介绍一种用细胞包被酶标板的新方法——细胞培养包被法

应用细胞性抗原包被酶标板进行ELISA检测,要求细胞稳固、均匀地分布于酶标板上。目前多采取将分离后的细胞悬液加入酶标板,离心后加固定液的方法包被,不易使细胞均匀分布于板上。我们通过实践,摸索出一种新的细胞培养包被法,现介绍如下:

原位分子杂交中载玻片包被法的改良

随着生物科学技术的发展,核酸分子原位杂交技术在各形态学研究领域得到了广泛的应用,成为续组织化学和免疫组织化学之后一项十分重要的技术手段,为进一步在分子水平上研究正常及病理组织内特定基因的变化提供了可能.原位分子杂交大多是在载玻片上进行的,由于实验时程长,中途又需经多种缓冲液的洗涤、孵育,载玻片处理不当,很易引起组织切片在实验不同时期脱落,造成不必要的人力、物力损失,因此我们摸索并改进了几种载玻片的包被方法.1 材料和方法 (1)载玻片包被前的处理 截玻片经洗涤液浸泡过夜,流水冲洗后,1mol/L HCl浸泡1～3h或泡酸4～8h,流水冲洗。

甲型肝炎IgM检测的快速包被法

本文对100例阳性标本和100例阴性标本,按常规法(包被18小时以上)和快速包被法(包被2.5小时)进行抗 HAV—IgM 检测,结果报告如下:1 材料与方法1.1

超导体包被免疫荧光试纸法同时测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮适用性研究

为了能同时快速测定玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)两种毒素,采用基于超导体包被的免疫荧光快速定量检测技术,检测了多个玉米样品,结合加标回收率、稳定性、检出限、精密度等指标,并与液相色谱法的检测结果进行比较分析,评估方法的适用性。结果表明,超导体包被的免疫荧光试纸法检测DON含量在100~2500μg/kg,检测ZEN含量在5~200μg/kg的范围内线性良好。DON在500~2000μg/kg添加水平范围内,回收率为103.72%~108.17%,ZEN在50~150μg/kg添加水平范围内,回收率为97.81%~111.27%。该方法于液相色谱法检测结果对比,DON相对偏差在3.72%~8.17%,ZEN相对偏差在2.19%~11.27%,均低于液相色谱法允许偏差23%和15%,超导体包被的免疫荧光试纸法是一种有效、实用、快速、定量的分析方法,能满足同时检测玉米中DON和ZEN的要求。

基于超导体包被的免疫荧光快检试纸法同时测定玉米中3种毒素的适用性研究

应用基于超导体包被的免疫荧光快速定量检测技术,建立了一种AFB1-ZEN-DON三合一联检卡法,可同时快速测定玉米中的黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、呕吐毒素(DON)三种常见真菌毒素。对质控样准确度、加标回收率、检测限、定量限进行测定,检测多个玉米样品并与液相色谱法的检测结果进行对比,评估方法的适用性。结果表明,AFB1-ZEN-DON三合一联检卡检测AFB1含量在0.5~30μg/kg,ZEN含量在5~200μg/kg,DON含量在100~2 500μg/kg的范围内线性良好。AFB1在5~20μg/kg加标量范围时,回收率为97.62%~99.37%,ZEN在50~150μg/kg加标量范围时,回收率为98.03%~104.07%, DON在500~2000μg/kg加标量范围时,回收率为102.49%~108.53%。与液相色谱法相比,使用该方法检测AFB1相对偏差在–2.84%~11.91%,ZEN相对偏差在–3.43%~18.12%,DON相对偏差在1.83%~12.91%,均在液相色谱法允许偏差20%、15%和23%之内。该方法检测AFB1检测限为0.41μg/kg,定量限为1.12μg/kg;ZEN检测限为3.22μg/kg,定量限为9.15μg/kg;DON检测限为35.42μg/kg,定量限为100.84μg/kg。通过研究证明,AFB1-ZEN-DON三合一联检卡是一种有效、准确、快速的方法,能满足同时检测玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的要求。

抗体包被免疫磁珠分离CD4+T淋巴细胞亚群的方法学研究和初步应用

目的 应用抗体包被免疫磁珠分离CD4 +T淋巴细胞亚群,并检测其效果。方法 运用直接包被法制备免疫磁珠,并以流式细胞仪分析。结果 CD4 +T淋巴细胞亚群分离率>95 %。结论 用直接包被法制备的免疫磁珠具有较好的分离CD4 +T淋巴细胞亚群效果。

ELISA抗原的“干包被”方法试验

酶联免疫吸附试验(ELISA)已成为一种公认的敏感、特异、快速的定量诊断方法,并在许多疫病诊断中得到广泛应用。但ELISA中固相载体<聚苯乙烯板孔)对抗原(或抗体)的吸附性不一致,各种蛋白对固相载体的吸附性也不一致,尤其在吸附时间较短时,这种不一致性更为明显。因此,在优化试验条件的同时。

预包被微孔板式微生物法测定饮料中维生素B_(12)的方法研究

目的:针对目前国标法未涉及微生物法测定饮料中维生素B_(12)的情况,通过验证预包被微孔板式微生物法测定饮料中维生素B_(12)的可行性和可靠性,为实验室开展该项目和创立新方法提供有力支持。方法:利用德氏乳杆菌生长依赖维生素B_(12)的特性,根据德氏乳杆菌生长状况与维生素B_(12)含量呈正相关关系,通过测定样品吸光度值与标准曲线进行比对得出维生素B_(12)的含量。结果:此方法操作简便、线性良好,R^(2)可达0.998 3,回收率在95.5%~104.6%,重复实验10次,品牌1、2的RSD值分别为1.367%和0.597%,试剂盒质量稳定性较好。结论:此方法适用于饮料中维生素B_(12)的测定,为实验室开展该项目和新方法的研究奠定了基础。

酶联反应板包被链霉亲合素的优化方法

目的对链霉亲合素(streptavidin,SA)预包被酶联反应板的优化方法进行研究,比较干法、湿法包被的优越性。方法通过对包被缓冲液、SA浓度、17种市售反应板的比较试验,得出SA包被的较优条件。结果选择洁特高亲和力板,采用碳酸缓冲液干法包被,37℃温育16 h至全干,达最佳包被效果,此时SA浓度为2μg/ml。干法包被的孔间差2.95%,批间差7.37%,37℃保存7 d结合生物素的效果无显著改变。生物素结合量为每孔1 ng,是国产SA预包被反应板的5倍。结论用干法预包被SA优于传统的湿法包被,效果等同甚至超过现有进口SA预包被板。

游离甲状腺素化学发光免疫分析方法的建立

目的采用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,使用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶化学发光体系作为检测体系,建立测定血清中游离甲状腺素的化学发光免疫分析方法。方法利用竞争法建立游离甲状腺素的检测体系,分别对该体系进行分析性能评估、2016年度内分泌室间质评,并与进口全自动发光试剂盒检测结果进行一致性检验。结果在4~64pmol/L的校准曲线范围内相关系数0.9995,最低检出限为0.54pmol/L,批内和批间精密度均小于7.0%,稳定性结果良好,不影响检测结果。2016年全国室间质评测定结果均在允许范围内,与进口西门子发光试剂盒有很好的临床符合性,两种试剂盒的样本测值差异不具有统计学意义。结论本方法利用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,在节约包被原料的同时改善了精密度且提高了灵敏度,最后通过临床血样的一致性评价,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值。

生物素—链霉亲和素免疫学测定地高辛的研究

方法为竞争酶联免疫吸附方法，待测物质为血清中地高辛，采用国产链霉素和素直接包被塑料板孔，生物素标记地高辛抗体。其测定灵敏度为0．0964μg/L,最低检测限为0．225μg/L,测定三份低、中、高浓度的血清标本，批内变异系数分别为8．9％、5．9％和2．4％；批间变异系数分别为15．8％，10．1％和9．2％，测定回收率在89．1％－107．22％之间，此法与FPIA方法相关良好（r=0.9488).

共价结合和物理吸附制备固相抗体在RIA技术应用中的对比分析

目的:探讨异硫氰酸荧光素(FITC)-抗FITC磁性微粒子系统与试管固相包被系统制备固相抗体在RIA应用中的方法学技术参数。方法:以FITC标记抗体,抗FITC抗体共价结合磁性微粒子为分离剂,与试管固相包被法,用相同的校准品、125I标记物通过检测FT3、sTSH进行技术研究及样本对比分析。结果:FT3两种方法的灵敏度和精密度分别为:0.18pmol/L、0.43pmol/L,批内变异(n=10):8.96%、16.26%,批间变异(n=10):15.26%、18.83%。sTSH两种方法的灵敏度和精密度分别为:0.06μIU/ml、0.04μIU/ml,批内变异(n=10):7.6%、6.92%,批间变异(n=10):8.55%、14.23%。FT3磁性微粒子法测值与PR法测值r=0.9825,FT3试管固相包被法测值与PR法测值r=0.9102;sTSH磁性微粒子法测值与试管固相包被法测值r=0.9987。结论:FITC磁性微粒子系统应用于FT3、sTSH检测,降低反应时间,共价结合提高均一性。

3种登革热抗原检测方法的比较

目的比较3种检测方法——免疫胶体金包被法、ELISA检测法及PCR核酸检测法,测定登革热抗原的敏感性、特异性及其3种方法的优缺点。方法用免疫胶体金包被法和ELISA检测法及PCR核酸检测法,对来源于医院临床诊断的疑似登革热病例的血清进行抗原检测。结果 100份临床诊断疑似登革热病例的血清经过免疫胶体金包被法检测为阳性者再次用ELISA检测法及PCR核酸检测法测定抗原,检测后的阳性结果准确率均为100%,而100份免疫胶体金包被法检测为阴性的血清,用ELISA检测法及PCR核酸检测法测定抗原,结果出现了假阴性。结论通过比较免疫胶体金包被法、ELISA检测法及PCR核酸检测法检测登革热抗原,使用ELISA检测法及PCR核酸检测法测定登革热抗原的敏感性较强,准确度很高并具有可排除干扰因素的优点。