尼罗罗非鱼TIRAP基因克隆、组织表达及其在无乳链球菌、脂多糖和聚肌胞苷酸刺激下的免疫应答

为研究包含TIR结构域的接头蛋白(TIR domain-containing adaptor protein,TIRAP)基因在TLR信号介导的先天免疫中的调控作用,通过反转录-聚合酶链式反应和分段扩增获得了尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus TIRAP基因的cDNA全长,并对其生物信息学进行分析,利用RT-qPCR法分析TIRAP在健康鱼各组织中的表达情况,以及在无乳链球菌Streptococcus agalactiae、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激后不同组织不同时间点的表达量变化。结果表明:TIRAP cDNA全长2900 bp,开放阅读框为816 bp,可编码291个氨基酸;系统进化分析显示,尼罗罗非鱼与快乐东方鲷Astatotilapia calliptera TIRAP的亲缘关系较近;TIRAP在尼罗罗非鱼11个组织(肝、皮肤、心脏、肾、胃、鳃、脑、脾、肠、血液和肌肉)中均有表达,其中肌肉中表达量最高(P<0.05),胃中表达量相对较低;人工感染无乳链球菌引起TIRAP基因在肠和肾中上调表达,均在注射后1 d时表达量达到最大值;LPS和Poly I:C刺激引起TIRAP基因在肝、脾和肾中上调表达,但在肠中表达量均低于对照组(0 h)。研究表明,无乳链球菌、LPS和Poly I:C均能诱导TIRAP基因表达,TIRAP基因参与了尼罗罗非鱼免疫应答反应,暗示TIRAP在先天免疫中发挥作用。

由不同接头分子介导的Toll样受体信号通路

Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)是一类重要的模式识别受体(patternrecognitionreceptors,PRR)。Toll样受体信号通路既激活先天性免疫又对获得性免疫应答的启动发挥重要作用。一类包含TIR结构域的接头分子如MyD88、TIRAP、TRIF、TRAM可募集到不同Toll样受体的TLR胞质区,转导特异的信号通路。依据信号通路中接头分子的不同,Toll样受体信号通路一般分为MyD88依赖型信号通路和MyD88非依赖型/TRIF依赖型信号通路。

白藜芦醇抑制软骨肉瘤细胞SW1353炎症反应的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(RES)对白细胞介素1β(IL-1β)处理的人软骨肉瘤细胞SW1353的效应及其可能机制。方法:采用CCK-8法测定不同浓度IL-1β及RES对SW1353细胞增殖活力的影响。ELISA法检测细胞培养基上清基质金属蛋白酶13(MMP-13)的水平。RT-PCR法检测Toll样受体4(TLR4)、TIR结构域接头分子(TRIF)、髓样分化蛋白88(My D88)mRNA表达。结果:IL-1β处理对SW1353细胞的增殖活力无明显抑制作用(P>0.05)。RES浓度为6.25、12.5μmol·L^(-1)时能促进细胞增殖(P<0.05)。RES浓度在50μmol·L^(-1)时对细胞增殖无明显作用(P>0.05),而RES浓度为200μmol·L^(-1)时则显著抑制细胞增殖(P<0.05)。IL-1β和RES联合处理与单纯RES处理比较,能够降低细胞增殖活力(P<0.05)。相比对照组,IL-1β处理组培养基上清中MMP-13分泌水平及TLR4、TRIF、My D88 mRNA表达均明显增加(P<0.01),而RES则能够显著抑制IL-1β诱导的MMP-13的分泌水平,并降低TLR4、TRIF、My D88 mRNA的表达(P<0.01)。结论:RES可以通过抑制TLR4信号通路对体外培养的SW1353细胞发挥抗骨性关节炎效应。