大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间质干细胞的诱导分化作用

目的 探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法 从大鼠骨髓中分离培养间质干细胞并传至第 4代 ,诱导前 2 4h加 1 0ng/ml碱性成纤维生长因子 (bFGF)入培养液中以促分裂 ,再以正常脊髓、损伤后 5d及损伤后 40d脊髓匀浆上清液作诱导剂 ,然后观察细胞形态的变化 ,并采用免疫组织化学法 ,对诱导后第 4d的细胞进行神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达的检测。结果 诱导后第 4d的部分细胞不仅在形态上表现为神经元样 ,而且呈NSE及NF阳性表达 ,GFAP阴性。

两种肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的比较

背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确。目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环境诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的能力。方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制备SD大鼠肝纤维化模型,取肝纤维化大鼠及正常大鼠肝脏制备肝组织匀浆上清。将第3代人脐带间充质干细胞进行分组诱导培养:1标准对照组:加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。2纤维化肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及50 g/L纤维化肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。3正常肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及100 g/L正常肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。诱导开始后于倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;取标准对照组及诱导7 d的匀浆组细胞采用Western Blot法检测CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表达情况,采用ELISA法测定各组细胞培养液中白蛋白水平。结果与结论:与标准对照组长梭形成纤维样细胞相比,诱导7 d时,肝纤维化匀浆组及正常匀浆组细胞形态变化明显,呈类圆形,胞体丰满。与标准对照组相比,两匀浆组细胞均可表达肝细胞标志物CK18和AFP。标准对照组细胞可表达少量CYP2E1,两匀浆组细胞表达CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝细胞功能蛋白,且CYP2E1的表达量较标准对照组明显增加(P<0.01),而两匀浆组间上述蛋白的相对表达量差异无显著性意义(P>0.05)。同时,两匀浆组细胞分泌白蛋白的能力较标准对照组亦明显增强(P<0.01),两匀浆组相比差异无显著性意义(P>0.05)。实验结果显示正常肝组织和纤维化肝组织微环境均可诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化,在达到相同诱导效果时,纤维化肝组织所需组织液浓度更低,提示纤维化肝组织微环境可能更有利于人脐带间充质干细胞向肝细胞分化。

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景:许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的:观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞(RSC96)生长的影响。方法:使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数(0,10,15,20,25%)分组。结果与结论:人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为(470.625±2.546),(4.121±0.026)和(0.172±0.002)ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组(P<0.05);10%、15%人羊膜匀浆上清液组显示出促进细胞增殖的作用,而20%、25%人羊膜匀浆上清液组显示出抑制细胞增殖的作用;各实验组的细胞活力与对照组接近(P>0.05)。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时(10%和15%)具有促进RSC96增殖作用,高浓度时(20%和25%)抑制RSC96增殖。

大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

目的探讨大鼠脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经样细胞的作用。方法分离得到的MSCs在体外扩增、传代。用碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后加入不同时间的臂丛神经损伤大鼠脊髓匀浆上清液诱导。免疫细胞化学染色检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定分化细胞的表型特征。结果细胞诱导后具有神经元或胶质细胞样细胞的形态,相应细胞表面标志NSE或GFAP阳性,以损伤后7d脊髓匀浆上清液诱导组NSE阳性和GFAP阳性率最高(P<0.05)。结论臂丛根性撕脱伤大鼠脊髓匀浆上清液在体外能够有效地诱导骨髓MSCs分化为神经样细胞,伤后1w可以作为MSCs移植的最佳时间。

人直肠癌组织匀浆上清液对树突状细胞内皮化的影响

目的:观察人直肠癌组织匀浆上清液对人外周血来源的树突状细胞(DC)内皮化的影响。方法:用ELISA方法检测直肠癌组织、癌旁组织匀浆上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的含量。采集健康男性志愿者外周血单个核细胞,常规方法培养,分别在第1、3、7、10和14天收集细胞,流式细胞仪动态监测CD1a、CD31和CD34的表达。分3组培养DC细胞,分别在第3和7天加入直肠癌组织匀浆上清液、癌旁组织匀浆上清液及等体积生理盐水(对照组)。用免疫细胞化学方法检测3组细胞的CD1a、CD31及CD34双阳性和血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达。结果:直肠癌组织匀浆上清液VEGF-A的含量[(0.837±0.345)μg/L]高于癌旁组织匀浆上清液[(0.236±0.216)μg/L](t=4.668,P<0.001)。不同培养时间收集的DC表面分子CD1a、CD31和CD34的阳性表达率差异均有统计学意义(F分别为1832.478、20.410和49.137,P均<0.001)。第3和7天,癌及癌旁组织匀浆上清液组CD1a+CD31+、CD1a+CD34+的表达率均高于对照组(F分别为342.21、544.70、107.09和189.72,P均<0.001);且癌及癌旁组织匀浆上清组第3天CD1a+CD31+、CD1a+CD34+的表达均高于第7天(t分别为13.110、25.480、9.115和21.550,P均<0.001)。癌[(6.3±1.1)个/HPF]、癌旁[(6.0±0.6)个/HPF]组织匀浆上清组vWF的表达均高于对照组[(0.8±0.1)个/HPF](F=176.57,P<0.001),但前2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:直肠癌组织匀浆上清液可促使未成熟DC发生内皮化。

人羊膜匀浆上清液治疗兔角膜碱烧伤的病理研究

目的:观察人羊膜匀浆上清液促进兔角膜碱烧伤后角膜上皮和基质修复的作用,为临床上应用人羊膜匀浆上清液点眼治疗眼碱烧伤提供理论依据。方法:将制备的羊膜匀浆上清液点眼治疗兔角膜碱烧伤,并对治疗后的角膜照相观察角膜上皮愈合和基质修复情况。结果:羊膜匀浆上清液治疗角膜碱烧伤后眼充血明显减轻,角膜上皮愈合较快,角膜上皮细胞排列整齐,基质中炎症细胞浸润减轻且胶原纤维排列整齐。结论:早期应用羊膜匀浆上清液能促进兔角膜碱烧伤后角膜的愈合及膜基质有序修复。

人羊膜匀浆上清液对兔角膜碱烧伤后上皮愈合的影响

目的:观察人羊膜匀浆上清液对兔角膜碱烧伤后角膜上皮愈合的影响。方法:将制备的不同浓度的羊膜匀浆上清液点眼治疗兔角膜碱烧伤,筛选出最佳浓度的羊膜匀浆上清液,同时设立羊膜匀浆上清液组、bFGF(贝复舒眼液)组和对照组,对治疗后的角膜愈合照相并行角膜上皮愈合率的比较。结果:羊膜匀浆上清液治疗角膜碱烧伤后角膜上皮愈合较快。结论:羊膜匀浆上清液能促进兔角膜碱烧伤后角膜上起愈合,早期应用即能发挥作用。

肝匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞分化为肝样细胞

背景:前期实验证明大鼠肝组织匀浆上清液能诱导人脐带间充质干细胞发生形态学变化,但诱导后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特征尚不清楚。目的:以人脐带间充质干细胞为研究对象,对肝组织匀浆上清液定向诱导分化后细胞是否具有肝细胞的表型和功能特性进行初步验证。方法:选取第3代人脐带间充质干细胞,采用肝组织匀浆上清液作为诱导培养基,进行如下分组:单纯肝组织匀浆上清液作为阴性对照组,QSG-7701人肝细胞株作为阳性对照组,基础培养的人脐带间充质干细胞作为标准对照组;肝组织匀浆上清液处理3,5,7 d诱导组;在蛋白水平和转录水平对肝细胞特异性标志物甲胎蛋白、角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶进行检测。结果与结论:经肝组织匀浆上清液诱导后,细胞形态发生了显著变化,随诱导时间延长梭形干细胞逐渐减少,细胞呈三角形,多角形或不规则形。肝组织匀浆上清液诱导干细胞3,5,7 d后肝细胞标志物甲胎蛋白、人细胞角蛋白18和色氨酸2,3-加双氧酶在蛋白和mRNA水平均显著高于标准对照组(P<0.01)。实验结果提示在体外经肝组织匀浆上清液诱导后,人脐带间充质干细胞能够分化为具有肝细胞特异性标记的肝样细胞,并具有部分肝细胞功能。

人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞中bFGF表达的影响

目的:观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对体外培养的兔角膜上皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响,探讨人羊膜匀浆上清液在促进角膜上皮损伤修复中的作用。方法:将兔角膜上皮细胞离体培养并传代,然后分组。实验组分别在含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液中分别加入终浓度为40,80,160μg/mL的人羊膜匀浆上清液,对照组仅用100mL/L胎牛血清的DMEM培养液。分别在培养24,48和96h后,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞增殖的影响。同时,采用RT-PCR技术检测三个不同等级浓度对兔角膜上皮细胞bFGF-mRNA表达的影响。结果:培养24h后,与对照组(0.087±0.013)比较,加入终浓度为40,80,160μg/mL人羊膜匀浆上清液的实验组角膜上皮细胞增殖数量(分别为0.185±0.010,0.318±0.015,0.501±0.014)明显增加,差异具有显著性(P<0.05);同时,随着作用时间的延长,差异愈加明显;加入40μg/mL和80μg/mL浓度羊膜匀浆上清液组兔角膜的bFGF-mRNA(分别为0.750±0.007,0.785±0.006)和空白对照组(0.708±0.013)比较,差异无显著性意义(P>0.05),但160μg/mL浓度羊膜匀浆上清液组(1.013±0.120)与其它两组及对照组(0.708±0.013)比较,差异均具有显著性(P<0.05)。结论:人羊膜匀浆上清液具有促进兔角膜上皮细胞增殖的作用,并随着人羊膜匀浆上清液所含蛋白浓度的增加,其促进作用增强;人羊膜匀浆上清液具有促进体外培养的兔角膜上皮细胞bFGF-mRNA表达的作用,但与羊膜匀浆上清液的浓度有关。

人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤的大鼠肺微血管内皮细胞增殖及分泌炎症因子的影响

目的：探讨人羊膜匀浆上清液（hAHS）对脂多糖（LPS）致伤的大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVECs）增殖及其分泌促炎因子的影响。方法：用新鲜人羊膜制备hAHS,用考马斯亮蓝法和ELISA法分别测定hAHS中总蛋白和表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、白介素-4（IL-4）、IL-10、血管生成素-1（Ang-1）、人β-防御素2（HBD2）的含量。MTT法检测不同体积分数hAHS（0、10%、15%、20%、25%）作用于RPMVECs后细胞增殖活性的变化,确定hAHS促进RPMVECs增殖的最佳浓度。根据共培养条件不同,将RPMVECs随机分为4组：N组（10%FBS＋DMEM/F12）,A组（10%FBS＋DMEM/F12＋15%hAHS）,B组（10%FBS＋DMEM/F12＋LPS）和C组（10%FBS＋DMEM/F12＋15%hAHS＋LPS）。各组细胞在干预后0、12、24、48、72h用MTT法测定吸光度值（A值）,并分别于培养6、8、10、12、24h时用ELISA法测定RPMVECs培养上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的含量。结果：hAHS中总蛋白浓度为（725.125±12.625）mg/L,其中EGF、bFGF、VEGF、IL-4、IL-10、Ang-1、HBD2的浓度分别为（504.785±4.665）、（4.426±0.138）、（0.185±0.006）、（25.650±4.104）、（13.733±2.197）、（15.561±0.496）和（4.763±0.714）ng/L。hAHS的体积分数在10%~20%时均具有促进RPMVECs增殖的作用且以15%hAHS培养后第7、9天的增殖率最佳,而25%hAHS在第7、9、11天使RPMVECs增殖率小于0%hAHS组（P〈0.05）。A组48和72h细胞增殖活性较N组显著增加,B组24、48和72h的增殖活性较N组显著降低;C组24、48和72h的增殖活性较B组显著升高（P〈0.05）。ELISA结果显示,B组各时间点的IL-6和TNF-α的含量以及8、10、12和24h的IL-8含量均显著高于N组（P〈0.05）;C组10和12h的IL-6含量,8、10、12和24h的IL-8含量及各时间点的TNF-α含量均显著低于B组（P〈0.05）。结论：hAHS含有促进组织修复、调节免疫反应、降低血管通透性及杀伤致病微生物的多种生长因子、细胞因子,对LPS致伤的RPMVECs增殖具有促进作用,并减少致伤后炎症因子分泌。

蚯蚓匀浆上清液对猪场常见有害菌的抗菌效果

随着无抗生素饲料添加剂时代的到来,无抗饲料或替代抗生素饲料的研发成为了目前研究的热点。蚯蚓本身即为优质的蛋白质饲料,而且中医认为蚯蚓具有多项治疗疾病的功效。为确定蚯蚓匀浆液上清液对猪场分离的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌以及副猪嗜血杆菌这几种常见有害菌的抗菌效果,运用纸片扩散法(K-B法)与紫外分光光度法研究蚯蚓体匀浆处理液的抗菌性能。经纸片扩散法研究发现蚯蚓匀浆液上清对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌以及副猪嗜血杆菌均有不同程度的抗菌效果;最浓的蚯蚓匀浆液上清(蚯蚓与水的比例为2∶1)对大肠杆菌具有抗菌效果;蚯蚓匀浆液上清液对金黄色葡萄球菌具有较为明显和广谱的抗菌效果;蚯蚓与水的比例为4∶5时对链球菌和副猪嗜血杆菌的抗菌效果明显。液体培养的紫外分光光度试验表明:两种处理对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及链球菌有不同程度的抗菌效果;蚯蚓匀浆液2效果更为明显;24 h后,蚯蚓匀浆上清液的抗菌优势完全消失。本研究表明,蚯蚓匀浆上清液对猪场常见有害菌具有一定抗菌性,可为蚯蚓相关新型饲料原料开发提供理论依据。

大鼠脑缺血再灌注损伤脑匀浆上清液对骨髓基质细胞的影响

目的研究缺血再灌注损伤脑匀浆上清液对大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)形态、活力、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、电生理和神经营养因子(NTFs)表达情况的影响。方法将体外培养的大鼠BMSCs分别置于实验组、假手术组及空白对照组培养条件中,采用组织学、台盼蓝染色、免疫组织化学、膜片钳、半定量RT-PCR等方法,观察细胞形态改变,测定活性,鉴定NSE表达,记录全细胞膜电流,检测NGF、GDNF、BDNF和bFGF在各时间点mRNA表达情况。结果实验组细胞形态发生神经元样改变,细胞活力良好,NSE阳性率、外向K+电流峰值及电流密度、NTFs的表达水平高于其他组,但未引出动作电位。结论大鼠BMSCs在脑缺血再灌注损伤的细胞微环境中生长良好,可以诱导分化为神经元样细胞,但无神经元的电生理特征,NTFs的表达能力明显增强。

人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及炎症因子分泌的影响

目的观察人羊膜匀浆上清液（human amniotic homogenate supernatant,hAHS）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致伤条件下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar typeⅡepithelial cell,AT-Ⅱ）增殖及肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）和白细胞介素1β（interleukin1 beta,IL-1β）分泌的影响。方法 1取健康胎盘来源的新鲜人羊膜制备hAHS,配制含hAHS体积分数不同的5组培养基（对照组、10%hAHS组、20%hAHS组、40%hAHS组、80%hAHS组）对大鼠AT-Ⅱ行分组培养,四甲基偶氮唑盐（microculture tetrazolium,MTT）法测不同时间点OD630值。2对对照组、LPS致伤组、40%hAHS干预组大鼠AT-Ⅱ行分组培养,MTT法和酶联免疫吸附剂测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法测不同时间点OD630值和培养液中大鼠TNF-α和IL-1β含量。结果 1对数期内前4组间各时间点比较,hAHS体积分数相对较高组别的OD630值也相对较高（即40%hAHS组〉20%hAHS组〉10%hAHS组〉对照组）,且第3-5天均有统计学差异（P〈0.05）,而hAHS含量更高的80%hAHS组,各时间点均低于40%hAHS组,且第3-5天有统计学差异（P〈0.05）。2 hAHS干预组在24 h后各时间点的OD630值不仅均高于LPS致伤组,也均高于对照组,且均有统计学差异（P〈0.05）。与此同时,hAHS干预组各时间点大鼠TNF-α和IL-1β含量均低于LPS致伤组,且二者均分别于前6 h各时间点组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 hAHS可显著促进体外正常培养条件下AT-Ⅱ的增殖,且对LPS致伤条件下AT-Ⅱ的增殖和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌具有保护和抑制作用。

人结膜组织匀浆上清液体外诱导BMSCs定向分化的研究

结膜大部分暴露于外界，易受酸、碱烧伤及热烧伤等外界创伤，引起瘢痕性睑内翻、睑球粘连及继发性角膜损伤等一系列并发症，继而影响眼表结构和功能，甚至会导致失明。目前临床上尚缺乏治疗严重眼表疾病的有效方法。BMSCs是一类具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，

损伤脊髓匀浆上清对骨髓间充质干细胞分泌髓鞘前脂蛋白、脑源性神经营养因子的影响

背景:损伤脊髓匀浆上清成分复杂,其中不仅存在多种化学物质,而且也存在着多种细胞因子,这些物质能否影响骨髓间充质干细胞的增殖分化和分泌功能还不清楚。目的:探讨损伤脊髓匀浆上清成分对骨髓间充质干细胞分泌的脑源性神经营养因子和髓鞘前脂蛋白的影响。方法:贴壁法分离纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,稳定传到第3代后,分别用正常和损伤的Wistar大鼠脊髓匀浆上清诱导培养20d。免疫荧光染色检测神经元特异性烯醇化酶阳性细胞,ELISA法检测培养液内髓鞘前脂蛋白、脑源性神经营养因子的含量,即时定量-PCR检测髓鞘前脂蛋白mRNA、脑源性神经营养因子mRNA水平。结果与结论:损伤脊髓匀浆上清液诱导培养骨髓间充质干细胞后,神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率和培养液内脑源性神经营养因子、髓鞘前脂蛋白的含量在各个时间点均较正常脊髓匀浆上清液对骨髓间充质干细胞培养组高。提示,损伤的脊髓匀浆上清液能够诱导骨髓间充质干细胞分泌脑源性神经营养因子、髓鞘前脂蛋白,有利于向神经细胞方向分化。

羊膜匀浆液对兔小梁切除术后滤过泡及TGFβ1、CTGF表达的影响

目的研究羊膜匀浆提取液在兔实验性小梁切除术后对滤过泡及TGFβ1、CTGF表达的影响。方法将30只新西兰大白兔随机平均分为实验组和对照组,选右眼行标准小梁切除术。实验组于术后当天开始每天用羊膜匀浆液点眼,对照组单纯用氯霉素滴眼液点眼。在不同时间点分别作临床及病理观察。结果共22眼形成功能性滤过泡,其中实验组14眼,对照组8眼(P<0.05)。眼压除术前与术后2d差异无统计学意义(P>0.05)外,其余观察点差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组成纤维细胞(Fb)数目较对照组少(P<0.05)。免疫组化染色观察TGFβ1、CTGF的表达,实验组低于对照组(P<0.05)。结论羊膜匀浆上清液点眼无并发症发生,且能增强滤过泡滤过功能及降眼压效果,对滤过泡TGFβ1、CTGF表达有抑制作用。

体外诱导人脐带间充质干细胞定向分化为肝细胞的研究

目的对肝组织勻浆上清液（LHS）体外诱导人脐带间充质干细胞（hUCMSC）定向分化为肝细胞的功能特性进行检测.方法选取第3代hUCMSC,采用LHS作为诱导培养基,实验分为对照组和LHS处理诱导组,每组有3、5、7d三个时间点;诱导后对细胞进行AFP、CK18、TPH2、CYP3A4、Alb、HGF的免疫荧光细胞化学染色;并测定诱导前后CYP3A酶活性、Alb、HGF和尿素的分泌量.结果LHS诱导3d后细胞表达肝特异性蛋白AFP、CK18、TPH2、CYP3A4、Alb和HGF;对照组hUCMSC不同时间点CYP3A酶特异性代谢底物咪达唑仑的代谢量为0.026-0.030ng/mg,LHS诱导3、5和7d后细胞代谢量分别为（30.14±1.19）、（50.20±6.24）和（120.85±15.52）ng/mg,与对照组相比显著升高（P〈0.01）;对照组细胞3、5和7dHGF的分泌量分别为（0.24±0.14）、（0.42±0.20）和（0.18±0.15）ng/mg,LHS诱导后细胞HGF的分泌量分别为（4.06±1.35）、（3.35±0.17）和（3.83±0.42）ng/mg,与对照组相比显著升高（P〈0.01）;LHS诱导后各组细胞尿素分泌量增加14倍以上,与对照组相比显著升高（P〈0.01）;对照组3、5和7dAlb的分泌量分别为（22.66±2.99）、（16.99±2.90）和（15.37±1.86）ng/mg,诱导3、5和7d后Alb的分泌量分别为（36.40±3.53）、（46.66±2.50）和（54.82±4.28）ng/mg,与对照组相比显著升高（P〈0.05或P〈0.01）.结论在体外经LHS诱导后,hUCMSC能够分化为具有成熟肝细胞功能的肝细胞.

不同处理的蚯蚓产物对猪场源有害菌抑菌效果的对比研究

为研究蚯蚓的不同处理对几种猪场常见有害菌的抑菌性能,从而将其运用到猪的饲料添加剂中。本试验利用纸片扩散法和紫外分光光度法对比研究蚯蚓匀浆液、电击蚯蚓获得的体腔液、诱导后电击蚯蚓所得的体腔液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌的抑菌性能。通过纸片扩散法研究发现只有蚯蚓匀浆2∶1组对大肠杆菌有抑菌效果;蚯蚓匀浆2∶1组、4∶5组,蚯蚓电击处理和诱导电击处理均对金黄色葡萄球菌有抑菌效果;只有蚯蚓匀浆4∶5组对猪链球菌有抑菌效果。通过分光光度对比发现,蚯蚓匀浆组和电击处理组均无明显的抑制效果;蚯蚓电击处理组可以显著抑制葡萄球菌的增长(P<0.05),而蚯蚓匀浆组抑制效果不明显;蚯蚓匀浆组和电击处理组对猪链球菌无明显抑制效果,甚至蚯蚓匀浆组在6 h时OD值与对照组有显著上升。本文研究了蚯蚓不同处理对猪场有害菌的抑菌性能,为研发无抗和替抗饲料提供了依据。

汉黄芩素在FVB小鼠体内的磺酸化代谢特征研究

目的探讨汉黄芩素Ⅱ相代谢中主要的磺酸化代谢反应特征。方法采用FVB小鼠肠灌流模型及FVB小鼠肝脏S9体外反应体系,通过采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS/MS)和高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定汉黄芩素及其代谢产物,研究汉黄芩素主要的Ⅱ相代谢反应之一磺酸化代谢反应的特征。结果汉黄芩素在FVB小鼠小肠均发生葡萄糖醛酸化与磺酸化代谢反应,其中磺酸化代谢产物的排出速率为[(3.46±0.16)nmol/30 min/10 cm]。而汉黄芩素在结肠中只检测出磺酸化代谢产物,其排出速率为[(1.40±0.24)nmol/30 min/10 cm]。体外试验显示,汉黄芩素的磺酸化代谢符合双相酶代动力学特征,由两种磺酸化转移酶(Sult)亚型介导。结论汉黄芩素的磺酸化代谢反应是汉黄芩素肠道代谢的重要组成部分,其在肝脏的磺酸化代谢由两种Sult酶催化完成。