人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型的建立及鉴定

目的建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础。方法采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothelial cell,HUAEC),采用组织块贴块法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC)。用含有抗坏血酸(≥50μg/mL)的培养基孵育平滑肌细胞,使之合成并分泌胶原蛋白,形成内皮细胞的生长基质;然后将内皮细胞以饱和密度接种到平滑肌细胞上,使内皮细胞和平滑肌细胞直接接触并整合形成内皮细胞-平滑肌细胞共培养(EC-SMC co-culture)模型。分别用免疫荧光染色和Dil-Ac-LDL吞噬实验对共培养模型进行形态学和功能学的鉴定。结果形态学鉴定结果显示,两种细胞已成功整合,模拟出体内动脉壁的形态。Dil-Ac-LDL吞噬实验的结果显示共培养模型的内皮细胞中有荧光信号,并且共培养模型中内皮细胞Dil-Ac-LDL的内吞量显著高于单纯内皮细胞(EC monoculture or ECmonolayer),证明共培养模型中内皮细胞与平滑肌细胞已建立联系。结论本实验成功建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,可在体外更好地模拟人动脉壁形态和基本功能。

稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及培养液中ET-1水平的影响

目的:观察稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的抑制作用。方法:采用(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)MTT法测定稳心草黄酮类化合物对大鼠PASMC增殖的抑制率、放射免疫法检测培养液中ET-1含量的变化。结果:稳心草黄酮类化合物对体外培养的PASMC有抑制增殖及降低培养液中ET-1水平的作用(P<0.05)。结论:稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠PASMC有抑制增殖的作用。

人原代肺动脉内皮-平滑肌接触式共培养方法的技术改进

目的:改进人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)-人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)接触式共培养方法 ,为更好模拟体内两种细胞间相互作用提供研究平台。方法:采用微孔聚碳酸酯膜为载体,将HPAECs和HPASMCs接种于微孔膜两侧,建立HPAECs-HPASMCs联合培养模型以模拟正常血管壁两种细胞的结构关系,通过调整细胞种植密度、培养时间、培养液体系、培养基种类、血清浓度等,倒置相差显微镜、Hoechst染色及流式细胞术比较不同条件下接触式共培养模型中细胞贴壁、生长和凋亡的差异,免疫荧光染色观察优化共培养条件后细胞标记物的表达变化。结果:(1)明胶预包被Transwell膜可促进内皮细胞的黏附和生长;(2)渗透压升高增加内皮细胞凋亡;(3)内皮细胞培养基较DMEM、RPMI1640更有利于接触式共培养模型的建立;(4)内皮细胞生长因子为1%、胎牛血清为2%时两种细胞生长稳定;(5)优化共培养条件对两种细胞的自身特性无显著影响。结论:当培养体系为内皮细胞培养基、维持1%内皮细胞生长因子及2%胎牛血清组分条件,可建立稳定的HPAECs-HPASMCs接触式共培养模型,为体外模拟人肺动脉血管壁结构功能和研究两种细胞间相互作用构建了良好平台。

软脉煎对血管内皮细胞动脉硬化模型白介素6水平的影响

目的:为了探讨具有补肾益气作用的中药复方软脉煎干预动脉硬化(AS)的机制,研究其对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)造成血管内皮细胞(VEC)AS模型白介素6 (IL-6 )水平的影响。方法:采用人脐静脉内皮细胞原代培养,加ox LDL共同孵育造成血管内皮细胞损伤模型,用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型,用ELISA法测IL-6 ,并设舒降之(辛伐他汀)组进行对照。结果:模型组IL-6显著升高(P <0. 0 1 ) ;软脉煎组和舒降之组均能十分显著地降低IL 6水平(P <0 . 0 1 ) ,两组差异无显著性(P >0 . 0 5 )。结论:软脉煎能显著降低血管内皮细胞IL- 6水平。

血管内皮细胞与平滑肌细胞体外共培养方法及其应用

目的介绍血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)和血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)体外共培养方法及其应用,为研究心血管疾病的发病机制和新药开发提供方法学支持。方法查阅国内外有关文献,总结、归纳已报道的ECs/SMCs共培养模型及其相关应用。结果与结论笔者综述了不同ECs/SMCs共培养模型的特点,并总结了体外共培养模型在细胞信号传导、动脉粥样硬化发病机制、心血管生物力学和组织工程学等研究中的应用。

低氧对共培养体系中内皮细胞eNOS活性及平滑肌细胞增殖与迁移能力的影响

目的探讨在内皮细胞和平滑肌细胞共培养模型中,低氧对内皮细胞中eNOS活性,以及平滑肌细胞增殖和迁移能力的影响。方法利用人肺动脉内皮细胞(HPAEC)与人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)构建共培养模型,经过低氧(3%O_(2))或常氧(20%O_(2))处理后,通过CCK‐8实验、Ki‐67和EdU染色、Western印迹及Transwell小室迁移实验分别检测低氧对HPASMC增殖和迁移的影响;通过试剂盒和Western印迹分别检测低氧对NO释放量和eNOS活性的影响;进一步利用硝普钠(SNP)分解生成NO的特性验证HPAEC释放的NO在调节HPASMC增殖和迁移中的作用。结果低氧能显著促进共培养模型中HPASMC的增殖与迁移能力,并抑制HPAEC中eNOS的活性和NO生成;然而,在HPAEC培养基中添加SNP则能明显逆转由低氧导致的HPASMC增殖与迁移。结论低氧通过抑制共培养体系下HPAEC中eNOS的活性进而减少NO的生成和分泌,NO释放量的减少最终促进了HPASMC的增殖与迁移。

紫杉醇联合骨髓基质干细胞种植体外修复内皮及对血管平滑肌增生的影响

目的探讨紫杉醇联合骨髓基质干细胞种植体外修复内皮的可行性及对血管平滑肌细胞增生的影响。方法培养兔主动脉内皮、平滑肌和人骨髓基质干细胞,通过细胞共培养将内皮/骨髓基质干细胞接种于下室、平滑肌细胞接种于上室模拟血管内皮修复过程,分别用3H TdR掺入和Westernblot检测紫杉醇(1,10,100nmol/L)干预20min后第10天平滑肌DNA合成和PCNA蛋白表达,用免疫荧光细胞化学法观察与紫杉醇干预内皮共培养的骨髓基质干细胞vWF和Flk1蛋白表达。结果骨髓基质干细胞种植组平滑肌细胞3H TdR掺入和PCNA蛋白光密度相对值均高于融合内皮组(n=6,P<0.05),低于对数内皮组(n=6,P<0.05)。共培养前骨髓基质干细胞不表达vWF和Flk1蛋白,与紫杉醇干预内皮共培养10天时vWF染色阴性,但部分骨髓基质干细胞开始表达Flk1蛋白。结论骨髓基质干细胞种植能部分抑制紫杉醇引起的平滑肌细胞延迟增生,与紫杉醇干预内皮共培养的骨髓基质干细胞有向内皮分化的能力。

牛磺酸对心血管系统作用及机理的研究进展

牛磺酸对心血管系统作用广泛,机制复杂,主要有抑制心肌细胞凋亡,保护因缺血等所致心肌损伤;恢复因高糖、胆固醇、吸烟和同型半胱氨酸所致血管内皮功能异常;抑制血管平滑肌细胞增殖,减少血管平滑肌钙化;促进高脂血症动物模型的胆固醇代谢和排泄而降脂;经对髓过氧化酶、牛磺酸氯胺和核因子κB等抗氧化而抑制动脉硬化;牛磺酸的作用需依赖其跨细胞膜转运功能,但病态心肌和血管细胞牛磺酸转运异常;此外,对果糖所致高血压和铁超载所致心血管系统损害的动物模型均有改善作用等。