广东地区患病食品动物源大肠杆菌ESBLs和AmpC酶流行分布调查

质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶广泛传播和扩散,导致全球范围内肠杆菌科细菌对超广谱头孢菌素类的耐药性发展迅速,引起人们高度重视。食品动物源大肠杆菌可作为耐药基因储库,对细菌耐药性在动物、环境和人之间的传播起着非常重要的作用。本研究从2009年患病的食品动物,包括鸡、鸭、鹅和猪,分离鉴定了315株大肠杆菌,调查ESBLs和AmpC酶在患病食品动物中的流行分布。经双纸片协同扩散实验筛选出61株ESBL阳性菌株,PCR检测共检测出8种blaCTX-M基因,分别为blaCTX-M-14/14b、blaCTX-M-79、blaCTX-M-65、blaCTX-M-27、blaCTX-M-15、blaCTX-M-24、blaCTX-M-98和blaCTX-M-13,其中检出率最高的为blaCTX-M-79,其次为blaCTX-M-14/14b。本研究还检测出1株新的SHV型酶,命名为SHV-135;PCR共检测出5株大肠杆菌携带质粒源CMY-型AmpC酶,其中2株鹅源大肠杆菌携带1个新型CMY酶,命名为CMY-64。本研究表明患病动物分离的大肠杆菌中ESBLs和AmpC酶存在复杂性和多样性,而且新型β-内酰胺酶检出日益增多,提示兽医临床应慎用β-内酰胺类抗生素。

动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测

本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。

新疆牛羊源耐药大肠杆菌β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因检测

为了解新疆某羊场、牛场耐药大肠杆菌携带β-内酰胺酶和/或16S r RNA甲基化酶基因及其共存情况。通过PCR方法对168株羊源和32株牛源耐β-内酰胺类药物大肠杆菌进行β-内酰胺酶及16S r RNA甲基化酶基因检测,并对检出基因的PCR产物测序。检测结果为:羊源大肠杆菌携带的β-内酰胺酶基因为blaTEM(42.26%,71/168)和blaCTX-M(2.98%,5/168);牛源大肠杆菌携带的β-内酰胺酶基因为bla TEM(15.63%,5/32)基因,未检出blaCTX-M;两个养殖场均未检出其他被检基因。羊源、牛源大肠杆菌携带的16S r RNA甲基化酶基因为rmt B基因,其检出率分别为4.17%(7/168)和50.00%(16/32),均未检出arm A基因。基因共存情况:3(1.79%)株羊源菌同时携带blaTEM和blaCTX-M基因,7(4.17%)株羊源菌同时携带blaTEM和rmt B基因;2(6.25%)株牛源菌同时携带blaTEM和rmt B基因。羊源和牛源大肠杆菌中存在β-内酰胺酶和16S r RNA甲基化酶基因介导的细菌耐药,均以blaTEM和rmt B基因为主。此外,存在不同类型耐药基因共存于同一株耐药菌的现象。

治疗动物源性大肠杆菌的抗生素种类以及耐药性的产生

由于抗生素的滥用,细菌耐药性这一敏感话题一次次被人们所提及,抗生素可称得上是对抗细菌的最有力武器,在社会发展进程中功不可没。然而现阶段,面对不断“进化”的细菌,抗生素的更新速度显得尤为缓慢。一种悲观的观点称,若干年后,在面对“超级细菌”的肆虐时人类将束手无策。为有效应对细菌耐药给社会带来的安全问题,如何合理、适量的用药成为解决这一问题的关键。本文主要介绍兽医临床上一种较为常见的细菌—大肠杆菌,针对动物源性大肠杆菌对抗生素产生耐药性的相关问题进行论述,以期为指导临床用药提供理论基础。

动物源性大肠杆菌ESBLs类耐药基因与HPI基因的双重PCR检测及相关性分析

为研究大肠杆菌ESBLs类耐药基因和HPI基因在环境中的污染状况及相关性,采用双重PCR对大肠杆菌中HPI基因irp1、irp2、fyuA和产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因TEM、SHV进行了检测分析,选择irp2缺失株对两类基因的相关性进行了分析。37株大肠杆菌的检测结果显示,TEM、SHV耐药基因的阳性率分别为94.5%、56.8%;irp1+TEM、irp1+SHV、irp2+TEM、irp2+SHV、fyuA+TEM、fyuA+SHV基因的阳性率分别为13.5%、13.5%、21.6%、21.6%、16.2%、16.2%。从大肠杆菌中扩增出118、132、799、414、948bp的特异性目的条带,而从甲型副伤寒沙门氏菌、绿脓假单胞菌、肺炎克雷伯氏菌中则不能扩增出上述特异性条带。灵敏度试验表明,该反应体系的检测灵敏度为1.5×103 CFU/mL。irp2缺失株试验表明,irp2中仍能检测出TEM、SHV基因。上述结果表明,采用双重PCR能特异地从大肠杆菌中检测出β-内酰胺类耐药基因和HPI基因,且两类基因间无明显相关性。

40株动物源性大肠杆菌耐药性分析及氨基糖苷修饰酶耐药基因的检测

为调查动物源性致病性大肠杆菌氨基糖苷修饰酶耐药基因的携带情况,探讨耐药基因与氨基糖苷类抗生素表型的相关性,对40株源于畜禽的大肠杆菌常用氨基糖苷类抗生素进行药敏试验,用PCR法检测耐药基因aac(3)-Ⅱ、arm A、aac(6')-Ⅰb。结果表明:40株大肠杆菌在所用氨基糖苷类药物中对卡那霉素的耐药率最高,达57.5%(23/40),其次是链霉素与庆大霉素,耐药率分别为45.0%(18/40)和40.0%(16/40);耐药基因aac(3)-Ⅱ的检出率为17.5%(7/40),其中有6株的耐药表型都为对庆大霉素耐药,arm A的检出率为0,aac(6')-Ⅰb的检出率为2.5%(1/40)。

多重RPA-LFD技术快速检测磺胺类耐药基因研究

目的:畜禽养殖业普遍存在抗生素过量使用甚至滥用的现象,导致动物源细菌耐药性问题越来越严重。磺胺类药物是应用最广泛的抗生素之一,对磺胺类耐药基因进行快速检测,有利于控制动物源耐药细菌的传播。方法:利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA)在常温下快速扩增痕量核酸的特点,结合横向流动试纸条(LFD),对动物源大肠杆菌磺胺耐药基因 sul1,sul2和sul3进行同步快速检测,以实现现场可视化快速检测。结果:磺胺耐药基因sul1、sul2、sul3 在动物源大肠杆菌中的检出率分别为36.36%(84/231)、54.54%(126/231)和68.39%(158/231),检测限可达到10 3copies/μL,且无交叉反应。结论:此方法结果简单易读,可为磺胺类耐药基因现场可视化快速检测提供技术支撑。