沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探究沉默干扰素诱导蛋白16(IFI16)对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响。方法检测HAAFs凋亡、IFI16、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果基因沉默组IFI16低于另两组(P<0.05),基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于另两组(P<0.05),阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率、IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默IFI16表达能够降低HAAFs凋亡率。

CDDO-Me对缺氧诱导的肺动脉外膜成纤维细胞活化的影响

目的:探索甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对缺氧诱导的人肺动脉外膜成纤维细胞(pulmonary artery adventitia fibroblast,PAAF)活化的影响及其相关机制。方法:体外培养人PAAF,随机分为常氧组(21%O2)、缺氧组(1%O2)、缺氧+CDDO-Me组和常氧+CDDO-Me组。采用CCK-8法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移;DCFH-DA荧光探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,ELISA试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量以及细胞上清液中转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β表达水平;免疫荧光法观察细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达以及核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65核转位情况;Western blot检测细胞内α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、波形蛋白表达以及Smad3、p65磷酸化水平。结果:CDDO-Me(62.5、125.0、250.0、500.0 nmol/L)可以浓度依赖性地降低缺氧诱导的PAAF细胞活力的升高,并在250.0 nmol/L和500.0 nmol/L时具有显著抑制作用。CDDO-Me(500.0 nmol/L)可以抑制缺氧诱导的PAAF迁移以及肌成纤维细胞转化,恢复细胞形态,抑制缺氧诱导的PAAF中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和波形蛋白表达水平的升高。在缺氧条件下,CDDO-Me(500.0 nmol/L)显著降低PAAF中ROS和MDA水平,升高GSH和SOD含量,提高细胞抗氧化应激能力。CDDO-Me(500.0 nmol/L)可以抑制缺氧诱导的PAAF中细胞因子TGF-β1的分泌,抑制TGF-β1/Smad3信号通路的激活。此外,CDDO-Me(500.0 nmol/L)还可以抑制缺氧诱导的PAAF中NF-κB(p65)的核转位及其磷酸化,并抑制其下游炎症因子TNF-α和IL-1β的表达。结论:CDDO-Me可以抑制缺氧诱导的PAAF增殖、迁移以及向肌成纤维细胞转化,提高PAAF抗氧化应激能力,并抑制TGF-β1/Smad3信号通路和NF-κB信号通路。

钩藤生物碱对自发性高血压大鼠胸主动脉成纤维细胞凋亡/增殖及FN、LN的影响

目的研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)胸主动脉血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)凋亡、增殖及Bcl-2、Bax、c-Fos、c-Myc、层黏连蛋白(laminin,LN)、纤维层黏连蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法选择8周龄雄性SHR40只,随机分为模型组、卡托普利组(17.5mg/kg)、异钩藤碱组(5.0mg/kg)、钩藤碱组(5.0mg/kg)和钩藤总生物碱组(50.0mg/kg),每组8只。另选取8周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常组。模型组和正常组灌胃给予等容量生理盐水。各组给药容积为每次10mL/kg,每周给药6天,连续8周,随体重变化调整给药量。采用AnnexinV-FITC结合PI染色、流式细胞术分析胸主动脉VAF凋亡率;免疫组化法检测胸主动脉VAFBcl-2、Bax、c-Myc、c-Fos、FN及LN蛋白表达;原位杂交法检测胸主动脉VAF转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)mRNA表达。结果与模型组比较,各用药组干预4、8周大鼠尾动脉收缩压均降低,胸主动脉VAF凋亡率、Bax蛋白均升高,Bcl-2、c-Fos、FN、LN蛋白及TGF-β1mRNA均降低,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组c-Myc蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与卡托普利组比较,钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组大鼠尾动脉收缩压、c-Fos蛋白表达及TGF-β1mRNA差异无统计学意义(P>0.05);胸主动脉VAF凋亡率升高,Bcl-2、c-Myc及LN蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);钩藤碱组、异钩藤碱组Bax蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);异钩藤碱组FN蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。钩藤碱组、异钩藤碱组及钩藤总生物碱组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱可能通过调节原癌基因Bcl-2和Bax蛋白表达,促进SHR胸主动脉VAF凋亡,通过下调c-Fos、c-Myc蛋白和TGF-β1mRNA表达途径抑制SHR胸主动脉VAF增殖,并通过下调FN和LN蛋白表达而减轻细胞外基质的沉积,从而改善胸主动脉外膜重塑,降低尾动脉收缩压。

转化生长因子β1在血管损伤后再狭窄形成中的作用

转化生长因子β1是一种高度多效、多功能性的生长与分化因子,它广泛地调节机体的生长、发育、炎症、修复和免疫等许多生理和病理过程。当血管损伤后,局部产生的细胞因子引起炎症反应是血管再狭窄的主要原因。其中,转化生长因子β1在局部水平上调刺激平滑肌细胞增殖和迁移、促进动脉外膜细胞的表型改变和迁移以及局部细胞外基质蛋白的产生和沉积,从而促进血管再狭窄。本文从转化生长因子β1的生物学特性、血管损伤后再狭窄的病理学、转化生长因子β1与血管损伤后再狭窄相关性及转化生长因子β1对血管损伤后再狭窄的作用机制等方面进行综述,说明转化生长因子β1在血管损伤后再狭窄病理过程中所起的作用。