壳聚糖通过下调动静脉内瘘模型家兔血清MCP-1和VEGF-A表达影响血管内膜增生作用机制

目的探讨壳聚糖下调动静脉内瘘模型家兔血清单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和血管内皮生长因子(VEGF)-A表达影响动脉内膜增生的作用机制。方法选取新西兰兔60只作为实验对象,48只用于建立动静脉内瘘模型,分为模型对照组和壳聚糖低、中、高剂量组,每组12只,雌雄各半,其余12只行假伤手术作为假伤对照组。壳聚糖低、中、高剂量组脉注射不同剂量的壳聚糖溶液,假伤对照组和模型对照组注射等量的生理盐水,治疗28 d后观察相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察实验兔颈内静脉内膜病理变化,测量并计算各组新生血管内膜厚度,免疫组化法检测血管内膜组织MCP-1、VEGF-A表达水平,Western印迹检测实验兔血清MCP-1、VEGF-A蛋白表达水平,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测血清MCP-1 mRNA、VEGF-A mRNA表达水平。结果各组血管内膜组织MCP-1和VEGF-A蛋白阳性表达、血清MCP-1和VEGF-A蛋白相对表达量、血清MCP-1 mRNA和VEGF-A mRNA相对表达量及新生动脉内膜厚度差异均有统计学意义(P<0.05)。上述7个指标水平中,与假伤对照组比较,建模各组均明显升高,模型对照组均明显高于壳聚糖低、中、高剂量组,壳聚糖低剂量组明显高于中、高剂量组(P<0.05);除MCP-1 mRNA和VEGF-A mRNA外,其余指标水平在壳聚糖中剂量中均明显高于高剂量组(P<0.05)。HE染色结果显示,建模各组可见内膜增生,血管管腔明显变窄,壳聚糖干预治疗各组,增生内膜减少,剂量越大抑制内膜增生越明显。Pearson相关性分析显示,血清MCP-1、VEGF-A蛋白及其mRNA相对表达量与新生血管内膜厚度呈正相关(r=0.830,0.840,0.818,0.828;P=0.000)。结论壳聚糖可有效下调动静脉内瘘模型内膜组织及血清MCP-1和VEGF-A表达,抑制动脉内膜增生作用。

壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响,初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型,术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液,分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组,每组12只,另取12只作为正常对照组,8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学,Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中,建模的各组明显高于正常对照组,模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中,低、高剂量壳聚糖组和模型对照组明显高于正常对照组(均P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB、PCNA蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(均P<0.05)。低、高剂量壳聚糖组MyD88蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB蛋白表达量明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。模型对照组MyD88、NF-κB和PCNA mRNA明显高于低、中、高剂量壳聚糖组(P<0.05);低、高剂量壳聚糖组MyD88 mRNA表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05)。TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量与PCNA蛋白表达量呈正相关(r=0.471、0.455、0.351;P<0.05),TLR4 mRNA表达量与PCNA mRNA表达量呈正相关(r=0.395;P<0.05)。各组MAP和CVP差异均有统计学意义(P<0.001),低、高剂量壳聚糖组和模型对照组MAP和CVP均明显高于中剂量壳聚糖组和正常对照组(P<0.05),且模型对照组明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。结论 适宜剂量壳聚糖可以影响血管重塑,有效改善血流动力学,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路异常活化有关。