藓差异基因筛选及其通路分析

目的应用基因芯片技术筛选口腔扁平苔藓(OLP)差异表达基因及其相关通路分析。方法分别从15例患者OLP组织和5例健康者口腔黏膜组织中提取总RNA,随后用反转录的方法将两种组织的mRNA分别进行荧光标记,与含有32050个基因的人类基因芯片进行杂交。探针长度为60mer,杂交信号用Genepix4000B扫描仪扫描,用芯片图像分析软件(GenepixProV6.0和Genesring)进行分析。结果经过杂交筛选并与正常组织比较,从32050个基因中筛选出有统计学意义的差异表达基因142个,其中上调表达基因25个,下调表达基因117个。有差异表达的通路8个。与OLP密切相关的通路有参与感染类疾病的幽门螺杆菌感染的上皮细胞信号传导通路(epithelial cell signaling in Helicobacterpylori infection)等。结论应用基因表达谱芯片可初步筛选出OLP差异表达基因和通路,OLP发生、发展过程中存在着多个不同基因及多条功能通路表达调控的改变。

肝纤维化模型中Nogo-参与转化生长因子-β1／Smad2信号通路的研究

目的探讨在小鼠肝纤维化模型中Nogo-B与转化生长因子β1（TGF-β1）／Smad2信号通路的关系。方法将24只健康雄性ICR小鼠分为正常对照组6只和肝纤维化模型组18只，模型组再按造模后不同时间点分为4、8和12周3个亚组。肝纤维化模型组皮下注射四氯化碳（CCl4）诱导小鼠肝纤维化模型，肝组织经HE和Masson染色后，光学显微镜下观察各组肝组织病理变化；RTPCR方法检测各组肝脏Nogo-B、Smad2和TGF-β1 mRNA表达；Western印迹法、免疫组织化学法检测各组肝脏NogoB、Smad2、TGF-β1蛋白表达。组间均数比较采用单因素方差分析。结果CCl4成功诱导肝纤维化模型。Nogo-B两种亚型Nogo-B1、Nogo-B2 mRNA在正常肝组织表达为0．140±0．050和0．104±0．023，在肝纤维化模型组肝脏中表达显著增加，造模12周时为1．054±0．040和0．500±0．057（F=431．41、135．46，均P〈0．01）；Nogo-B蛋白主要表达于肝脏间质中，肝细胞仅少量表达；且Nogo-B mRNA及蛋白的表达强度与参与肝纤维化信号通路相关因子Smad2、TGF-β1mRNA及蛋白均呈正相关（均P〈0．01）。结论NogoB可能通过参与TGF-β1／Smad2信号通路在肝纤维化发展过程中起重要作用，促进肝纤维化的发展。

整联蛋白在骨重建中的作用

骨重建过程是由间充质干细胞、成骨细胞、骨细胞和破骨细胞等多种细胞共同参与完成的细胞生物学反应。作为细胞膜表面重要跨膜蛋白,整联蛋白在该过程中发挥着重要作用。该文对整联蛋白在骨重建中的表达变化和功能作用进行综述,以期为后续研究及临床应用提供理论依据。