采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产KPC大肠埃希菌ST131和ST405分型的研究

目的采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速检测产KPC大肠埃希菌ST131、ST405,并对该方法的可行性进行评价。方法收集浙江省人民医院临床分离46株大肠埃希菌,扩增blaKPC耐药基因,采用多位点序列分型方法(MLST)进行分型。MALDI-TOF MS对大肠埃希菌进行鉴定并对不同克隆的峰图进行主成分分析和算法统计,获得分型区分的特征峰。结果 46株KPC型大肠埃希菌均携带KPC-2耐药基因,MLST方法检测到2种ST型,分别为ST131和ST405。主成分分析图显示ST131和ST405可分为2簇,其中2株ST131和3株ST405分类错误。ClinProTools软件4种算法结果基本相似,方法特异度和灵敏度分别为93.27%和97.92%。用于区分ST131和ST405的特征峰主要为8 331.84、4 166.44、4 860.21和2 783.66 Da。这4个峰区分具有统计学意义,有较高准确性。结论采用MALDI-TOF MS可快速区分产KPC大肠埃希菌ST131和ST405,具有操作简单、耗时短、区分灵敏度和特异度高以及成本低等优点,能用于大肠埃希菌克隆分型研究。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法测定大蒜寡糖和多糖分子质量分布

研究大蒜多糖的分子质量分布,探索获得适宜于结构研究的不同分子质量分布的大蒜多糖样品的方法。利用不同体积量的丙酮和乙醇为沉淀剂,得到一系列不同分子质量的大蒜多糖样品,并利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法测定各样品的分子质量分布。结果表明,不同体积量的丙酮与乙醇分解沉淀所获得的样品中都含有低聚糖和多糖,糖的分子质量分布在362～2811u之间;丙酮对大蒜多糖的沉淀能力比乙醇好,3倍体积丙酮的多糖提取液所获得样品中低聚糖的含量高于4倍体积的乙醇。因此,通过调整丙酮或乙醇的的比例可得到不同分子质量分布的大蒜寡糖、多糖。

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌对厄他培南的水解能力

目的应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测产KPC-2、NDM-1、VIM-2、IMP-1与IMP-4型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌水解厄他培南的能力。方法收集2009年6月-2013年12月上海交通大学医学院附属新华医院各种临床标本中分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE),用改良Hodge试验进行产碳青霉烯酶的表型筛选,用PCR扩增方法检测其碳青霉烯酶基因,并经测序确认。应用MALDI-TOF MS进行厄他培南水解预试验以确定最适厄他培南浓度及孵育时间,随后采用预试验中的最适条件,应用MALDI-TOF MS检测CRE水解厄他培南的能力。结果 108株CRE中,有102株改良Hodge试验阳性,其中90株产KPC-2、4株产NDM-1、3株产VIM-2、2株产IMP-1、2株产IMP-4、1株同时产KPC-2和IMP-4型碳青霉烯酶,且在2 h内均能水解厄他培南;另外6株CRE改良Hodge试验阴性,未检测出上述碳青霉烯酶基因,且不水解厄他培南。结论临床微生物实验室应用MALDI-TOF MS能够快速准确检测CRE水解厄他培南的能力,筛查产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,为临床早期合理使用碳青霉烯类抗生素提供依据。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌

目的采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)筛选并验证ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰,建立快速检测此型别肺炎克雷伯菌的方法。方法收集前期已进行碳青霉烯酶基因检测和多位点序列分型(MLST)的118株肺炎克雷伯菌作为特异峰筛选组,其中ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌67株,非ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌51株,采用Clinpro Tools 3.0软件和Flex analysis 3.0图谱分析软件筛选出ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰;再收集前期已进行碳青霉烯酶基因检测和MLST的另外89株肺炎克雷伯菌作为特异峰验证组,严格按照试验条件获得质量图谱,对特异峰的特异性进行验证并进行重复性试验;最后随机收集95株肺炎克雷伯菌临床分离株及其临床鉴定图谱,利用特异峰直接判断菌株是否为ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌,同时对菌株进行碳青霉烯酶基因检测和MLST,以评估特异峰的临床应用价值。结果利用分析软件筛选获得ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的最佳特异峰为m/z 4 521;在试验条件下,以该峰作为检测此型别细菌的特异峰,其特异性和敏感性分别为98.1%和97.3%,且该特异峰的重复性达97.4%;采用临床鉴定图谱对特异峰的临床应用价值进行评估,其特异性和敏感性分别为95.2%和96.9%。结论 MALDITOF MS可检出ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰m/z 4 521。可依据细菌鉴定图谱是否存在此特异峰来直接检测ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌,该特异峰具有较高的特异性和敏感性,可快速、准确地为临床合理、有效的治疗和医院感染的控制提供依据。

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和N端测序鉴定重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的结构

目的 :应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 (MALDI -TOF -MS)和N端测序方法鉴定重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构。方法 :1 用Edman降解法进行N端测序。 2 应用MALDI-TOF -MS测定分子量并鉴定纯度。 3 通过还原、烷基化确定rhGM -CSF分子中二硫键数目。 4 通过蛋白内切酶Glu -C酶切的肽质量指纹谱确证氨基酸序列并确证其中两对二硫键的配对。结果 :1 测定的rhGM -CSFN端 15个氨基酸序列与从cDNA推导的序列一致。 2 测定的rhGM -CSF分子量与理论计算值一致。 3 证明rhGM -CSF没有自由巯基 ,含有两对二硫键 ,与理论值一致。 4 证明rhGM -CSF的氨基酸序列是正确的 ,并确证其中的两对二硫键配对正确。结论 :确证重组人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM -CSF)的结构是正确的 ,没有修饰、变异和氨基酸的丢失。应用的方法灵敏、准确。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在革兰阴性杆菌对β内酰胺类抗生素耐药性检测中的应用进展

β内酰胺类抗生素是一类临床应用最为广泛的抗菌药物,它通过干扰细菌细胞壁肽聚糖的交联结构发挥杀菌作用。该类抗生素包括青霉素及其衍生物、头孢菌素、单酰胺环类和碳青霉烯类等,其中尤以碳青霉烯类抗生素的抗菌活性最强。2013年CHINET细菌耐药性监测数据显示：肠杆菌科细菌对头孢菌素的耐药率约为20%,对碳青霉烯类抗生素的耐药率接近7%;不发酵糖革兰阴性杆菌对头孢菌素和碳青霉烯类抗生素耐药率均接近50%。

基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱与电喷雾离子化-四极杆-飞行时间质谱分析蛋白质

为比较基质辅助激光解析电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)和电喷雾离子化-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)在蛋白质定性和定量分析方面的性能,分别利用两种仪器对用于相对和绝对定量的等量异位标签(iTRAQ)标记的雌激素刺激前后MCF7细胞内的蛋白质水解产生的多肽进行了定性和定量分析。结果表明,用MALDI-TOF-TOF和ESI-Q-TOF方法分别鉴定出1086种和848种蛋白质,其中相同的蛋白质为633种;MALDI-TOF-TOF和ESI-Q-TOF方法分别找到38种和33种表达差异在0.5倍以上的蛋白质,其中3种为相同的蛋白质。实验数据说明,两种仪器在蛋白质定性和定量分析方面有很大的互补性,将两种仪器结合使用,不仅能够显著提高蛋白质定性和定量分析的覆盖率,而且可提高分析的置信度。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪在快速鉴定临床酵母菌中的应用

目的目前酵母菌的实验室检测方法往往鉴定周期长、操作繁琐、阳性率低,不能满足临床快速诊断和及时治疗的需要。文中探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)用于快速鉴定临床分离酵母菌的可行性。方法收集南京军区南京总医院2013年7-10月自临床标本分离的非重复酵母菌120株。分别使用MALDI-TOF-MS和Vitek 2-Compact全自动微生物分析系统或API酵母菌鉴定条进行鉴定,结果不一致的菌株采用ITS基因测序验证。结果 120株酵母菌中117株(97.5%)MALDI-TOF-MS正确鉴定到种水平,2株(1.7%)未给出鉴定结果,1株(0.8%)鉴定结果不一致的菌株经ITS基因测序确认,MALDI-TOF-MS和Vitek 2-Compact/API均鉴定错误。结论 MALDI-TOF-MS可以作为一个快速、准确和价廉的工具应用于临床酵母菌的鉴定。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在血培养阳性标本鉴定方面的应用进展

如今,随着抗菌药物特别是广谱抗菌药物的广泛应用,细菌耐药问题已逐渐成为全球性问题。怎样及时而有效地选择抗菌药物成为临床医生面临的一个难题。特别是在菌血症或是脓毒症等严重感染患者中,早期选用敏感抗菌药物可以有效降低病死率。但传统的细菌鉴定多采用手工法,依靠形态学、革兰染色镜检和生物化学反应,速度慢,不能满足临床诊断和治疗的需要。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定猪链球菌分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术在猪链球菌快速鉴定中的可行性。方法采用MALDI-TOF-MS法,对江苏省分离的40株猪链球菌及感染后临床症状类似的肺炎链球菌、猩红热链球菌、牛链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌分离株进行分析,评估方法的特异性。分别在脱纤维羊血平板、普通营养琼脂平板及猪链球菌选择性平板上培养24、48、72、120h,鉴定后对结果进行描述分析。结果猪链球菌分离株40株主要为血清2型(占95.0%),分离自病人标本(占75.0%)。以MALDI-TOF-MS法分析,主要离子峰为2667.450、4133.787、4421.894、5968.847、8269.519、9335.019、10990.488、15055.203Da,峰谱稳定,鉴定准确率为100.0%。肺炎链球菌、猩红热链球菌、牛链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌分离株鉴定结果均为阴性。在3种平板上培养24、48、72h,猪链球菌分离株均能被MALDI-TOF-MS准确鉴定。结论建立的MALDI-TOF-MS法具有快速、精准、成本低的优点,可替代Vitek 2、PCR等方法或作为相互验证方法,在有条件的机构应用。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测β-内酰胺酶的研究进展

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种检测微生物的新型工具,不仅可用于微生物的快速鉴定,而且还可以检测细菌的耐药机制。产β-内酰胺酶是革兰阴性杆菌耐β-内酰胺类抗菌药物的主要耐药机制,目前利用MALDI-TOF MS快速检测细菌β-内酰胺酶的技术已被广泛报道,方法主要有检测β-内酰胺酶水解β-内酰胺类抗菌药物的活性,直接检测β-内酰胺酶分子、肽段或其相关蛋白以及检测β-内酰胺酶基因的单核苷酸多态性等。该文结合最新的研究成果对MALDI-TOF MS在β-内酰胺酶检测中的应用现状进行综述。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在动物病原菌检测中的应用

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对厦门口岸进口的1000多份动物及其产品的样品进行致病菌的检测和鉴定,共检出20多种致病菌,并对这些菌株同时用传统生化鉴定方法进行确认。结果表明MALDI-TOF-MS对未知细菌进行鉴定,较传统方法更加快速、准确,而且可以进行高通量检测,可以广泛应用于口岸动物检疫以及微生物检验实验室的日常检验。此外,将国内分离鉴定的各种参考菌株建立的常见致病菌MALDI-TOF-MS数据库与布鲁克公司的MALDI Biotyper数据库进行病原菌鉴定的比较,结果表明,实验室自建的MALDI-TOF-MS数据库可以取得更加准确地结果。

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速检测生菜中嗜麦芽窄食单胞菌

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)在即食果蔬中微生物风险监测的应用价值,确定生菜中的危害微生物及蛋白指纹图谱特征。方法对成都地区50份生菜样品进行微生物的检测,对分离的嗜麦芽窄食单胞菌进行生化鉴定和MALDI-TOF MS鉴定,采用维恩分析(包括小于0.85‰偏差)对生菜中分离的嗜麦芽窄食单胞菌指纹图谱进行拟合,采用系统聚类法对分离的嗜麦芽窄食单胞菌指纹图谱进行聚类分析。结果50份生菜样品中检出11株嗜麦芽窄食单胞菌,MALDI-TOF MS获得其蛋白图谱拟合出特征性标识峰指纹图16组,与数据库中超级谱图比对有9组不同标识峰,为生菜分离菌特征峰;蛋白指纹图谱聚类结果表明嗜麦芽窄食单胞指纹图谱有一定来源指向性,但仍需更多数据修正。结论嗜麦芽窄食单胞菌在生菜中检出率较高,可作为危害风险特征微生物继续研究,MALDI-TOF MS可获得更多农产品中致病微生物特征信息,作为农产品危害识别微生物快速鉴定及差异性分析应更深入的研究和扩大数据量,并建立农产品微生物数据库系统。

应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱源后衰变技术鉴定蛋白质

目的 应用源后衰变 (PSD)技术结合数据库检索鉴定二维蛋白质电泳 (2DE)胶上的蛋白质斑点。方法用已知多肽 (ACTH) 1839肽段和TPA被胰酶降解后的 1个肽段建立了PSD MALDI TOF MS方法。结果 应用已建立的PSD MALDI TOF MS法分别将 2DE分离后胶上的 2个未知蛋白质斑点鉴定为 4 0S核糖体蛋白S12和dnaK抑制蛋白。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪应用于鲍曼不动杆菌检测的研究进展

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪（matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）是一种新型的软电离生物质谱,其原理是用激光照射待测物与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子使其电离,让离子在电场作用下加速飞过飞行管道,

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌

目的探索基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)在牦牛酸奶中德氏乳杆菌检测中的应用。方法采用MALDI-TOF MS对分离自天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌进行分析研究。针对10株分离自牦牛酸奶经16S rDNA鉴定的德氏乳杆菌进行质谱分析,根据乳酸菌的特异性特征,设计6种微生物破碎方法和5种微生物蛋白质抽提方法进行正交组合实验,在同一质谱条件下采用加权计算及均方根误差分析的获得变异较低稳定性高的处理方法。在最佳处理组合下采用SARAMIS Premium对德氏乳杆菌进行相关分析。结果实验结果表明在液氮、超声、甲酸处理下德氏乳杆菌在基质解析电离中可产生稳定且丰富的蛋白质峰组,且相关分析较离散,但实验结果可为菌种差异性分析提供理论帮助。结论 MALDI-TOFMS对天然牦牛酸奶中德氏乳杆菌特征性分析具有较强应用价值。

基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱在高分子聚合物研究应用中的样品制备方法

在基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(Matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrum,MALDI-TOF-MS)研究高分子聚合物的过程中,样品的制备方法对获得准确的质谱图非常关键,样品制备必须选择合适的溶剂、基质和阳离子化试剂。文章就近年来MALDI-TOF-MS在高分子聚合物研究中的有关样品制备方法的发展进行综述。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱直接检测尿路感染病原菌性能评价

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)直接检测尿路感染病原菌的性能。方法收集1000例门诊及住院患者中段尿样本,接种于固体培养基,采用MALDI-TOFMS仪和全自动微生物鉴定系统对单个菌落进行鉴定;对中段尿样本进行前处理后直接采用MALDI-TOFMS仪进行分析。结果1000例中段尿样本中,培养法检出215例菌落计数≥10^5CFU/mL的细菌,阳性检出率为21.5%;其中162例分离到单一细菌,53例分离到混合细菌。2种仪器对215株细菌鉴定结果的符合率达100%。革兰阴性杆菌占76.3%,革兰阳性菌占23.7%。MALDI-TOFMS仪直接检测检出185例菌落计数≥10^5CFU/mL的细菌,阳性检出率为18.5%;其中145例分离到单一细菌,40例分离到混合细菌。直接检测法无假阳性,但阳性检出率较培养法低,阳性漏检率达到14.0%(30/215)。结论采用MADLI-TOFMS仪直接检测感染性中段尿样本,具有鉴定诊断时间短、成本低和适用性好的优点。

重组人FK506结合蛋白12的基体辅助激光解析电离飞行时间质谱分析

用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ测定了具有生物活性的重组人ＦＫ５０６（结合蛋白１２（ｒｈＦＫＢＰ１２）的分子量和胰 蛋白酶酶解的肽质量指纹谱，实验测定结果与理论计算值一致。证明其一级结构是正确的，在表达、复 性和纯化过程中没有氨基酸的丢失、变异和修饰。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在临床微生物检测中的应用

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术可以对临床样本中分离的细菌、真菌等进行快速鉴定。与传统的表型鉴定及分子生物学技术相比,该技术具有高通量、低成本、快速、准确的优势,而且可以直接从血培养、尿等临床标本中鉴定细菌。在细菌的耐药性检测方面也已获得阶段性进展。