动物组织DNA试剂盒提取水牛精液基因组DNA效果观察

为了快速、高效地提取水牛精液基因组DNA,试验采用动物组织DNA试剂盒并对一些步骤进行优化,以此方法抽提DNA。结果表明：使用动物组织DNA试剂盒可以获得水牛精液基因组DNA,DNA纯度（OD260/OD280值）为1.71±0.22,浓度为（61.38±20.68）ng/μL,水牛精液基因组DNA可直接用于PCR反应。

食用肉类中5种动物源性成分多重PCR检测方法及检测试剂盒的研制

目的:建立一种同步检测肉类中鹿、牛、羊、猪、马动物源性成分的多重聚合酶链式反应检测方法,并研发快速检测的多重PCR试剂盒。方法:将牛、羊、猪、马的Cyt b基因以及梅花鹿、马鹿的COX 1基因作为设计引物的靶序列,设计特异性引物,优化PCR体系,建立5种动物源性成分的多重PCR鉴定方法。结果:在同一反应体系中,可同步扩增鹿肉(173 bp)、牛肉(148 bp)、猪肉(261 bp)、羊肉(100 bp)以及马肉(424 bp)的特异性条带。结论:本研究开发的多重PCR检测试剂盒可同步检测肉类中5种动物源性成分。

动物组织中磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA试剂盒的研制

在建立竞争ELISA方法的基础上,首次研制出检测磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体快速检测试剂盒,并对其检测限、精密度、检测范围以及鸡肌肉组织中的添加回收实验做了详细研究。本试剂盒的检测限为1.0ng/ml,检测范围为1.0～81.0ng/ml,批内变异系数<8.9％,批间变异系数<9.5％,在10、60和200ng/ml水平鸡肌肉组织中添加,回收率为64.5％～85.5%,变异系数为6.0％～18.6%。与同类相关德国产试剂盒相比较,阳性符合率为100％。

运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估

目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009～2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后3130型毛细管电泳仪分析提取DNA片段的完整性。结果:经紫外分光光度计测定胃癌组织D(260 nm)/D(280nm)均值为1.84±0.02,肺癌组织为1.85±0.02,甲状腺癌组织为1.82±0.02,3组间比较P>0.05,因此硅珠法提取石蜡包埋组织DNA不会因组织差异而影响提取效果;Identifiler试剂盒PCR后毛细管电泳显示其提取效果,46例(93%)得出完整的16个基因座STR峰型。结论:硅珠法可应用于多种组织的DNA提取,并保证提取DNA样品的纯度和完整度。

4种试剂盒提取病理组织切片中裂头蚴DNA效果的比较

目的筛选一种快速、简单、高效、价格合理的从病理组织切片中提取猬裂头蚴DNA的试剂盒。方法用4种不同的试剂盒提取病理组织切片(含虫白片/HE染色片)中裂头蚴DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率、提取时间、提取价格及PCR产物的亮度,评价4种市售商品试剂盒提取DNA的效果。结果 4种试剂盒提取裂头蚴有虫组织白片DNA的结果:试剂盒1提取DNA的浓度、纯度及提取率最高,提取成本也最高且耗时较短;试剂盒2的提取效果与试剂盒1相近,提取成本较低且时间最短;试剂盒3的提取效果介于试剂盒2与试剂盒4之间,成本最低但时间长达26h;试剂盒4提取效果最低,PCR产物条带也最暗,提取成本较低但耗时较长。4种试剂盒提取HE染色片DNA的结果:试剂盒1与试剂盒2提取的效果相近,两者成本较高耗时较短,试剂盒3与试剂盒4的提取效果相近,两者成本低耗时长,试剂盒3与试剂盒4的提取效果均低于试剂盒1和试剂盒2的提取效果。结论 4种商品试剂盒均能满足裂头蚴感染有虫组织的DNA提取,其中试剂盒2更适用于快速提取。

动物组织中呋喃妥因代谢物残留酶联免疫试剂盒的研制

通过对呋喃妥因代谢物分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备特异性强的单克隆抗体。在筛选呋喃妥因代谢物单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测动物组织中呋喃妥因代谢物残留的试剂盒。该试剂盒的IC50值为0.094μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为78.2%～102.7%,变异系数为5.1%～11.4%;与呋喃妥因的交叉反应率为13%,与其他药物的交叉反应率均小于1%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法快速、灵敏、可靠,为动物组织中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了便捷、准确的分析检测手段。

QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取人肠道细菌基因组DNA质量的差异

背景:有研究表明,不同试剂盒提取的粪便细菌基因组DNA质量有差别,选择一种操作简便、质量优良的粪便细菌基因组DNA提取试剂盒成为研究者们关注和急需解决的问题。目的:比较QIAamp及Biomed粪便细菌基因组DNA提取试剂盒提取的人肠道细菌基因组DNA质量的差异。方法:收集健康成年人新鲜粪便标本30例,用两种试剂盒分别提取细菌基因组DNA,检测其浓度、吸光度A260/280nm值及提取率,设计乳酸菌属16SrDNA基因特异性引物,以各自所提DNA为模板,进行常规聚合酶链反应,凝胶电泳后比较条带数量、明暗度及密度,并进行实时荧光定量聚合酶链反应定量检测各自所含乳酸菌属的数量。结果与结论:QIAamp试剂盒提取的正常人肠道细菌基因组DNA的浓度、提取率、表达量及乳酸菌属的数量均高于Biomed试剂盒(P<0.05或P<0.01)。说明QIAamp试剂盒提取的粪便细菌基因组DNA质量优于Biomed试剂盒。

两种动物组织DNA提取方法的比较

本试验以猪耳组织为试验样本,采用酚-氯仿抽提方法[1]和DNA提取试剂盒方法进行DNA提取的对比试验,并通过核酸蛋白定量仪测量了DNA浓度和纯度,并进行了PCR扩增实验。试验表明,两种提取方法都可以进行PCR扩增试验,但采用试剂盒提取方法提取DNA可以直接进行PCR扩增,而酚-氯仿提取法需放置一段时间后效果好,并且采用试剂盒提取的DNA纯度高、速度快、节省耗材、结果稳定、重复性强,适合大量DNA提取试验。

动物肌肉组织DNA的提取方法及实时荧光定量PCR检测

以生鲜羊肉、猪肉、鸡肉、牛肉、鸭肉为实验材料,采用SDS法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳和实时荧光定量PCR检测。结果表明,试剂盒法提取的基因组DNA在浓度和纯度方面均优于SDS法和异硫氰酸胍法。通过对三种提取方法建立的标准曲线进行比较,回归系数(R2)按照质量排序为:试剂盒法≥异硫氰酸胍法>SDS法,扩增效率按照质量排序为:试剂盒法>异硫氰酸胍法>SDS法。三种提取方法的羊源性成分灵敏度检测,最低检出限均为80 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.684%,小于异硫氰酸胍法0.734%和SDS法1.075%;猪源性成分灵敏度检测,SDS法的最低检出限为80 pg/μL,异硫氰酸胍法和试剂盒法的最低检出限均为16 pg/μL,但在低浓度检测时试剂盒法的相对标准偏差RSD为0.092%,小于异硫氰酸胍法4.640%;鸡源性成分灵敏度检测,SDS法和异硫氰酸胍法的最低检出限均为3.2 pg/μL,试剂盒法的最低检出限为640 fg/μL,明显高于SDS法和异硫氰酸胍法。综上所述,试剂盒法提取的基因组DNA更有利于运用实时荧光定量PCR技术进行食物掺假和物种鉴别工作。

直接PCE试剂盒Phire植物组织

直接PCR试剂盒用于直接从植物样本中扩增DNA。在PCR扩增之前，无需进行DNA纯化。试剂盒包含整套优化试剂，制样工具和对照引物。Phire动物组织直接PCR试剂盒用于直接从动物组织中扩增DNA。试剂盒包含了一整套的优化试剂、制样工具和Thermo Scientific DNARelease添加剂。

4种商品化试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

猪瘟（CSF）是由猪瘟病毒感染引起的猪的急性、热性、高度致死性传染病,是严重影响养猪业发展的主要疫病之一。世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类l6种传染病之一,我国亦将其列为一类传染病,是发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一。

不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究

为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。

哺乳动物血液基因组DNA提取方法的比较研究

随着现代分子生物学技术的迅速发展，用于提取高纯度DNA的试剂盒已经商品化生产，但是价格较高，在实验室普及使用尚有难度。

三种LB-ELISA试剂盒在奶牛A型口蹄疫抗体检测中的比较

口蹄疫（foot and mouth disease, FMD）是由FMD病毒引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病,世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物传染病,我国规定为一类动物疫病,目前我国采取以强制免疫为主的综合防控措施,免疫抗体监测是评估免疫效果的有力手段。

不同ELISA试剂盒检测猪瘟病毒抗体的比较分析

猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的严重威胁养猪业的病毒性疾病.世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类动物传染病,我国也将此病列为一类动物疫病,2005年发布的新版《陆生动物卫生法典》将猪瘟列入OIE规定必须通报疾病名录,是我国发生最多、危害最大、流行最广的动物传染病之一.

遗传学实验教学中动物基因组DNA提取方法研究

为了探索遗传学实验教学中动物基因组DNA提取的最优方法,本文介绍了一种改良版的碱裂解动物基因组DNA的提取方法,并与传统的酚仿抽提法及试剂盒提取法进行了比较。结果表明,优化碱裂解法具有简单、快速、无毒、成本低等优点,是一种既可以用于科学研究,也可应用于遗传学实验教学的较好方法。

细菌RNA分离试剂盒

Bioscience Technology 2003年6月26页报道：美国Ambion公司最近推出MICROBEEnrich^TM试剂盒。这种试剂盒可用于从宿主一细菌DNA混合体中增富细菌RNA，选择性消除哺乳动物(宿主细胞)RNA，即：可消除>90％的哺乳动物RNA，而保留高度增富的细菌RNA。适用于全部细菌属种，使用简便，可在<2小时内获得结果。

分离mRNA的试剂盒

英国 Serotec 公司设计的新试剂盒可在15分钟内分离出真核生物 mRNA。它是采用磁性分离技术从总mRNA,组织匀浆或细胞裂解物中分出 mRNA。将 Oligo(dT)与伴磁纤维素颗粒结合起来使用可得到无污染的 mRNA,直接用于 Nothern blotting、PCR 或 cDNA 合成等。为方便研究者使用不同的起始材料,而又能得到最好的 mRNA,公司提供的试剂足够10～25个实验用。

东北农业大学重点推介项目 口蹄疫串联表位鉴别诊断ELISA试剂盒开发

项目来源：省科技计划（GA0068202）、国家科技支撑计划（2006BAD06A17） 技术水平及获奖专利情况：国内领先水平。发明专利名称：鉴别诊断口蹄疫的表位抗原的基因序列。专利申请号：200810064840．9。 项目简介：口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的多种偶蹄动物感染的一种急性、热性、接触性传染病，国际动物卫生组织（OIE）将其列为必须通报的多种动物共患传染病之一。