我国不同流行区利什曼原虫分离株动基体小环DNA序列分析

目的分析我国不同流行区利什曼原虫动基体小环DNA序列差异性。方法应用来自小环DNA保守区的一对引物KP1-KP2扩增该利什曼原虫动基体小环DNA,将扩增产物克隆于pGEM-T载体,随机选取5个阳性克隆进行双向测序,对获得的小环序列应用DNAStar软件进行比对分析,并利用Mega5.0构建系统进化树。结果应用KP1-KP2引物分别从来自我国不同流行区利什曼原虫虫株SC、KXG-Xu、KXG-65、JIASHI-1和801扩增出单一小环序列,长度分别为858bp,858bp,858bp,750bp和748bp。SC、KXG-Xu和KXG-65间序列一致性超过99%,JIASHI-1和801虫株序列均与其它虫株显示高度异质性。进化分析显示801与一杜氏利什曼原虫聚为一类,JIASHI-1与亲内脏的利什曼原虫聚为一大类,而SC、KXG-Xu和KXG-65三者聚为独自一类,和亲皮肤的利什曼原虫相比,与亲内脏的利什曼原虫有更近的亲缘关系。结论我国不同流行区利什曼原虫虫株小环序列存在较大差异性。

婴儿利什曼原虫汶川株动基体小环DNA序列分析

目的分析我国婴儿利什曼原虫汶川株动基体小环DNA株内序列差异性。方法应用来自小环DNA保守区的一对引物KP1-KP2扩增汶川株婴儿利什曼原虫动基体小环DNA。扩增产物克隆于pGEM-T载体,随机选取20个阳性克隆进行双向测序,应用DNAStar软件进行比对分析和开放阅读框预测,利用Mega5.0构建系统进化树。结果应用KP1-KP2引物从汶川株婴儿利什曼原虫扩增出动基体小环DNA片段,长约850bp。经序列比对可将20个阳性克隆序列区分为CQ18和CQ07两大类,进化分析显示这两类序列与杜氏利什曼原虫种团的原虫亲缘关系最近。CQ07序列含一较大开放阅读框,预计编码69个氨基酸残基的蛋白。结论婴儿利什曼原虫汶川株动基体小环DNA株内序列存在差异。