快速革兰氏染色法对大、小鼠动情周期的鉴别

目的通过快速革兰氏染色法分别对SD雌性大鼠、C57BL/6J雌性小鼠进行阴道涂片染色,镜下观察细胞形态,为快速鉴别动情周期寻求简单易行的染色方法。方法12只SD雌性大鼠和12只C57BL/6J雌性小鼠,56~62日龄,每天9:00采用阴道拭子法获得阴道涂片,干燥后进行快速革兰氏染色法,连续观察12 d,于光镜下观察细胞形态,判断其动情周期阶段。结果快速革兰氏染色法用时较短,操作简单,观察视野色彩鲜明,背景干净,绘制完整的大、小鼠动情周期变化图。结论快速革兰氏染色法可简单、直观的判断大、小鼠动情周期,并优化染色步骤,对染色中出现的异常情况进行逐一分析,将每张涂片染色时间缩短至1 min以内,对实验新手易于掌握,可推广应用。

运动性动情周期抑制雌性大鼠骨变化的实验研究

2月龄雌性SD大鼠进行十周大强度跑台运动后出现运动性动情周期抑制现象,以模拟长期耐力运动训练后女运动员出现的运动性闭经病理现象。比色法、放免法测定骨代谢生化标志物指标,单光子吸收法测定股骨、胫骨的骨密度,三点弯曲试验测定股骨、胫骨的生物力学特征。结果发现,与对照组相比,运动性动情周期抑制雌性大鼠骨形成指标显著性降低,骨吸收指标显著性升高,胫骨的骨密度显著性降低,股骨、胫骨的最大载荷、弹性载荷均显著低于对照组。结果揭示十周大强度跑台运动致运动性动情周期抑制雌性大鼠骨的支持功能降低。

运动性动情周期抑制的大鼠下丘脑-垂体轴细胞超微结构的变化

目的：为进一步探讨运动性月经失调（ＡＭＩ）的机制提供理论依据。方法：在建立递增负荷训练的运动性闭经动物模型的基础上，对大鼠下丘脑弓状核神经元和垂体促性腺细胞超微结构进行观察。结果：电镜下，７周训练组大鼠下丘脑弓状核神经元轴突髓鞘分离、树突肿胀，核周质线粒体空泡变。垂体促性腺激素（Ｇｎ）细胞、生长激素（ＧＨ）细胞、促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）细胞的粗面内质网扩张，线粒体嵴断裂和肿胀。尤其是促性腺细胞粗面内质网极度扩张，出现类似性腺阉割细胞（Ⅳ型）和脱颗粒细胞（Ⅴ型）。休息１周后未见恢复。结论：运动性动情周期抑制发生在下丘脑水平，短期休息调整不能恢复。下丘脑－垂体轴细胞超微结构的改变与运动强度和运动时间密切相关。

雌性大鼠动情周期中黄体生成素细胞形态变化的图像分析

应用特异性的ａ－ｒＬＨβ抗血清，以ＡＢＣ技术显示垂体黄体生成素（ＬＨ）细胞，通过计算机图像处理系统对ＬＨ细胞的面积、细胞内液泡面积和细胞形状等参数进行定量和统计分析，获得了大鼠正常动情周期各时期典型的ＬＨ细胞学图像。结果表明：ＬＨ的早期贮存和基础分泌主要同细胞内颗粒变化有关，而ＬＨ的大量贮存和大量释放同细胞内液泡的变化以及由此产生的细胞大小、细胞形状和细胞结构等形态变化密切相关。

运动性动情周期抑制雌性大鼠的骨结构与骨组织OPG mRNA、OPGL mRNA的表达

研究2月龄雌性SD大鼠进行10周大强度跑台运动后出现的运动性动情周期抑制现象,以模拟长期耐力运动训练后女运动员出现的运动性闭经病理现象,观察运动性动情周期抑制对骨组织结构的影响,探讨OPG、OPGL在运动性闭经致骨质降低中的作用。运用光镜、透射电镜观察股骨、椎骨的显微、超微结构、RT-PCR法定量测定大鼠股骨组织的OPG mRNA、OPGL mRNA的表达。结果与对照组相比,运动性动情周期抑制雌性大鼠的显微结构显示皮质骨变薄,破骨细胞的数目增多,松质骨的骨小梁数目减少、纤细、排列稀疏,超微结构显示衰老骨细胞的数目增多,少数细胞呈现凋亡早期特征,同时骨组织OPG mRNA表达降低,OPGL mRNA表达增加。结论:10周大强度跑台运动致运动性动情周期抑制雌性大鼠骨结构的完整性破坏,骨组织OPG/OPGL表达的降低是影响运动性动情周期、抑制雌性大鼠骨结构变化的重要原因之一。

大鼠模拟经前期综合征(PMS)肝气逆证动情周期血清激素水平的测定

本实验通过对雌性正常青年大鼠 (未孕 )和经脉冲电剌激 5天造模大鼠血清激素的测定 ,结果发现 :未孕正常大鼠血清中泌乳素 (PRL)、雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)在动情期的前、中、后三期变化很显著 (P <0 0 0 1) ;造模未孕大鼠三种激素除孕酮在中后期变化不显著、雌二醇在前中期较显著 (P <0 0 1)外 ,其余均很显著 (P <0 0 0 1) ,且三种激素与正常未孕相应期比除孕酮的中期变化不显著外 ,其余均变化很显著 (P <0 0 0 1)。

针刺对动情周期不同阶段大鼠下丘脑性唤起刺激兴奋性神经元电活动的影响

目的：比较针刺不同穴位对动情周期不同阶段大鼠下丘脑性唤起刺激兴奋性神经元电活动的作用，为遴选针刺调节生殖内分泌功能的有效穴位、确定最佳治疗时机提供实验依据。方法：雌性SD大鼠，以阴道脱落细胞检测大鼠动情周期。动情前期／动情期大鼠14只，动情间期／动情后期大鼠18只。用玻璃微电极记录下丘脑内侧视前区、弓状核、室旁核部位神经元放电。刺激阴蒂模拟性唤起刺激，记录神经元放电反应，再从颈外静脉给大鼠注射β-雌二醇等，观察是否有反馈性作用，进一步鉴定所记录的神经元属性。以该神经元放电为指标，比较在动情周期不同阶段针刺不同穴位（8个）30s对这类神经元的效应。实验在氨基甲酸乙酯（10％，1．0～1．2g／kg）麻醉状态下进行。结果：从针刺的穴位看，动情前期／动情期雌鼠针刺后神经元放电增加的百分率由大到小的顺序为：“子宫”“关元”“足三里”“肾俞”“中脘”“厥阴俞”“内关”“膻中”；动情间期／动情后期：“关元”“子宫”“足三里”“中脘”“肾俞”“厥阴俞”“内关”“膻中”。从针刺部位来看，下丘脑与阴蒂刺激相关的兴奋性神经元电活动增加的百分率由大到小的顺序为：下腹部（脐以下）、下肢、下背部（L1-S5）、上腹部（剑突-脐）、背部（T12以上）、胸部（剑突以上）、上肢。结论：针刺能有效调节下丘脑与模拟性唤起刺激相关的兴奋性神经元的电活动，但动情周期相同阶段针刺不同穴位和动情周期不同阶段针刺同一穴位对该神经元的激活效应不同，“子宫”“关元”的激活效应较明显。针刺部位或穴位的神经节段支配与生殖器官的神经节段支配越接近，对下丘脑内性唤起刺激相关的神经元的激活作用越明显。

围绝经期大鼠动情周期变化的研究

目的观察围绝经期大鼠动情周期的改变。方法连续15天对47只12月龄雌性SpragueDawley(SD)大鼠进行阴道脱落细胞涂片,观察大鼠动情周期的变化。结果大部分大鼠动情周期变化不规则,其中以动情后期和动情期延长为主,发生例数分别占动物总数的76.6%和38.3%。结论 12月龄大鼠已经进入围绝经期,并且动情周期发生紊乱,以动情后期和动情期延长为主要表现。

高能量饮食对运动性动情周期抑制大鼠血清FSH、LH和下丘脑NPY mRNA水平的影响

目的:探讨高能量饮食对运动性动情周期抑制大鼠血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)和下丘脑组织神经肽Y(NPY)mRNA水平的影响。方法:选用健康、成熟的2月龄雌性SD大鼠24只,随机分为3组:安静对照组(C组)8只,递增负荷训练组(T组)8只,递增负荷训练+营养干预组(Tn组)8只。C组大鼠和T组大鼠用基础饲料喂养,能量摄入为570kJ/只/天。Tn组大鼠用高能量饲料喂养,能量摄入为710kJ/只/天。训练组进行6周递增负荷训练。实验结束后,采用放射免疫法测定各组大鼠血清FSH和LH浓度;用反转录聚合酶链反应法测定下丘脑NPYmRNA水平。结果:T组大鼠血清FSH浓度和FSH/LH比值均显著高于C组(P<0.01),其下丘脑NPYmRNA相对表达量显著低于C组(P<0.01)。Tn组大鼠血清FSH浓度与FSH/LH比值均显著低于T组(P<0.01),其下丘脑NPYmRNA相对表达量显著高于T组(P<0.01)。结论:(1)持续递增负荷训练可导致大鼠卵巢功能低落及下丘脑NPYmRNA水平降低。(2)本研究采用的高能量饮食可以改善运动性动情周期抑制大鼠卵巢功能,维持下丘脑NPYmRNA水平。

NOD/SCID雌性小鼠动情周期的观察

目的观察NOD/SCID小鼠动情周期及卵巢切除术后阴道涂片的变化。方法连续观察9 d NOD/SCID鼠,每日进行两次阴道涂片,计算动情周期时间及发生率。卵巢切除后,阴道涂片并观察阴道涂片变化。结果NOD/SCID小鼠动情周期为4-6 d。有规律动情的小鼠占80%。阴道口状态与动情周期无明显相关。卵巢切除术后,阴道涂片呈动情后期或动情间期改变。结论采用阴道脱落细胞涂片法可判断NOD/SCID雌性小鼠的动情周期及特点,NOD/SCID雌性小鼠卵巢切除手术有效。

动情周期中大鼠子宫和输卵管壁肥大细胞数量变化的研究

用放射免疫分析法对动情周期中大鼠血清雌二醇浓度进行检测 ;取子宫、输卵管常规石蜡切片、 H- E染色 ,并用甲苯胺蓝染色显示肥大细胞 ,于光镜低倍视野下计数。结果显示 :动物血清雌二醇浓度依次为 :动情期 (E)组 >动情前期 (PE)组 >动情后期 (ME)组 >动情间期 (DE)组 ,各组间差异均有显著性 ;在子宫 ,肥大细胞分布于宫壁肌层平滑肌束间的结缔组织内、近小血管处 ,以微血管周居多 ,常见单个散在 ,于 ME子宫内膜尚偶见肥大细胞 ;输卵管肥大细胞局限于其外膜层内、近小血管周围 ,亦多散在。子宫、输卵管壁内的肥大细胞镜下呈圆形、椭圆形或略不规则形 ,胞浆内充满紫红色粗大颗粒。子宫肥大细胞数量依次为 :ME>DE>PE>E,各组间差异有显著性 (DE与 PE、PE与 E,P<0 .0 5 ,余组间 P<0 .0 1) ;输卵管壁内肥大细胞数量各组间差异无显著性 (P>0 .0 5 )。本文尚对大鼠血清雌二醇水平波动与子宫、输卵管壁内肥大细胞数量变化的关系及其生理意义进行了讨论。

大鼠动情周期不同阶段加力对正畸牙移动的影响

目的探讨在雌性大鼠动情周期不同阶段加力对正畸牙移动的影响,以期为正畸临床女性患者的治疗选择最佳介入时间提供参考。方法选取3月龄Wistar雌性大鼠80只,随机分为对照组、加力组。各组又根据所处动情周期的不同阶段分为4个亚组(动情前期、动情期、动情后期和动情间期)。加力组分别在动情周期的特定阶段给予重复的间断力4次,而后测量大鼠的左侧上颌切牙远中邻面和同侧第一磨牙近中邻面间的距离。单因素方差分析、S_N_K法进行统计分析处理。结果动情周期的不同阶段加力组的牙移动总量的差异有统计学意义(P<0.01)。组间两两比较显示:动情前期加力组和动情期加力组牙移动量的差异有统计学意义(P<0.05);动情后期加力组和动情间期加力组的差异无统计学意义(P>0.05),但它们与前两组的差异有统计学意义(P<0.05)。在动情前期加力进行牙移动,牙移动量最小;在动情期加力,则牙移动量最大。结论选择在动情周期的不同阶段进行正畸加力,所获得的牙移动效果不同。

运动性动情周期抑制雌性大鼠下丘脑谷氨酸与GnRHmRNA关系的探讨

2月龄雌性SD大鼠进行十周大强度跑台运动后出现运动性动情周期抑制现象,以模拟长期耐力运动训练后女运动员出现的运动性闭经现象,酶法测定下丘脑谷氨酸的含量,RT-PCR法测定大鼠下丘脑GnRH mRNA表达。结果显示,与对照组相比,十周大强度跑台运动致运动性动情周期抑制大鼠血清雌、孕激素水平降低,下丘脑谷氨酸含量降低,下丘脑GnRH mRNA的表达降低。提示十周大强度跑台运动引起下丘脑GnRH的转录功能降低是运动性动情周期抑制产生的重要原因,下丘脑谷氨酸含量的降低可能是影响下丘脑GnRH转录功能的重要因素。

Neuropilin-1 mRNA在不同动情周期及周龄阶段小鼠卵巢中的表达

目的:探讨Neuropilin-1(NRP-1)mRNA在繁殖适龄期小鼠动情周期间以及不同周龄阶段小鼠卵巢中的表达。方法:选用繁殖适龄期不同动情周期小鼠以及不同周龄阶段小鼠,通过实时定量聚合酶链反应检测其卵巢中NRP-1 mRNA的表达。结果:NRP-1在小鼠不同动情周期卵巢中的表达在mRNA水平差异无显著性(P>0.05)。比较其mRNA在不同周龄阶段小鼠卵巢的中表达显示,近绝育期32周组表达水平显著高于其他组:为3周组的2.94倍(P<0.01),6周组的4.92倍(P<0.01),11周组的2.29倍(P<0.01)。而其他各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NRP-1 mRNA在小鼠卵巢中的表达不随动情周期而改变,且随着卵巢生理功能的下降而显著升高,提示NRP-1与卵巢衰老进程有关。

性成熟雌性SD大鼠动情周期的观察

目的通过SD大鼠阴道涂片观察,及时准确判断大鼠是否存在正常动情周期及动情周期各阶段持续时间,为进一步的药物去势及反向添加药物实验提供依据,提高实验准确性。方法对40只12周龄SD雌性大鼠连续15 d进行阴道涂片、镜检,观察阴道组织涂片中细胞的变化,并记录图像,进行分析。结果 3只大鼠不存在明显动情周期,退出实验。大鼠一个动情周期约为(110.88±20.42)h,动情期持续约(12.24±3.36)h。结论阴道组织涂片法是有效区分大鼠动情周期的各个阶段的一种简便方法。根据阴道涂片判断各雌鼠所处的动情周期阶段,可以提高实验操作准确性。

递增负荷训练诱导的动情周期抑制大鼠肾上腺结构与功能变化

目的:从肾上腺轴(HPA)对性腺轴(HPO)影响的角度,探讨运动性月经失调(AMI)的发生机制。方法:将35只成熟、健康的雌性2月龄SD大鼠随机分为对照组(C),7周训练组(Ta),7周训练恢复1周组(Tar),5周训练组(Tb)和3周训练组(Tc)。跟踪观察大鼠阴道细胞脱落情况。训练期结束后,使用电子透射显微镜和光学显微镜分别观察大鼠肾上腺皮质束状带细胞的超微结构和肾上腺直径及厚度,用化学发光法(CLIA)检测各组大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。结果:(1)训练5周后,Ta、Tb组大鼠出现不同程度的动情周期抑制。训练至第7周,Ta组大鼠阴道中底层细胞最多。(2)Ta、Tb组大鼠肾上腺皮质束状带窦状血管明显扩张,线粒体增多,线粒体和脂滴多见“半包裹”、“全包裹”现象;Tar组大鼠胞浆内出现胆固醇结晶体,胞浆浓缩,轻度核固缩;Tc组肾上腺束状带细胞胞浆内线粒体出现增生。光镜下,Ta组大鼠肾上腺皮质较C组明显增厚。(3)随着运动负荷的递增,大鼠血浆ACTH呈正性增高。Ta组与C组相比有显著性差异(P<0.05),恢复1周后,大鼠血浆ACTH水平有所下降。结论:递增负荷运动诱导了大鼠动情周期的抑制和肾上腺束状带结构与功能的改变。大鼠动情周期抑制发生在肾上腺轴活化到一定程度之后。经过短暂休息,大鼠动情周期抑制状况未见明显改观,这与垂体-肾上腺轴仍处于较高的活化水平有关。提示HPA轴的过度活化可能参与调节了AMI的发生。

人参茎叶皂甙对实验性高催乳素血症大鼠催乳素和动情周期的影响

目的和方法:采用异体垂体前叶移植的方法制造大鼠慢性高催乳素血症模型,探讨人参茎叶皂甙对高催乳素血症大鼠催乳素和动情周期的作用。结果:①垂体前叶移植大鼠血清PRL水平升高而原位垂体PRL含量降低,GSLS则使高催乳素血症大鼠血清PRL水平降低,原位垂体PRL含量降低;②高催乳素血症大鼠动情周期显著受到抑制,而GSLS可拮抗高催乳素血症对大鼠动情周期的抑制作用。结论:GSLS有治疗高催乳素血症的应用前景。

递增负荷训练诱导的动情周期抑制大鼠甲状腺超微结构与功能变化的研究

目的:探讨递增负荷训练诱导的动情周期抑制的大鼠甲状腺超微结构与功能的变化,进一步阐明运动性月经失调的发生机制。将35只成熟、健康的雌性2月龄大鼠随机分为:对照组(C)、递增负荷训练7周组(Ta其中有7只为恢复1周Tar组)、5周组(Tb)、3周组(Tc)。结果:随运动负荷递增,大鼠阴道中底层细胞数量逐周增加,第7周最高;Ta、Tb组大鼠甲状腺腺泡上皮细胞胞浆内粗面内质网扩张,出现较多的分泌大泡和合成泡及变性坏死的细胞;恢复1周后,粗面内质网异常扩张,有较多的溶酶体;Ta、Tar组大鼠血清TSH浓度较C组有高度显著性差异(P<0.01);Ta组大鼠训练前3周饮食量最高,3周后随训练强度增大饮食量下降;训练前后Ta组大鼠体重增幅明显低于C组(P<0.05)。结论:7周训练诱导了大鼠动情周期抑制和甲状腺功能的减退。提示,甲状腺功能减退是AMI发生机制之一。

癫痫模型大鼠动情周期及卵巢形态学的改变

目的探讨大鼠动情周期及卵巢形态学在杏仁核电刺激点燃的癫痫模型中的变化。方法 35只8周龄SD雌性大鼠,随机分为癫痫模型组(n=15)、假手术组(n=10)和对照组(n=10)。癫痫模型组,双极电极植入大鼠左侧杏仁基底外侧核,给予连续电刺激,建立电点燃的癫痫模型;假手术组,电极植入后不给予电刺激;对照组为正常雌性大鼠。所有大鼠每天清晨行阴道细胞涂片,以监测动情周期。癫痫模型大鼠在点燃20 d后于动情周期的间期取右侧卵巢组织,同期其他两组大鼠也分别于动情间期摘取右侧卵巢组织,制作病理切片,HE染色后镜下阅片,采用Image-ProPlus 6.0分析软件进行形态学分析。结果癫痫模型大鼠失去正常动情周期,日均体重获得及卵巢重量均较假手术组及对照组显著增高(P<0.05);病理显示,癫痫模型组大鼠卵巢中窦前卵泡、总卵泡数及闭锁卵泡显著增多(P<0.05),卵巢发生多囊性改变。结论癫痫发作可影响大鼠排卵功能,并导致大鼠发生卵巢多囊性改变。

确定小鼠动情周期的三种方法

目的为选择确定小鼠动情期的最准确和方便的方法,取成熟雌性昆明小鼠,每日晨取阴道脱落细胞及宫颈黏液做涂片,置显微镜下观察,分别用宫颈黏液结晶法、阴道脱落细胞学检查法、阴道脱落角化细胞计数法三种不同方法来确定小鼠动情期。结果显示:三种方法均可以确定小鼠动情期,但三种方法比较,宫颈黏液结晶法特异性差;阴道脱落细胞学方法较为准确,但有假阴性现象;角化细胞计数法直观方便,结果最为客观准确。