江西山药茎尖包埋玻璃化法超低温保存及其遗传稳定性检测

采用植物组织培养法对广丰药薯茎尖的包埋玻璃化法超低温保存程序进行优化,并采用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记法和流式细胞术对其冻后再生苗的遗传稳定性进行检测,同时将超低温程序应用到江西山药其他地方品种,旨在为薯蓣属植物种质资源的长期保存奠定理论基础。结果表明,广丰药薯茎尖预培养的较佳时间为5 d,较佳的蔗糖浓度为0.75 mol·L^-1;装载的较佳时间为40 min;脱水的较佳温度为0℃,较佳时间为60 min;冻后黑暗培养7 d可以显著提高其成活率。用AFLP分子标记法和流式细胞术对茎尖冻后再生植株的遗传稳定性进行检测,没有发现异常条带和染色体倍性变化,气孔观察也未发现叶下表皮气孔参数的显著变异。将这种超低温保存程序用于江西山药其他基因型,成活率约为40%-85%。该研究建立的包埋玻璃化法超低温保存程序能保证江西山药的遗传稳定性,可为建立江西山药种质资源超低温保存库提供一定的技术支撑。

包埋玻璃化法超低温保存沙生柽柳休眠茎尖的研究

[目的]采用包埋玻璃化法,对沙生柽柳休眠茎尖成功地进行冷冻保存。[方法]将沙生柽柳休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理的时间对沙生柽柳休眠茎尖存活率的影响。[结果]含沙生柽柳茎尖的胶球在0.8mol/L蔗糖溶液中培养24h可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20min可以明显提高存活率,在优化条件下存活率可高达48.3%。[结论]蔗糖浓度和预培养时间是决定沙生柽柳茎尖存活率的关键因素。

树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存

对树莓茎尖包埋玻璃化法种质资源保存进行了研究,以期建立简单、高效的树莓种质资源超低温保存体系。试验以树莓试管苗茎尖为材料,探讨了不同因素对树莓试管苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存后成活率的影响。结果表明:长约1mm的树莓试管苗茎尖用海藻酸钙包埋后,采用分步预培养的方法,最后终止蔗糖浓度为0.9mol/L的MS培养基中进行预培养3天,再用含2mol/L甘油和0.9mol/L蔗糖的装载液处理90min,在0℃下用PVS2处理180min后投入液氮中保存1h,在40℃下化冻3min,用含1mol/L蔗糖的MS液体培养基洗涤20min,最后转到恢复培养基上,30天后在没有形成愈伤组织的情况下形成新的植株。以上的保存程序应用于6个树莓品种,成活率达85%。该结果为树莓种质资源的超低温长期保存提供了理论依据。

李茎尖包埋玻璃化法超低温保存的条件探索

以贵州特有地方李资源——酥李为材料,探讨了超低温保存过程中海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、渗透保护剂中蔗糖浓度和玻璃化液PVS2处理时间对茎尖存活的影响。结果表明:剥取长约2 mm的李茎尖悬浮于2%～3%海藻酸钠的溶液中,将该混合液滴于0.1 mol/L Ca2+溶液中,包埋液均含有2 mol/L甘油和0.4 mol/L蔗糖。包埋30 min后,在0℃下PVS2处理120 min后快速投入液氮(LN),24 h后取出。在37℃水浴中化冻3 min,用1.2 mol/L的蔗糖溶液洗涤2次,每次10 min,接种于恢复培养基中,暗培养1周后,转移至正常光下,茎尖存活率达21%。

包埋玻璃化法超低温保存灰杨休眠茎尖的研究

采用包埋玻璃化法,对灰杨休眠茎尖进行了超低温保存研究。将灰杨休眠茎尖包埋在含3%褐藻酸钙的胶球中,研究了预培养中的蔗糖浓度、培养时间和不同玻璃化保护液处理时间对灰杨休眠茎尖存活率的影响。结果表明:含灰杨茎尖的胶球在0.8 mol/L的蔗糖溶液中培养24 h,可获得较高的存活率;胶球经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(分子量4 000)+5%二甲基亚砜]在25℃处理20 m in,可以显著提高其存活率,在优化条件下存活率可高达58.3%。

卵叶泥炭藓茎尖包埋玻璃化法超低温保存研究

该研究通过对脱水时间和化冻温度的探索,检验了包埋玻璃化法在超低温保存湿润生境中苔藓的可能性。结果表明:卵叶泥炭藓无菌苗在4℃条件下预培养3d后,在0℃用60% PVS_2装载30min,PVS_2脱水60min后迅速投入液氮保存,24h后用40℃水浴快速化冻2min再培养,成活率可达42.41%,且再生植株与常温状态下的植株形态指标没有显著性差异。研究认为,包埋玻璃化法超低温保存湿润环境中生长的苔藓植物是可行的。

胡杨休眠茎尖的包埋玻璃化法冷冻保存研究

【目的】建立适合胡杨休眠茎尖的冷冻保存方法,对珍稀濒危植物胡杨种质资源进行保存。【方法】取深冬胡杨休眠茎尖,无菌处理后,包埋在3%褐藻酸钙胶球中,对包埋后的胶球进行蔗糖预培养,预培养后的胶球再用玻璃化保护液进行处理。研究预培养过程中蔗糖浓度、预培养时间及不同玻璃化保护液和处理时间对胡杨休眠茎尖存活率的影响。【结果】含有休眠茎尖的褐藻酸钙胶球在0.8 mol/L蔗糖溶液中预培养24 h,经玻璃化保护液[40%甘油+45%(0.4 mol/L)蔗糖+10%聚乙二醇(4 000)+5%二甲基亚砜],于室温下处理30 min后再进行冷冻保存,可以获得较好的存活率。【结论】在优化的条件下,胡杨休眠茎尖存活率可高达77%,对保存后再生的幼芽进行遗传稳定性检测,未发现变异。采用液氮冷冻保存胡杨休眠茎尖是可行的。

红芽芋茎尖的包埋玻璃化法超低温保存（英文）

对红芽芋(Colocasia esculenta var.cormosus ‘Hongyayu’)茎尖的包埋玻璃化法超低温保存技术进行了研究。茎尖从培养8周的试管苗上切下并包埋成海藻酸钙凝胶珠,并在MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3+0.3 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中预培养24 h,随后用2 mol·L^(-1)甘油+0.4 mol·L^(-1)蔗糖的混合物在25℃下装载30 min,并用PVS2在25℃脱水20 min后将包埋的茎尖直接投入液氮保存。保存1 d后取出材料在40℃水浴快速复温3 min后,吸去冷冻管中PVS2,并用MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3+1.2 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基在25℃洗涤3次,每次10 min。最后将茎尖接种于MS+3.5 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)IBA+0.1 mg·L^(-1)GA_3的固体培养基上,暗培养3 d后转入正常的光周期中培养。红芽芋茎尖冻后成活率约为80%,其再生植株没有发生形态学的变化。这种包埋玻璃化法程序有望成为红芽芽茎尖超低温保存的常规方法。

药用植物黄芪离体培养茎尖的包埋脱水法和包埋玻璃化法超低温保存（英文）

为找出一条黄芪种质长期包埋脱水法保存和包埋玻璃化法保存的程序,以来源于黄芪离体生长腋芽的黄芪茎尖并包埋成海藻酸钙珠。随后,在MS+0.75 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中25℃下预培养5 d后,放于干硅胶上无菌干燥5 h,直至含水量达23.1%(以鲜重为基础)时将材料投入液氮保存。保存1 d后,茎尖在40℃水浴中化冻2~3 min并转入固体培养基上进行再生培养,2周后大约50%的茎尖可再生出芽。黄芪茎尖包埋玻璃化法超低温保存程序也被优化,同样包埋成海藻酸钙凝胶珠的茎尖在MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA+0.75 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基中25℃预培养3 d,用2 mol·L^(-1)甘油+0.4 mol·L^(-1)蔗糖装载液25℃装载90 min并再用PVS2在0℃下处理120 min后直接投入液氮。保存1 d后,取出材料在37℃水浴中化冻2~3 min,并用MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA+1.2 mol·L^(-1)蔗糖的液体培养基进行10 min的洗涤后转入MS+1 mg·L^(-1)6-BA+0.05 mg·L^(-1)NAA的固体培养基上进行再生培养。茎尖的再生率接近80%。以上两种超低温保存方式均未造成再生植株形态学上的变化。因此,包埋脱水法和包埋玻璃化法两种常规方法对于黄芪茎尖超低温保存来说均具有重要的意义。

木薯茎尖包埋—玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨装载时间、蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间对木薯种质超低温保存舌成活率的影响。结果表明，长约1．5mm的木薯茎尖用海藻酸钙包埋后，在含有2mo1．L^-1甘油和0．4mo1．L^-1蔗糖的装载液装载30-40min，然后在含有0．5mo1．L^-1蔗糖的改良MS培养基上预培齐2d，0℃下PVS2处理4h后快速投入液氮（LN），1h后取出，在40℃水浴中化冻90sec，用含有1．2mo1．L^-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20min，接种于恢复培养基中（MS＋0．02mg．L^-1NAA），暗培养3-5d，转移至正常光下，最高成活率接近70％；再生植株生长和分化正常。

高山红景天(Rhodiola sachalinensis A.Bor)茎尖包埋-玻璃化法超低温保存与植株再生

使用包埋-玻璃化法对两种来源的高山红景天茎尖进行超低温保存研究，探讨蔗糖预处理、包埋过程中渗透处理和不同温度下玻璃化液PVS2处理的时间对超低温保存后茎尖存活率的影响．结果表明，茎尖依次在0．3、0．5、0．7、1．0mol·L^-1的蔗糖溶液中各预培养1d后，转入1．0mol·L^-1的蔗糖溶液中继续培养4d，然后使用附加2mol·L^-1甘油和1mol·L^-1蔗糖的包埋液渗透处理60min，包埋珠在0℃处理180～210min后投入液氮，48h后用40℃水浴快速化冻3min，用含有1mol·L。蔗糖的改良MS培养液洗涤20min，转入MS＋6-BA1mg·L^-1＋NAAO．1mg·L^-1固体培养基中在22℃条件下进行暗培养，2d后转移入光照培养，最高成活率接近100％，再生植株生长和分化正常．

青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。

冰冻保存小新月菱形藻的包埋-玻璃化法

采用包埋-玻璃化法对小新月菱形藻进行冰冻保存,探讨玻璃化溶液(PVS)配方、装载液浓度和装载时间、脱水时间以及洗涤方法对冰冻保存存活率的影响。结果表明:小新月菱形藻在0℃预冷后50%PVS2装载60min,100%PVS2脱水60min,1mol·L-1蔗糖梯度洗涤30min的条件下存活率最高,为74.1%。包埋-玻璃化法不需要特殊的冷冻设备,冰冻程序操作简单,在藻类种质的超低温保存中有较大的应用潜力。

山药种质包埋玻璃化超低温保存再生植株的稳定性分析

为了验证前期建立的包埋玻璃化超低温保存技术是山药(Dioscorea opposita)种质资源离体保存的一种有效的方法,对包埋玻璃化超低温保存后的山药再生植株的形态、生理和同工酶酶谱进行了研究。结果表明:与常温保存的植株相比,供试的铁棍山药再生植株的平均株高、叶片数、芽数和茎节长,叶片中叶绿素、可溶性蛋白和可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力在绝对值上虽有差异,但均未达到显著水平,且能移栽成活,保持了形态和生理的稳定性;供试的铁棍、太谷、怀庆和嘉祥细长毛4种山药再生植株的SOD和蛋白水解酶的同工酶条带数目及强度均未发生变化,保持了酶蛋白的稳定性。说明前期建立的包埋玻璃化法超低温保存技术是山药种质离体保存的一种有效方法。

扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3％的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液（MS＋2 mol/L甘油＋0.4 mol/L蔗糖）中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45％.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.

扁桃茎尖包埋玻璃化超低温保存条件研究

采用包埋玻璃化法对莎车18号扁桃茎尖超低温保存进行了研究。主要探讨低温锻炼、预处理浓度和预处理时间、装载时间和PVS2处理时间对莎车18号扁桃茎尖超低温保存后存活率的影响。结果表明,将低温锻炼4周的莎车18号扁桃茎尖切2 mm长用3%海藻酸钠包埋后,在含有0.3 mg/L蔗糖＋5%DMSO（二甲基亚砜）的MS培养基预培养1 d,装载液处理20min,在0℃条件下用PVS2处理50 min后迅速投入液氮,24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤2次,每次10 min,接种于含6-BA0.3 mg/L和IAA 0.3 mg/L的MS培养基上进行培养,暗培养15 d,转移至正常光下,存活率高达52%。

高山红景天茎尖的包埋—玻璃化超低温保存研究(英文)

采用包埋-玻璃化法对高山红景天茎尖进行了超低温保存研究,研究了蔗糖预处理、包埋过程中渗透和不同温度下玻璃化液PVS2处理的时间对超低温保存后茎尖存活率的影响。结果表明,茎尖在0.3,0.5,0.7,1.0mol.L-1的蔗糖溶液中各预培养1 d后,转入1.0 mol.L-1的蔗糖溶液中再培养4 d,使用含2 mol.L-1甘油和1mol.L-1蔗糖的包埋液渗透处理60 min,包埋珠在0℃处理180至210分钟后投入液氮,投入48 h后用40℃水浴快速化冻3 min,用含有1 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,转入MS+6-BA1mg.L-1+NAA0.1 mg.L-1固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2 d后转入光照培养,最高成活率接近100%,再生植株生长和分化正常.

甘薯茎尖超低温保存技术研究

本试验采用包埋玻璃化法超低温冷冻技术保存徐薯18号的茎尖,结果表明,当剥取茎尖大小为1.0~1.5 mm,玻璃化处理时间为90 min时,茎尖存活率达85%以上。

杏离体胚培养与超低温保存的研究

使用包埋玻璃化法对杏离体胚进行超低温保存研究,探讨适宜培养基、蔗糖预处理的时间及浓度、玻璃化保护液的选择及时间对超低温保存后胚成活率的影响。结果表明,胚在0.8 mol/L的蔗糖溶液中预培养24 h后,转入玻璃化保护液B中继续培养30 min,投入液氮24 h后用40℃水浴快速化冻5 min,转入MS培养基中在22℃条件下进行暗养,1 d后转移光照培养,最高成活率达80%。

菊花茎尖外植体高效超低温保存技术建立的分析

菊花是全球最重要的鲜切花之一,建立高效的菊花茎尖超低温保存体系具有重要意义。本研究以菊花‘Sei Hillary’试管苗为材料,研究了茎尖大小、炼苗期光照条件、六种再生培养基配方、超低温保存方法、母株感染病害情况对超低温保存效率的影响,结果发现,上述参数均显著影响茎尖超低温保存效率,组织切片观察揭示了超低温保存方法影响再生效率的原因。本研究建立了一个高效的菊花茎尖超低温保存体系,主要技术步骤包括:健康试管苗在16 h的光周期下4℃炼苗6周、切取携带3~4片叶原基的茎尖(1.5 mm),利用小滴玻璃化法进行超低温保存,快速解冻后于添加0.05 mg/L GA3的1/2Knop培养基上再生培养。该体系可获得85.5%成活率和53.7%的再生率,为菊花种质资源提供了一种简单高效的长期保存方法。