胶体金免疫层析法高通量测定动物肌肉组织中多兽药残留

[目的]本文旨在建立一种胶体金免疫层析技术高通量测定猪肉、鸡肉组织中8种磺胺类、3种四环素类、2种喹诺酮类和甲氧苄啶药物残留的方法。[方法]动物肌肉组织中磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶经磷酸缓冲液提取,并经含Tween 20的磷酸缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体与硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。[结果]本试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、Tween 20添加量和冻干保护剂种类等关键因素,磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶等药物的检出限分别为50、100、50、35μg·kg^(-1),灵敏度≥97%,假阳性率≤2%,假阴性率≤3%,且与现有标准方法检测结果一致。[结论]该方法操作简便,灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

超高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织和鸡蛋中残留的11种甾体激素类药物

建立了采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定猪、牛、羊和鸡肌肉组织及鸡蛋中睾酮、甲基睾酮、黄体酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、司坦唑醇、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙等11种甾体激素多残留的分析方法。试样在碱性条件下用叔丁基甲醚提取,冷冻离心脱脂净化,以乙腈和甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,反相液相色谱分离。采用电喷雾离子化、多反应监测方式(MRM),对11种甾体激素同时进行定性定量测定。动物肌肉和鲜蛋中睾酮、甲基睾酮、勃地龙、美雄酮及司坦唑醇的检出限为0.3μg/kg,群勃龙、诺龙、黄体酮、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙的检出限为0.4μg/kg。在动物组织及鸡蛋中添加1,2及10μg/kg水平的药物回收试验中,睾酮、甲基睾酮、勃地龙、美雄酮及司坦唑醇的回收率均在62.3%～105%之间,相对标准偏差为0.5%～15%;群勃龙、诺龙、黄体酮、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙的回收率大于50.0%,相对标准偏差小于16%。11种甾体激素在1～100μg/L范围内,线性关系良好,相关系数都大于0.99。该方法的样品前处理简单、快速,测定灵敏、准确,选择性好,可满足动物源食品中甾体激素类药物多残留的同时测定。

高效液相色谱-荧光-紫外法测定动物肌肉组织中多类药物残留

建立了同时检测动物肌肉组织中9种喹诺酮类药物、7种磺胺类药物和甲氧苄啶的高效液相色谱检测方法。动物肌肉组织样品用磷酸盐缓冲液提取,HLB固相萃取柱净化,洗脱液用氮气吹至近干,磷酸盐缓冲液复溶,以甲酸水溶液-乙腈体系为流动相,梯度洗脱,荧光-紫外检测器串联测定。本方法的线性良好,相关系数r>0.9987;平均回收率为70.6%～103.4%,相对标准偏差为1.2%～11.4%;荧光检测器测定喹诺酮类药物的检出限为0.04～0.4μg/kg;紫外检测器测定磺胺类药物和甲氧苄啶的检出限为3.5μg/kg。本方法具有简便、通用性强的特点,适用于动物肌肉组织中上述药物的常规残留检测。

高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量

采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定动物肌肉组织中氯霉素,甲砜霉素和氟苯尼考三种药物的残留量。添加氘代氯霉素(d5-氯霉素)作为内标,碱化乙酸乙酯提取,正己烷去除脂肪,省去固相萃取步骤直接上机定量。选择电喷雾离子源(ESI),负离子扫描多反应监测(MRM)模式,并优化了质谱参数,使仪器的灵敏度达到最高。氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的检出限均达到0.01μg/kg。空白样品中添加氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考水平为0.02～1μg/kg时,三种药品的线性相关系数均大于0.9990。氯霉素平均回收率为92.8%～97.0%,甲砜霉素平均回收率为93.5%～96.6%,氟苯尼考平均回收率为91.2%～95.9%。

液相色谱-电喷雾串联质谱法测定动物肌肉组织中的氯霉素残留

建立了动物肌肉组织中氯霉素残留检测的液相色谱-串联质谱确证方法.样本用乙腈-醋酸缓冲液(pH=5.0)(体积比80:20)匀质提取,乙酸乙酯液-液分配净化,以甲醇-水溶液(体积比40:60)作为流动相经反相色谱柱分离后进行质谱分析.采用负电喷雾电离源,在多反应监测模式下进行信号采集.定性诊断离子对为m/z 320.9/257.0,320.9/152.0和320.9/194.0;m/z 320.9/152.0用于外标法定量.空白样品及其添加实验表明,与标准CAP溶液相比,特征离子相对强度比值吻合、稳定,无基质成分的干扰,结合保留时间可实现准确定性.方法的检出限(S/N=3)和定量下限(S/N=10)分别为0.03和0.1μg/kg.不同肌肉基质样本添加水平在0.1～1.0μg/kg时,平均回收率为77%～90%,日内和日间相对标准偏差小于15%.该方法前处理简单、灵敏、回收率高、精密度好,符合残留的确证分析方法要求,已应用于日常工作中CAP残留的定性和定量分析.

动物肌肉组织基因组DNA两种提取方法的比较

以猪、牛、羊、鸡等动物新鲜冷冻样品为实验材料,采用SDS法和异硫氰酸胍法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测,比较了这两种方法的提取效果。结果表明:采用SDS法和异硫氰酸胍法均能从动物肌肉组织提取到完整的基因组DNA,均可满足PCR等后继分子生物学实验的要求。但是异硫氰酸胍法提取的基因组在纯度和浓度及稳定性方面优于SDS法,且操作简单,耗时短,更利于快速检测。

动物肌肉中四环素族药物多残留的固相萃取-酶联免疫分析

研究确立了动物肌肉中四环素族药物多残留分析的基质固相萃取净化-酶联免疫分析方法,交叉反应分析表明其对每千克动物肌肉中四环素、土霉素和金霉素的检出限分别为8、8.5和70μg,回收率为80％～110％,是监控动物源性食品中四环素族多抗生素残留的优选方法。与常用的液相色谱法相比,此方法更简便、高效,能实现自动化和高通量分析。

动物肌肉生长发育调控的功能基因研究进展

成肌细胞的增殖和分化是受生肌决定因子 (MyoD)调控 ,生肌决定因子包括 4个基因 ,MyoDl(myf3)、Myogenin(MyoG)、Myf5、Myf 6 (herculin或MRF4 )。MyoD家族基因属于碱性螺旋 环 螺旋 (bHLH)转录因子 ,它能激活肌肉生成的特定基因。肌细胞生长抑制素 (MSTN ,Myostatin ,又称GDF 8) ,属于转化生长因子超家族 ,它通过负向控制肌细胞的生长发育 ,GDF 8基因缺失的小鼠表现出比正常小鼠具有“双肌现象”。

高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留

建立动物组织中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物(共16种)残留的高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品经乙腈提取、浓缩、净化,液相色谱串联质谱测定,内标法定量。16种杀虫剂在1.0～100μg/L范围内线性关系良好(r>0.9959);方法定量限为0.5～2.5μg/kg;样品添加5.0、10.0、20μg/kg时,加标回收率为71.4%～105.5%;相对标准偏差为3.2%～13.7%。该方法具有简便快捷、灵敏度高的特点,适用于动物肌肉中氨基甲酸酯类杀虫剂及其代谢物残留量的检测。

在不同动物肌肉中磷酸钙陶瓷表面类骨磷灰石的形成研究

磷酸钙陶瓷材料植入动物体内后其表面类骨磷灰石层的形成对骨的形成有非常重要的作用 ,并被认为是骨诱导发生的先决条件。我们将相同大小的孔壁有微孔的多孔材料和致密磷酸钙陶瓷材料植入猪、狗、兔和鼠的背肌或腿肌内 ,研究陶瓷表面类骨磷灰石的形成 ,以了解类骨磷灰石层的形成与骨诱导的联系。结果表明 :磷酸钙陶瓷材料植入动物的肌肉内 14d后 ,狗、兔和鼠体内的多孔材料孔隙内表面 (包括陶瓷表面较深孔隙 )有一层类骨磷灰石层形成 ;植入猪体内的多孔材料内外表面都形成了一层类骨磷灰石 ,致密材料在几种动物体内都未观察到类骨磷灰石层形成。类骨磷灰石层形成的快慢次序与动物组织学观察到的在不同动物的肌内骨诱导性高低的次序不一致。证实了类骨磷灰石层的形成的确是骨诱导的先决条件 。

一种改进的齿突蟾动物肌肉线粒体DNA提取方法

以1号冷冻保存(-20℃)的齿突蟾标本为材料,建立一种动物肌肉线粒体DNA的快捷提取方法.取10 g冷冻保存的肌肉组织,在研钵中剪碎,液氮研磨成粉;然后加SE缓冲液混匀,转入10 mL离心管静置10 min;上清液转入2 mL的Eppendorf管,1 000×g离心10 min,取上清液,再12 000×g离心15 min,沉淀即为线粒体;最后用SDS碱裂解法分离得到mtDNA.

PCR-mtDNA技术鉴别检测不同动物肌肉组织和饲料中鸭源性成分

以鸭肌肉组织DNA为模板,利用PCR-mtDNA技术成功克隆出了鸭mtDNA COⅢ基因(GenBank Accession No.DQ655706)。对所克隆的序列分析表明,其序列包括鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ(COⅢ)基因全序列784 bp,通过同源性分析可知,动物的线粒体DNA COⅢ基因是相对保守的,利用此特性设计PCR-mtDNA方法鉴别检测鸭源性成分的特异性引物;以各种动物肌肉组织及饲料DNA为模板进行PCR扩增、经反复验证筛选出只能扩增出鸭DNA的目的片段,而不能扩增出其他动物DNA片段的特异性强、稳定性好的引物P3、P4;利用此引物PCR扩增鸭DNA的特异性片段为226 bp,对PCR产物进行测序分析可知与已克隆的鸭mtDNA COⅢ基因同源性达到100%,证明了所筛选引物的准确性。通过对不同含量的DNA模板溶液进行PCR扩增的方法,对筛选出的特异性引物P3、P4进行灵敏度试验,结果分析表明灵敏度约为0.001%,证明该PCR方法具有特异性强、灵敏度高的特点,完全可作为鉴别不同动物肌肉组织和饲料中鸭源性成分的方法。

免疫亲和柱净化-HPLC法同时测定动物肌肉及牛奶中6种玉米赤霉醇类药物残留

建立肌肉（猪肉、牛肉）及牛奶中6种玉米赤霉醇类化合物（α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮）残留量的免疫亲和柱净化-高效液相色谱同时检测方法。试样酶解后，肌肉样品经乙醚提取，牛奶样品经乙腈提取，免疫亲和柱净化，高效液相色谱仪测定。结果表明，6种目标物在0.01～0.2μg／mL范围内线性关系良好，相关系数（r）均大于0.999，检出限（S／N≥13）为1.0μg／kg，猪肉、牛肉、牛奶中的平均回收率分别在72.8％～88.4％、72.6％～92.4％、82.3％～102.3％之间，RSD均小于10.0％。该方法灵敏度高、重现性好，适用于猪肉、牛肉、牛奶等动物源性食品中痕量玉米赤霉醇类药物残留的测定。

水解衍生-酶联免疫分析在动物肌肉中呋喃唑酮代谢物残留量检测中的应用

目的:优化并评估了水解衍生-酶联免疫方法在测定动物肌肉中抗生素呋喃唑酮代谢后结合残留物中的应用。方法:样品中的呋喃唑酮代谢物3-氨基-唑烷酮(3-amino-2-oxazolidone,AOZ)的蛋白结合残留物经酸水解释放 AOZ,经2-硝基苯甲醛(2-nitrobenzaldehyde,NBA)衍生生成3{[(2-nitrophenyl)methylene]-amino}-2-oxazolidinone(NPAOZ)后,调 pH 至7.2-7.4,经乙酸乙酯萃取后,10min/4000r·min^(-1)离心取上层氮气流于30℃吹干并用缓冲液溶解,正己烷脱脂后取下层水相进行 NPAOZ 的竞争性酶联免疫吸附分析(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。结果:方法定量检测限为200ng·kg^(-1),样本加标水平为1.0μg·kg^(-1)时,回收率在85%以上。实际样本对照实验显示 AOZ 质量浓度>1.0μg·kg^(-1)时,方法与 LC-MS-MS 结果的相对误差<25%。结论:此方法可实现动物肌肉中呋喃唑酮代谢物残留量的高通量筛选。

分散固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬、牛奶、植物油和动物肌肉中残留的61种有机磷农药

建立了果蔬、牛奶、植物油和动物肌肉中61种有机磷农药多残留的分析方法。果蔬和牛奶样品用乙腈均质提取,盐析分配;植物油样品用正己烷溶解,乙腈萃取;动物肌肉样品用正己烷配合乙腈-水溶液均质提取,盐析分配。各提取法得到的提取液采用C18和Primary Secondary Amine（PSA）粉末分散固相萃取净化,超高效液相色谱-串联质谱仪（UPLC-MS/MS）分析,采用电喷雾离子化正离子方式（ESI＋）及多反应监测模式（MRM）测定,基质匹配标准溶液外标法定量。方法的定量限（S/N≥10）均达到0.01mg/kg;回收率为62.8%~107%,相对标准偏差为4.2%~19%。该方法准确、灵敏、快速,可满足多种食品中有机磷农药残留的检测要求。

利用动物肌肉组织进行物种鉴定方法的研究进展

如今"食品安全"已成为人们最关注的问题之一,不法商贩为牟取暴利,利用化学物品和低廉材料对市场上的高价值产品进行伪造和掺假,不仅使群众损失财产,更严重威胁着人们的健康。由于制假产品在外观、气味等宏观方面不易辨别,为此,执法机关在打击制假犯罪的时候,需要一种科学准确的方法对市面上的样品进行鉴定,为打假掺杂提供确凿的证据。因此,对未知的动物组织进行物种鉴定,一直是研究人员们致力解决的问题。

动物肌肉肌苷酸研究进展

近几十年来,人们对肉类及其制品的鲜味进行了研究,发现鲜味不仅是一种基本味道,而且是增添食物风味的重要因素,在与鲜味有关的化合物中,对鲜味贡献最大的有两类物质:氨基酸和肌苷酸,其中肌苷酸目前已作为衡量肉质鲜味的一个重要指标。肌苷酸除作为重要风味物质外,在其它领...

用HPLC法测定动物肌肉中的磺胺类药物

七种动物肌肉组织中残留的磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺地索辛(SDM)、磺胺二甲氧嘧啶(SM2)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺喹恶啉(SQ)经乙腈提取,正己烷分配,再经碱性氧化铝SPE柱净化后,用高效液相色谱-紫外检测法测定。该方法的最低检测限为2μg/kg,最低检出限为10μg/kg,回收率为60%～110%,批内变异系数小于15%,批间变异系数小于20%。

mtDNA 12S rRNA基因序列测定在腐烂动物肌肉样本鉴定中的应用

目的利用mtDNA12SrRNA基因序列测定法对宁波森林公安局查获的一例腐烂动物肌肉样本进行种属鉴定,并探讨该方法在腐烂动物肌肉样本鉴定中的应用价值。方法用酚/氯仿法从腐烂动物肌肉样本中提取出基因组总DNA,再用一通用引物通过PCR技术扩增mtDNA上12SrRNA基因的部分片段并进行序列测定。测序结果在GenBank上进行BLAST搜索,再利用DNAMAN软件进行同源性分析。结果扩增产物序列与东北虎的线粒体DNA的12SrRNA基因序列的部分片段的同源性高达99.9%。结论该动物样本为东北虎,本研究所用方法在野生动物案件的样本鉴定中有极高的应用价值。

SDS-PAGE法检测动物肌肉蛋白质加热终点温度的研究

为了探索检测动物组织蛋白质热变性程度的方法,分别对猪、牛、羊、鸡、鱼五种新鲜动物肌肉组织进行不同温度的热处理(新鲜未加热、50、60、70、80、90、100℃),对处理后的样品提取蛋白质进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果显示,同种动物组织经不同温度热处理,所得电泳图谱具有较大差异,电泳条带的数量随温度的升高逐渐减少,猪、牛、羊三种动物肌肉组织加热到80℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度;鸡和鱼的肌肉组织加热到70℃后,电泳图谱不再变化,达到加热终点温度。不同种动物组织经相同温度热处理所得电泳图谱显示:猪、牛、羊三种动物组织蛋白质的电泳图谱相似,与鸡和鱼组织蛋白质的电泳图谱差异显著。