治疗性低温对大鼠心肌细胞收缩功能的保护作用

目的:探讨温度对大鼠心肌细胞收缩功能的影响,并寻找可用于心肌保护的最佳温度。方法:用酶解法急性分离大鼠左室心肌细胞并复钙,采用可视化单细胞动缘探测系统检测并比较逐步升温(25~37℃)和恒温孵育(25、30、35℃)对大鼠心肌细胞收缩功能的影响,用收缩幅度的相对变化作为评价指标,明确能使心肌细胞产生最大且最稳定收缩的温度。结果:27~37℃逐步升温过程中,大鼠心肌细胞接受持续电刺激后稳定收缩的比例随温度的升高而下降。27~30℃逐步温度升高过程中,大鼠心肌细胞收缩幅度与25℃相比逐渐增大(P<0.05);31~37℃时,随着温度继续上升,心肌细胞出现不规律收缩、形态改变,甚至挛缩死亡,且收缩幅度与25℃比较,差异无统计学意义(P>0.05)。25℃、30℃、35℃固定恒温孵育后的心肌细胞收缩幅度两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中30℃孵育的细胞收缩幅度最大且稳定(P<0.05)。结论:温度变化影响大鼠心肌细胞的收缩功能,30℃时细胞收缩力强且稳定。

大鼠心肌细胞分离方法的改进

目的介绍一种易于判断酶解终点的分离大鼠心肌细胞的方法。方法成年SD大鼠麻醉后开胸取出心脏,分别采用传统的Langendorff灌流装置和本实验室改进的Langen-dorff灌流装置,于恒温37℃灌流消化液(含0.6%胶原酶B,0.6%BSA,30μmol.L-1Ca2+的台氏液)分离细胞,并采用IonOptix单细胞动缘检测系统检测细胞功能。结果传统的Langendorff灌流装置分离细胞,酶解时间约13～16min,但此法终点难以判断,每次分离的细胞质量差别较大,且不耐钙,收缩的稳定性较差。而以改进的Langendorff灌流装置分离细胞易于确定消化终点,细胞成活率大于80%,在含1.8mmol.L-1Ca2+的台氏液中存活率也高达50%。给予电压15V、频率1Hz、波宽4ms的持续电刺激时,其在1000s内收缩舒张功能稳定。结论经改造的Langendorff灌流装置分离的心肌细胞成活率高,可控性强,结果稳定,能够更好地用于检测细胞收缩舒张功能的实验。