靶向HIF-1α小干扰RNA对裸鼠MiaPaCa2细胞移植瘤生长的影响

目的:初步探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导的靶向缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)小干扰RNA对裸鼠Mia-PaCa2人胰腺癌细胞移植瘤生长的影响。方法:首先构建rAAV介导的以HIF-1α为靶基因的RNA干扰表达载体,即rAAV-siHIF。将rAAV-hrGFP、rAAV-siHIF分别转染对数生长的MiaPaCa2细胞,在乏氧条件下进行培养,应用Real-Time PCR、Western Blot和ELISA法观察其对MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA、蛋白和VEGF表达的影响。将MiaPaCa2细胞接种于裸鼠皮下,形成荷瘤小鼠后随机分别肌注ddH2O(空白对照组)、rAAV-hrGFP(空载病毒组)和rAAV-siHIF(干扰病毒组),30d后处死荷瘤裸鼠,取出移植瘤并测量肿瘤的大小及肿瘤的质量,应用免疫组化染色观察各组肿瘤标本HIF-1α、VEGF、CD34的表达并计数微血管密度(MVD)。结果:体外实验发现,干扰病毒组MiaPaCa2细胞HIF-1α mRNA和蛋白的表达以及VEGF的分泌低于空白对照组(均P<0.01)。体内实验发现,干扰病毒组裸鼠移植瘤的生长和HIF-1α、VEGF及CD34的表达也低于空白对照组(P<0.01或P<0.05)。而空载病毒组与空白对照组相比,体内外实验结果差别均无统计学意义(均P>0.05)。结论:rAAV介导的靶向HIF-1α小干扰RNA有抑制裸鼠MiaPaCa2细胞移植瘤生长的作用,其机制可能是通过抑制移植瘤的血管生成而实现的。