动物实验的研究计划指南——PREPARE解读

临床前动物实验是连接基础医学和临床医学的关键环节,动物实验设计的规范性对于动物实验的质量、可重复性、结果的可信度至关重要。本文对目前国际上已有动物实验的研究计划指南(PREPARE)进行介绍,PREPARE涵盖3个领域(研究计划制定、实验研究人员与动物实验室团体协作的构建、实验过程的质量控制),其中包含15个条目和42个亚条目,旨在普及相关知识,提高研究者对动物实验设计阶段的重视,同时为国内研究者规划动物实验提供参考。

加强国际动物实验注册平台建设——基于注册计划书的系统调查

目的详细分析国际动物实验注册平台研究计划书的流行病学特征,为动物实验注册的建设和完善提出有益建议。方法获取荷兰PCT和德国ASR动物实验注册平台截至2023年12月30日注册的动物实验原始计划书并提取信息,采取频数及构成百分比统计描述数据。结果共纳入272篇注册计划书,其中PCT平台124篇,ASR平台148篇,来自于31个国家,涉及47个不同的研究领域,共包含11种不同动物;实验设计方法,仍有10.0%(27/272)的研究未提及随机分组,而且即使进行了随机分组的实验(132/272)均未提及隐蔽分组;24.6%(67/272)和35.3%(96/272)的研究未报告干预实施阶段和结局指标测量阶段的盲法应用情况;仅43.3%(97/224)实验在计划书规定时间内完成。结论动物实验的注册作为提高动物实验质量的重要措施,应该得到重视和推广,注册平台与研究者应合作优化注册平台机制,提高计划书质量,增强实验透明度,共同提高动物实验的质量,为动物实验的临床转化提供更可靠的基础。

动物实验研究注册平台简介

临床前动物实验是连接基础医学和临床实践的重要桥梁,动物实验注册的必要性日益显现。本文对目前国际上已有动物实验注册平台、注册内容、流程进行介绍,并比较分析,旨在普及动物实验注册相关知识,提高研究者注册意识,同时为国内研究者进行动物实验注册提供参考。

基于网络药理学及动物实验探讨银杏叶对肥胖症的作用

目的 基于网络药理学及动物实验探讨银杏叶干预肥胖症的潜在作用机制。方法 运用TCMSP数据库检索银杏叶活性成分及其靶点,Gene Cards及TCMSP数据库获取肥胖症相关靶点,将活性成分作用靶点与肥胖症相关靶点进行映射,筛选出银杏叶与肥胖症的共同靶点,构建“中药-活性成分-靶点-疾病”网络。运用String数据库构建靶点蛋白之间相互作用网络(PPI),并进行GO功能和KEGG通路富集分析。最后通过分子对接、肥胖犬模型进行验证。结果 共得到27种活性成分,108个银杏叶与肥胖症相交靶点。槲皮素、木犀草素、山柰酚等核心活性成分与肥胖症关系密切。TNF、Akt1、IL-6、PPARG等53个靶点为银杏叶治疗肥胖症的潜在核心靶点,主要富集于GO生物过程(BP)和KEGG通路中的TNF、癌症等信号通路。槲皮素、木犀草素、山柰酚能与TNF、Akt1、IL-6、PPARG靶点稳定结合。银杏叶干预后,肥胖犬体质量、血脂及血清TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),脂肪组织PPARγ、Akt1、TNF-α、IL-6 mRNA表达降低(P<0.05),PPARγ及Akt1磷酸化水平降低(P<0.05)。结论 银杏叶可能通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等活性成分作用于PPARG、Akt1、TNF、IL-6等靶点,调节多条信号通路来治疗肥胖症。

CNAS⁃CL06体系良好运行对动物实验数据科学性的积极作用

药品生物制品检验检测机构的动物实验室承担着检测和科研工作的重要支撑任务。本文梳理了中检院CNAS⁃CL06质量管理体系在运行中积累的管理经验,为同类机构在运行中提供借鉴,以保障动物实验数据的科学性。本实验动物机构顺利通过了CNAS实验动物机构认可,并在现场监督评审中按时完成了整改,同时依据《实验动物饲养和使用机构质量和能力认可准则》(CNAS⁃CL06)开展体系定期自查。在自查过程中一边检查问题一边完善体系内容,从动物采购、职业健康安全、动物疾病治疗与护理、设施运行突发事件演练等几方面着手,充实了质量管理体系内容,确保体系持续有效运行,保障了动物实验数据的有效性和标准化,同时在动物实验平台共享方面贡献了中检院的管理思路,为动物实验的云平台建设提供硬件和软件支撑。本文旨在根据工作实际探索形成实验动物行业质量管理模式,为制定和执行国家标准、行业/团体标准、认可认证标准等机构提供基础数据,为开展动物实验的机构提供可供探讨的管理模式,也为推动整个动物实验的规范化、科学化发展水平夯实基础。

医学研究生动物实验课教学改革:培养学生主动学习和创新思维的能力

动物实验课是医学及生命科学相关专业中重要的实践教学环节,对医学类研究生的实验技能、科学思维和创新能力的培养具有重要意义。然而,传统的动物实验课教学方式存在内容单一、研究生参与度不高等问题。为更好地促进研究生主动学习和创新思维的培养,本文旨在探讨动物实验课的教学改革。首先,介绍动物实验课教学改革的背景和意义,强调其对研究生能力培养的重要性。其次,提出动物实验课教学改革的原则,包括以研究生为中心、注重问题解决和实践探索、促进跨学科融合等,同时将中国实验动物福利伦理审查贯穿其中。然后,从课程设计、教学方法、评价方式等方面,详细阐述动物实验课教学改革的具体措施。在课程设计上,应注重选取有挑战性和探索性的实验项目,充分考虑研究生的兴趣和专业需求。在教学方法上,应鼓励研究生主动参与、探索和合作,引导他们进行问题解决和创新思维的培养。在评价方式上,应采用多样化的评价手段,如实验报告、小组讨论和项目展示等,以全面评估研究生的综合能力和创新思维。最后,通过实践验证和效果评估,总结动物实验课教学改革的经验和成果,并提出进一步完善的建议。

基于网络药理学方法、分子对接技术及动物实验探讨参威骨痹汤治疗骨质疏松症的作用机制

目的:探讨参威骨痹汤治疗骨质疏松症(osteoporosis,OP)的作用机制。方法:①网络药理学研究。采用超高效液相色谱-质谱法鉴定参威骨痹汤中的化合物,采用网络药理学方法初步筛选参威骨痹汤治疗OP的关键活性成分和靶点。②分子对接验证。采用分子对接技术验证网络药理学研究确定的参威骨痹汤治疗OP的关键活性成分与靶点的结合效果,从中筛选结合效果最好的组合。③动物实验验证。将60只雌性C57BL/6JNifdc小鼠随机等分为5组,模型组和参威骨痹汤低、中、高剂量组小鼠通过双侧卵巢切除手术进行OP造模,假手术组小鼠仅切取卵巢周围等体积的脂肪组织。参威骨痹汤低、中、高剂量组小鼠分别按照14.95 g·kg^(-1)·d^(-1)、29.9 g·kg^(-1)·d^(-1)、59.8 g·kg^(-1)·d^(-1)以参威骨痹汤药液灌胃,假手术组和模型组小鼠以等体积生理盐水灌胃。药物干预8周后,取股骨进行Micro-CT检查和组织病理学观察(HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶染色),采用实时定量PCR技术测定胫骨组织中根据网络药理学和分子对接技术确定的关键靶点基因的mRNA表达水平。结果:①网络药理学研究结果。网络药理学研究结果显示,SRC、促分裂原活化的蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、MAPK1、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基1(phosphatidylinositol-3-kinase regulatory subunit 1,PI3KR1)、信号转导及转录活化因子3为参威骨痹汤治疗OP的关键靶点,五味子丙素、10-姜酚、对羟基苯甲酸丁酯、倍半萜内酯和香豆雌酚为参威骨痹汤治疗OP的关键活性成分。②分子对接验证结果。分子对接结果显示,参威骨痹汤治疗OP关键活性成分与关键靶点的结合能均小于-5 kJ·mol^(-1),表明结合效果良好,其中靶点SRC、MAPK3、PI3KR1与活性成分五味子丙素、10-姜酚、对羟基苯甲酸丁酯的结合效果更好。③动物实验验证结果。Micro-CT检查及组织病理学观察结果显示,参威骨痹汤能改善OP模型小鼠的骨质疏松程度,其中中剂量参威骨痹汤效果更好。实时定量PCR测定结果显示,参威骨痹汤中剂量组胫骨组织中SRC mRNA和MAPK3 mRNA表达水平低于模型组,PI3KR1 mRNA表达水平与模型组比较差异无统计学意义。结论:参威骨痹汤治疗OP的机制可能是通过五味子丙素、10-姜酚、对羟基苯甲酸丁酯等成分调控SRC、PI3KR1、MAPK3的表达来调节骨代谢。

基于网络药理学和动物实验探讨芪遂逐水膏敷贴剂抗肝硬化腹水的作用机制

目的基于网络药理学和动物实验探讨芪遂逐水膏敷贴剂调控肝硬化腹水的作用机制。方法采用TCMSP数据库筛选芪遂逐水膏活性成分及对应靶点,构建PPI网络。通过DAVID进行GO和KEGG分析,GeneCards数据库查找肝硬化腹水相关靶点,对芪遂逐水膏和肝硬化腹水的共有靶点进行PPI分析,通过Cytoscape软件分析共有靶点的核心基因。构建肝硬化腹水大鼠模型,给予高、低剂量芪遂逐水膏敷贴治疗(1 cm×1 cm、2 cm×2 cm),检测血清ALT、AST活性及TBIL、ALB水平,HE染色观察肝脏病理变化,Western Blot法检测VEGFA、CASP3、MAPK8、AKT1、TP53蛋白表达。结果收集得到芪遂逐水膏13种活性成分和240个预测靶点,参与药物反应、氧化应激、活性氧代谢过程,芪遂逐水膏与肝硬化腹水共同靶点86个,涉及脂质和动脉粥样硬化、流体剪切应力和动脉粥样化等通路。肝硬化腹水大鼠肝脏有大量炎性细胞,血清ALT、AST活性和TBIL水平升高,ALB水平降低(P<0.05,P<0.01);芪遂逐水膏能改善肝脏病理变化,降低ALT、AST活性和TBIL水平,升高ALB水平(P<0.05,P<0.01),同时能下调VEGFA、CASP3、MAPK8、AKT1、TP53蛋白在肝硬化腹水中的表达。结论芪遂逐水膏调控肝硬化腹水具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点,可能与VEGFA、CASP3、MAPK8、AKT1、TP53相关靶点有关。

基于网络药理学、分子对接和动物实验探究柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗脑卒中后抑郁的作用机制

目的:基于网络药理学、分子对接与动物实验探究柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗脑卒中后抑郁(PSD)的作用机制。方法:利用TCMSP等数据库预测柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤的活性成分及靶点;在PharmGKB等数据库检索PSD疾病靶点,利用Cytoscape(v 3.9.1)建立交集靶点网络,String(v11.5)数据库构建PPI网络,利用DAVID 6.8数据库进行GO富集及KEGG通路分析;运用AutoDock vina(v 1.1.2)软件进行分子对接,并使用Pymol(v 2.5)等软件进行可视化分析;动物实验设置空白组、模型组、盐酸氟西汀组、中药组、中药+盐酸氟西汀组,给药21 d后检测各组大鼠神经行为学评分、脑组织内神经递质以及炎症因子表达,RT-qPCR和Western blot检测关键基因PPARG、MAPK3、AKT1、PIK3CA mRNA及蛋白表达。结果:得到柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤活性成分225种,作用于PSD的靶点119个,关键靶点包括MAPK3、AKT1、PIK3CA、PPARG,关键通路包括MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等。与模型组比较,中药组与中药+盐酸氟西汀组MAPK3 mRNA及蛋白表达降低,AKT1、PIK3CA、PPARG mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。结论:柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗PSD的作用机制可能与抑制MAPK3表达、促进AKT1、PIK3CA、PPARG表达,减缓脑组织炎症反应和氧化应激有关。

中医药治疗过敏性紫癜的动物实验研究进展

过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是儿童期最常见的系统性血管炎,中医称之为“斑毒”“紫癜风”“葡萄疫”。现代医学研究认为该病与细胞免疫及体液免疫失衡、细胞因子分泌异常、凝血与纤溶机制紊乱等因素相关,但具体发病机制仍不明确。此病发病率逐年上升,复发率高,肾受损比例高,严重影响患儿身心健康,社会危害性大。众多研究表明中医药治疗HSP临床疗效良好,但其作用机制尚不完全明晰。近年来,随着HSP动物模型的建立,开展了大量的动物实验进行中药疗效机制的研究,但缺乏较系统的、细致的综述,故对近十年中医药治疗HSP的动物实验相关文献进行整理,从中医药在缓解IgA1异常糖基化、调节Th1/Th2及Treg/Th17免疫失衡、减少循环免疫复合物、抑制炎症反应等方面作出归纳和总结,以期为中医药治疗HSP的深入研究提供参考,启发新的研究思路。

基于网络药理学及动物实验探讨补肾活血方治疗多囊卵巢综合征的作用机制

目的基于网络药理学及动物实验探讨补肾活血方治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的作用机制。方法通过TCMSP、GeneCards、OMIM、CTD数据库获取疾病靶点,构建PPI网络、“药材-成分-靶点”网络,对关键靶点进行GO、KEGG分析,并对关键活性成分与靶点进行分子对接。通过动物实验验证补肾活血方对多囊卵巢综合征的作用靶点。结果网络药理学表明,补肾活血方的关键成分为槲皮素、山柰酚、谷甾醇、异补骨脂查耳酮、阿魏酸,治疗多囊卵巢综合征的关键靶点为EGFR、SRC、JUN,主要通过PI3K/Akt、MAPK、Rap1、Ras、Ca^(2+)等信号通路发挥作用。动物实验表明,与模型组比较,补肾活血方能降低胰岛素水平,增加各级卵泡数和黄体数,降低LH、T水平,升高E2、FSH水平,改善卵巢组织病理形态,颗粒细胞层数变多且规则排列,升高卵巢组织PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达。结论补肾活血方具有多成分、多靶点、多途径特性,可能通过PI3K/Akt信号通路改善胰岛素抵抗治疗多囊卵巢综合征。

可生物降解Zn-2Ag-0.04Mg合金生物相容性及体内骨再生能力的动物实验研究

目的:采用动物实验的方式,分析可生物降解Zn-2Ag-0.04Mg合金生物相容性及体内骨再生能力。方法:将30只实验兔随机均分为Zn支架组、Zn-2Ag支架组和Zn-2Ag-0.04Mg支架组(每组10只),建立兔股骨缺损模型后,分别使用不同材料的支架固定,术后6周及术后6个月,取出部分大白兔股骨,使用Micro-CT对股骨远端入口周围直径为3 mm的区域进行扫描和三维重建,分析支架体内成骨性能,使用X线观察局部骨缺损愈合情况,并观察股骨组织学情况。结果:入组实验兔实验中未出现异常行为及死亡现象,伤口均愈合良好,无感染及渗出情况出现;二维和三维显微CT结果显示,Zn-2Ag-0.04Mg支架组的新生骨明显多于Zn支架组,Zn-2Ag-0.04Mg合金支架组的骨体积更大(P<0.05);Zn-2Ag-0.04Mg支架组的成骨指数也高于Zn支架组(P<0.05);术后6个月时,Zn-2Ag-0.04Mg组的支架比Zn组或Zn-2Ag组小(P<0.05);肝脏、肾脏和心脏的HE染色未检测到任何异常,证实了Zn-2Ag-0.04Mg合金支架的生物安全性。结论:Zn-2Ag-0.04Mg支架具有良好的生物相容性和体内骨再生能力,具有较好的临床应用前景。

CKIP-1 siRNA影响膝关节骨性关节炎进展的动物实验研究

目的 探讨CKIP-1 siRNA对膝关节骨性关节炎进展的影响研究。方法 建立大鼠膝关节骨关节炎模型,选取其中一只分离培养实验大鼠骨髓间充质干细胞,分为空白组、阴性对照组和不同浓度的Ckip-1 siRNA组(10 pmol/ml、20 pmol/ml和50 pmol/ml)检测不同组的Ckip-1 siRNA表达量,确定最佳的Ckip-1 siRNA组为50 pmol/ml;将大鼠模型分为模型组20只、生理盐水组20只、CKIP-1 siRNA组20只,向生理盐水组注射生理盐水,向CKIP-1 siRNA组注射CKIP-1 siRNA干预的骨髓间充质干细胞,空白组不做处置。检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量,检测其成骨能力变化情况。结果 检测注射后的实验鼠膝关节处成骨相关基因OPN、Runx2的mRNA的相对表达量明显增加(P<0.05),检测其成骨能力增强(P<0.05)。结论 Ckip-1基因对骨髓间充质干细胞的负调控作用。CKIP-1 siRNA干预后骨髓间充质干细胞能够增加实验鼠膝关节处骨再生能力,为膝关节骨性关节炎的治疗提供新的方法,期望能够提出新的靶点。

基于网络药理学和动物实验探讨管花肉苁蓉苯乙醇苷对糖尿病肾病的作用

目的 基于网络药理学和动物实验探讨肉苁蓉苯乙醇苷(CPhGs)对糖尿病肾病(DKD)的作用。方法 UHPLC-QE-MS法分析CPhGs化学成分,TCMSP、Swiss Target Prediction数据库筛选核心成分,OMIM、GeneCards数据库获取DKD相关靶点,获得共同靶标后使用STRING网站构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行GO、KEGG通路分析,Cytoscape软件构建“CPhGs核心成分-靶点-通路”网络。随机选取10只大鼠作为正常组,其余大鼠用高糖高脂饲料喂养及单次腹腔注射STZ建立DKD模型,分为模型组、达格列净(1 mg/kg)组和CPhGs高、中、低剂量(500、250、125 mg/kg)组,每组10只,药物干预6周,观察一般情况,每周称定体质量并检测血糖;末次给药后收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白总量(24-UTP);腹主动脉取血并处死,分离血清,检测尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平,HE染色及Masson染色观察肾组织病理变化,ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测肾组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS3蛋白表达。结果 UHPLC-QE-MS技术共检测得到699种成分,经筛选后获得CPhGs核心成分16种,相关靶点323个,CPhGs与DKD共有靶点99个,关键靶点为STAT3、SRC、EGFR等。KEGG通路分析筛选了151条信号通路,显示IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、TNF信号通路等可能在CPhGs治疗DKD的过程中发挥关键作用。CPhGs能增加DKD大鼠体质量(P<0.01),减少饮水量(P<0.01),调节糖脂代谢,降低24-UTP、BUN水平(P<0.01),改善肾脏组织病理损伤,降低肾组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达(P<0.01),提高SOCS3蛋白表达(P<0.01)。结论 CPhGs通过多成分、多靶点、多途径干预DKD,可能通过抑制DKD大鼠肾脏JAK2/STAT3信号通路来发挥作用。

基于生物信息学及动物实验对芪黄固肾通络方治疗糖尿病肾病的研究

目的:探讨芪黄固肾通络方治疗糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法:通过人类基因数据库(GeneCards)、治疗靶点数据库(TTD)、人类疾病相关基因和突变基因数据库(DisGeNET)、综合性药物数据库(DrugBank)等数据库查找芪黄固肾通络方的活性成分、作用靶点、DKD相关的靶点。将药物目标点与病变靶点进行映射,将所获得的交集目标点构造蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络与活性组分-联合目标网络,并进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。通过动物实验对网络药理学结果中芪黄固肾通络方治疗糖尿病肾病核心靶点中富集节点较多的前3靶点进行验证。选取C57BL/6J小鼠为研究对象,链脲佐菌素(STZ)连续2次腹腔注射制备动物模型,8周后测小鼠24 h尿蛋白定量,分为正常组、模型组、模型+芪黄固肾通络方组,干预8周后,测胰岛素、C肽、尿素氮、24 h尿蛋白定量,qPCR及蛋白质印迹法(Western Blotting)检测小鼠肾脏CTNNB1、JUN、NCOA1表达。结果:GO与KEGG富集分析显示芪黄固肾通络方治疗DKD的有效靶点主要涉及晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、血脂和动脉粥样硬化、流体剪切应力与动脉粥样硬化、神经活性配体-受体交互作用等;动物实验表明,芪黄固肾通络方能够降低DKD小鼠肾组织中连环蛋白β1(CTNNB1)、JUN、核受体辅激活蛋白1(NCOA1)的信使核糖核酸(mRNA)及蛋白表达,改善肾脏损伤。结论:通过网络药理学和实验验证,发现芪黄固肾通络方可能通过降低CTNNB1、JUN、NCOA1蛋白的表达水平干预AGE-RAGE等通路治疗DKD。

基于动物实验系统评价大黄素治疗糖尿病肾病的可行性

目的:系统评价大黄素对糖尿病肾病动物肾脏的保护作用。方法:计算机检索中国知网、维普、万方、中国生物医学文献及PubMed等数据库,检索从建库至2023年2月25日关于大黄素治疗糖尿病肾病的动物实验。采用RevMan 5.4.1软件进行分析。结果:共纳入14个研究,结果显示,相比于对照组,大黄素组更能降低糖尿病动物血糖[SMD=-2.51,95%CI(-3.77,-1.24),I^(2)=89%]、肌酐[SMD=-3.05,95%CI(-4.75,-1.34),I^(2)=91%]、尿素氮[SMD=-2.69,95%CI(-3.88,-1.50),I^(2)=82%]、24 h尿蛋白定量[SMD=-3.35,95%CI(-4.85,-1.85),I^(2)=87%]、相对肾重[SMD=-7.72,95%CI(-12.55,-2.88),I^(2)=90%]、三酰甘油[SMD=-1.24,95%CI-1.94,-0.54),I^(2)=0%]等指标。而大黄素与对照组在胆固醇[SMD=-1.19,95%CI(-2.29,-0.55),I^(2)=77%]等方面的差异无统计学意义。同时Meta分析提示大黄素保护肾脏与nephrin的表达、相关信号通路等有关。此类研究相关的严重不良反应鲜有报道。结论:大黄素对糖尿病肾病动物肾脏有保护作用,但有待于更高质量、严谨规范的大样本临床试验进一步证实。

基于网络药理学和动物实验探讨牡丹皮提取物对接触性皮炎的改善作用

目的通过网络药理学和动物实验研究牡丹皮提取物外用治疗接触性皮炎的作用机制。方法采用DNCB诱导的接触性皮炎小鼠模型,评价牡丹皮提取物体内抗炎活性。通过TCMSP等数据库收集牡丹皮活性成分及相关作用靶点信息;通过DisGeNET等数据库得到接触性皮炎的相关靶点;构建活性成分-潜在作用靶点网络图及蛋白-蛋白互作网络图,利用cytoHubba插件筛选出关键靶点;采用DAVID数据库对潜在交集靶点进行GO分析及KEGG信号通路富集分析;采用Reactome Pathway数据库进行Reactome信号通路富集分析;采用分子对接验证成分与关键靶点的结合水平,并对关键靶点通路进行实验验证。结果动物实验显示,牡丹皮提取物能减少接触性皮炎小鼠皮肤组织中的炎细胞浸润,调节脾脏、胸腺指数,降低小鼠皮肤组织IL-6水平(P<0.01)。网络药理学显示,牡丹皮活性成分18种,潜在作用靶点317个,富集于多个生物进程、多条信号通路,筛选得到SRC、MAPK1、PIK3R1、HSP90AA1、TP53等关键靶点。分子对接显示出良好的小分子-蛋白亲和性。验证试验显示,牡丹皮提取物提高了小鼠皮肤组织p-ERK1/2、p-Akt蛋白表达及PI3K mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论牡丹皮提取物可能通过MAPK/ERK、PI3K-Akt信号通路来抑制炎症水平,发挥治疗接触性皮炎的作用。

新型便携式体外膜肺氧合动物实验在体安全性和有效性研究

目的本研究旨在验证一种自主研发的新型便携式体外膜肺氧合(ECMO)系统(西京高级生命支持系统JC-Ⅲ型)在大动物体内的安全性和有效性。方法共计10只健康小尾寒羊通过颈动脉-颈静脉插管方式进行静脉-动脉体外膜肺氧合(VA-ECMO)支持,以评价JC-Ⅲ型ECMO系统的性能。通过持续输注肝素实现全身抗凝,转机过程中每2 h记录1次活化凝血时间(ACT),维持ACT在200~250 s之间;离心泵转速设定在3000~3500 r/min。分别于ECMO启动前和启动后24 h监测血红蛋白、血细胞计数、凝血、肝肾功能、心肌损伤等指标变化情况,实验结束后解剖泵头和氧合器,探查血栓形成情况。结果VA-ECMO手术成功率为100%,ECMO转机24 h,流量波动于1.9~2.5 L/min,未发生溶血、泵头血栓、膜肺血栓。ECMO转机前后血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素、肌酐、高敏肌钙蛋白I、N末端B型脑钠肽前体等指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论本在体动物实验证实了西京高级生命支持系统JC-Ⅲ型的安全性和有效性。

浅析将动物实验报告标准扩展至艾灸研究的可行性

艾灸对于多种病证具有良好的临床疗效。近年来越来越多研究者开展对其作用机制的研究。然而由于缺乏合适的报告标准,目前发表的艾灸动物实验研究方法部分描述规范性不足,缺乏可操作的细节,一定程度上影响实验结论的可重复性。该文分析了艾灸实验研究过程中可能导致结果偏差的关键操作环节,提出建立艾灸动物实验报告标准的建议,并拟定标准制定流程。本研究旨在促进艾灸研究者重视研究报告的标准化,提高研究结论的可重复性,推动艾灸研究的发展。

基于网络药理学和动物实验探讨化铁丸通过PI3K/Akt信号通路防治前列腺增生的作用

目的探究化铁丸防治前列腺增生(BPH)的作用及其机制。方法通过皮下注射丙酸睾酮构建BPH大鼠模型,造模4周同时给药干预,检测前列腺、精囊、提肛肌、睾丸、附睾指数,并通过HE染色观察前列腺组织病理变化,ELISA试剂盒检测睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)、雌二醇(E2)、前列腺特异性抗原(PSA)水平。借助TCMSP、PubChem、SwissTargetPrediction数据库筛选化铁丸有效成分及靶点,GeneCards、OMIM、TTD等数据库筛选BPH疾病靶点,交集靶点借助STRING数据库及Cytoscape3.9.0软件筛选靶点,并进行GO、KEGG富集分析,结合文献确认核心靶点,CB-Dock2对质谱-网络药理学交集成分与核心靶点进行对接验证,Westernblot和RT-qPCR法检测前列腺PCNA、α-SMA、AR、VEGF、PI3K、Akt、Bax、Bcl-2表达。结果与模型组比较,化铁丸高剂量组(2.7g/kg)前列腺指数降低(P<0.01),而精囊、提肛肌、睾丸、附睾指数无明显变化(P>0.05),前列腺组织病理状态得到改善;T、DHT、E2、E2/T、PSA水平降低(P<0.05,P<0.01)。TCMSP等数据库筛选出化铁丸活性成分20个、靶点377个,GeneCards等数据库筛选出BPH靶点497个、交集靶点65个。GO分析显示,生物途径包括内类固醇激素受体信号通路、细胞凋亡等,作用蛋白定位在细胞核、核浆、胞浆等上,分子功能包括雌激素反应元件结合、类固醇结合等。KEGG富集显示,相关信号通路有PI3K-Akt、VEGF、雌激素等,结合文献,确认核心靶点VEGF、BFGF、Akt、PI3K、Bax、Bcl-2。分子对接显示,质谱-网络药理学交集成分与核心靶点结合紧密。Westernblot和RT-qPCR显示,化铁丸高剂量组可下调PCNA、α-SMA、AR、VEGF、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2表达,上调ERβ、Bax表达(P<0.05,P<0.01)。结论化铁丸通过调节BPH大鼠性激素水平紊乱及性激素受体表达,并激活PI3K-Akt通路促进细胞凋亡,从而抑制BPH。