改良化学去细胞同种异体神经制备方法的实验研究

[目的]改进去细胞异体神经化学萃取制备方法,制备出细胞及髓鞘去除完全、神经机构保存完好的去细胞异体神经移植物。[方法]SD大鼠14只,取双侧坐骨神经(共28根),分3组进行化学萃取去细胞处理:Son-dell法组(10根)、改良法组(10根)和对照组(8根)。Sondell法组所用萃取剂为Triton X-100和脱氧胆酸钠;改良法组所用萃取剂为Triton X-200、SB-10和SB-16;对照组未进行化学处理。处理后神经行HE染色、快蓝染色、基底膜素免疫组化染色及环境扫描电镜观察,并从去细胞程度、髓鞘染色分级和结构完整性三方面综合评价。[结果]在去细胞异体神经物理性状方面,改良法制备的去细胞异体神经韧性弹性略好于Sondell法;HE染色表明,2种方法的去细胞效果均较好,但改良法对神经结构的破坏较小;快蓝染色、基底膜素免疫组化染色、环境扫描电镜结果均表明,改良法在对髓鞘的去除、基底膜素的保留及神经结构的保存方面均优于Sondell法;综合质量评分结果表明,2种方法在去细胞效果方面相似(P1>0.05),髓鞘去除及神经结构的保存方面改良法优于Sondell法(P2、P3<0.05),综合去细胞程度、髓鞘染色分级和结构完整性3方面,改良法制备的去细胞异体神经质量优于Sondell法(P4<0.05)。[结论]综合运用萃取剂Triton X-200、SB-10和SB-16的化学萃取方法,是一种较为理想的去细胞异体神经制备方法,能够制备出免疫物质清除完全、神经结构较好保存的去细胞异体神经移植物,为自体神经移植找到了较好的替代解决方法。

化学去细胞同种异体神经制备的改良及桥接周围神经缺损效果

目的:改良去细胞异体神经的制备方法,研制出一种理想的自体神经移植替代物.方法:将用Sondell法(Triton X-100、脱氧胆酸钠)和改良法[Triton X-200,sulfobetaine-10(SB-10),sulfobetaine-16(SB-16)]两种方法制备的去细胞异体神经用HE染色、髓鞘染色、免疫组化染色、扫描电镜检查等进行组织学评价.然后将制备的神经桥接大鼠坐骨神经缺损,从坐骨神经指数、神经电生理、运动终板染色等方面评价神经移植后的再生效果.结果:改良法制备的神经细胞及髓鞘去除彻底、结构保存完好;移植后神经再生良好,优于Son-dell法制备的神经,达到了与自体神经移植相当的再生效果.结论:综合运用萃取剂Triton X-200,SB-10和SB-16的改良化学萃取方法是一种较为理想的去细胞异体神经制备方法,其制备的异体神经移植物可望替代自体神经移植.

化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究

目的 :探索犬去细胞神经的最佳储存方法。方法 :采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经12个月 ,进行细菌学检查、一般组织学观察、免疫组化染色、透射电镜观察。结果 :储存过程中不会发生细菌污染 ,储存去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性保持良好 ;其基本结构、神经基底膜及许旺细胞基底板层被保留 ;仍然保持为没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论 :真空封装辐照灭菌法可有效储存去细胞神经 1年。

去细胞同种异体神经一期修复治疗毁损性断指再植指神经缺损的临床研究

目的:研究在毁损性断指再植指神经缺损的治疗中应用去细胞同种异体神经一期修复的作用。方法:择取2020年1月—2023年1月茂名市人民医院收治的20例毁损性断指再植指神经缺损病例,以随机数字表法为依据将其分为对照组和观察组,每组10例。对照组实施神经松解缝合或自体腓肠神经移植,观察组实施去细胞同种异体神经一期修复,通过门诊复查、上门随访、电话随访三种途径收集患者感觉功能恢复情况数据,随访时间6个月以上,同时观察两组临床疗效、不良反应发生情况。结果:观察组总有效率略高于对照组,但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组感觉功能恢复的总优良率略高于对照组,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。两组均未出现感染及排斥等不良反应,相关差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在毁损性断指再植指神经缺损的治疗中,应用去细胞同种异体神经一期修复的效果确切,而且安全性良好,临床价值显著。

简阳地区去细胞同种异体神经修复周围神经损伤(缺损)的临床疗效探析

探讨去细胞同种异体神经修复周围神经损伤的临床效果。方法 选择简阳地区周围神经损伤患者为对象,筛选为2021年6月-2023年6月简阳市人民医院收治的周围神经损伤患者,纳入其中30例进行分析。采用去细胞同种异体神经修复患者周围神经损伤。评价疗效、肌力、并发症等各项指标,SPSS分析疗效和安全性。结果 30例患者中治疗效果优、良、中、差分别为16、11、2、1例,总优良率为90.00%(27/30),处于较高水平。患者治疗后BMRC评分系统中感觉、运动功能恢复≥M3的例数分别为24例、22例,分别占比80.00%、73.33%。30例患者中均未出现免疫排斥、过敏反应,1例浅表感染换药后改善,安全性较高。结论 去细胞同种异体神经修复周围神经损伤效果突出,可促进患者肌力功能恢复,安全可靠。

犬化学去细胞神经同种异体移植的早期观察

目的 :以化学去细胞同种异体神经 ,移植修复犬粗大神经的长段缺损 ,观察早期功能恢复及神经再生。方法 :去细胞神经移植组和自体神经移植组各 3犬 ,分别桥接坐骨神经 5 .0cm缺损。术后 3个月观察其运动功能及神经再生。结果 :实验组和对照组在术后功能恢复 ;移植段内新生神经纤维、新生血管及许旺细胞 ;吻合口远端有髓神经纤维等方面非常相似。结论 :化学去细胞神经作为同种异体神经移植物 ,在修复粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收 。

化学去细胞神经同种异体移植后近期运动功能的恢复(英文)

目的:研究去细胞同种异体神经移植修复大型哺乳类动物粗大和长段周围神经缺损的效果。方法:15只犬分成去细胞神经同种异体移植组6只、自体神经移植组6只、新鲜神经同种异体移植组3只。右侧坐骨神经主干造成5.0cm长缺损,分别以上述3种神经移植物桥接修复。术后6个月进行步态分析。结果:同种异体移植组和自体神经移植组功能恢复一般情况相似,正常组、同种异体移植组及自体神经移植组犬距小腿关节角度平均极大值分别为59.0°,58.0°和61.9°,平均极小值分别为16.4°,7.6°和8.4°。新鲜神经同种异体移植组无任何恢复;同种异体移植组和自体神经移植组的右后肢运动及步态周期非常相似,距小腿关节跖屈及背伸肌群的肌力均有一定程度的恢复,但不及正常犬。结论:化学去细胞神经同种异体移植修复犬坐骨神经长段缺损,在术后6个月近期运动功能恢复与自体神经移植相似。

人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究(英文)

背景:研究表明:应用化学消化剂处理同种异体神经可以有效地清除细胞、髓鞘而不出现宿主免疫排斥反应,但目前这种方法仅在小动物及低等哺乳类实验中取得成功,离临床应用尚有差距。目的:清除人类周围神经中的细胞和髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经移植物。设计:非随机非对照实验研究。地点和对象:实验在解放军第三○四医院骨科完成,对象为急性脑外伤死亡者,男,26岁,体质量75kg,死者家属同意遗体捐献。干预:切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经,以TritonX-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜;免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层;行半薄切片及超薄切片透射电镜检查,观察超微结构。主要观察指标:去细胞神经的物理形状,组织学观察和超微结构。结果:去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留;许旺细胞基底板层保留完好;去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论:TritonX-100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经;该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了许旺细胞基底板层及其主要?

化学法制备猕猴去细胞同种异体神经支架

目的:应用化学萃取法制备的同种异体神经移植物在小动物及低等哺乳类动物实验中取得良好的效果,但在萃取猕猴粗大、长段周围神经方面尚未形成标准化程序。目的:研究猕猴化学去细胞同种异体神经制备方法,以期获得低免疫反应的同种异体神经移植物。设计、时间及地点:观察实验,于2003-01/09在中山大学动物实验中心完成。材料:取2.5岁,3.5kg左右,雄性健康猕猴2只,由广州九佛动物研究中心提供。方法:取4段长5cm,直径3.5～4.0mm的坐骨神经,以4%triton-100和4%脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行萃取,萃取神经及未萃取神经于中段取材,行苏木精-伊红染色,纤维素染色,砂罗铬花青染色,S-100免疫组织化学染色,在扫描电镜及透射电镜下观察超微结构。主要观察指标:神经的组织学及形态学观察。结果:萃取2次后的去细胞神经具有良好的黏性和弹性,细胞和髓鞘被彻底清除,神经纤维支架被保留,成为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的基底膜管架结构。而萃取1次不能完全去除抗原成分,萃取3次则破坏神经纤维支架。结论:应用4%triton-100及4%脱氧胆酸钠萃取2次,可去除猕猴长段、粗大周围神经中的细胞和髓鞘而保留神经的基底膜管和纤维支架结构。

化学去细胞神经同种异体移植后近期感觉及运动传导功能的神经电生理观察(英文)

目的:以化学去细胞同种异体坐骨神经移植修复犬坐骨神经的粗大和长段缺损,观察其近期神经电生理恢复。方法:12犬随机分成去细胞神经移植组(实验组)和自体神经移植组(对照组)各6犬。右侧坐骨神经造成5.0cm长缺损,以两种神经移植物桥接修复。术后6个月行神经电生理观察,包括小腿三头肌运动诱发电位、神经移植段运动传导速度、感觉诱发电位等。结果:①方波(1.0～2.0mA,0.1ms,1.0Hz)刺激移植段近侧神经,均在小腿三头肌上记录到运动诱发电位曲线。②神经移植段运动传导速度,实验组平均为47.2m/s,对照组为60.9m/s,正常值为122.0m/s。③方波(5.0～10.0mA,0.2ms,1.9Hz)刺激胫神经远端,均在颅顶部记录到感觉诱发电位曲线;两组动物的感觉恢复程度相似,但均不及正常侧。结论:化学去细胞神经同种异体移植修复犬坐骨神经长段缺损,术后6个月近期感觉及运动传导功能恢复与自体神经移植相似。

冻融联合优化化学法制备粗大去细胞同种异体神经

背景:异体神经移植修复神经缺损需要面对和解决的是宿主免疫排斥反应问题。因此,如何避免、减轻免疫排斥反应是同种异体神经移植获得成功的关键因素。目的:探索新的异体神经预处理方法,清除犬周围神经中的许旺细胞和髓鞘,保留完整的基底膜,建立粗大异体神经移植物的预处理方法,获得去细胞异体神经移植物。方法:取健康成年杂种犬游离双侧坐骨神经,以冻融联合优化化学法对神经进行预处理,光、电镜观察其结构特征,组织学染色及Western blot分析其成分。结果与结论:预处理后的去细胞神经的延展性和神经外膜的弹韧性良好,许旺细胞和髓鞘被彻底清除,基底膜保留完整,去细胞神经为一没有细胞、髓鞘及其碎片的空的神经基膜管。结果表明该方法有效的清除了周围神经中主要抗原成分许旺细胞及髓鞘,并且保留了促神经再生的重要成分基底膜,可作为制备组织工程化神经较理想的方法。

化学去细胞神经同种异体移植的初步临床应用

目的 评价去细胞同种异体神经移植修复人体长段周围神经缺损的效果。报告1例化学去细胞同种异体神经成功修复长段神经缺损的体会。方法 对3例正中神经损伤，1例骨间背侧神经以及1例正中神经和桡神经损伤的患者应用去细胞同种异体神经移植，修复神经缺损，术后定期对患者进行感觉、运动功能检查，并行肌电图检查。结果 1名患者术后9个月感觉、运动功能恢复。结论 化学去细胞神经同种异体移植修复人体周围神经缺损，能够恢复神经功能。避免了取自体神经的弊端，在临床上是可行的。

化学去细胞同种异体神经的研究进展

周围神经缺损的修复以自体神经移植效果最佳。多年来，医学界不断寻找能替代自体神经的生物材料。Fawcett与Keynes认为理想的神经移植体应具备以下特征：（1）无免疫抗原性；（2）能较快地获得血运；（3）再生轴突能长入并通过该移植体到达远端部位；（4）通过移植体的轴突能成熟到具有正常的直径、髓鞘化和传导动作电位；（5）移植体内再生轴突能准确到达靶器官。与其它移植材料相比，化学去细胞神经除具备上述特征外，还具有与正常神经相似的特性，显示了良好的临床应用前景。

化学去细胞异体神经移植修复鼠全面神经的实验研究

目的利用具有"一主干多分支"特征的化学去细胞同种异体神经(CEAN)修复大鼠面神经缺损并评价修复效果。方法取成年SD大鼠双侧面神经进行去细胞同种异体面神经制备和自体面神经冻融处理并进行结构评价。取成年雄性SD大鼠30只,制备大鼠左侧面神经10 mm缺损模型,随机分成3组(n=10),分别为采用自体神经移植组(A组)、去细胞同种异体面神经移植(CEANA)组(B组)和自体神经液氮冷冻组(C组),术后行大体观察和组织学观察。结果利用化学法可制备出保留天然成分和空间结构的具有"一干多支"特征的CEAN。术后12周,A组、B组有髓神经纤维总数均优于C组(P<0.05),A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论保留天然成分和空间结构的具有"一干多支"特征的CEANA可用于修复大鼠全面神经缺损的治疗,具有同自体神经移植相似的修复效果。

以化学去细胞法处理同种异体神经与周围静脉伴行修复面神经缺损

背景:有研究表明化学去细胞法处理的同种异体神经修复面神经缺损可以取得较好的修复效果。目的:在化学去细胞法处理同种异体神经的基础上探索一种修复面神经缺损更有效的修复方式。方法:将新西兰大白兔随机分为2组,实验组制备面神经颊支缺损动物模型,采用经化学去细胞的同种异体腓肠神经进行移植,且与伴行静脉行外膜缝合;对照组在同样位置的远近端分别切断面神经,但不破坏被切断神经与周围组织的正常解剖关系,再切断处行外膜缝合桥接。结果与结论:修复后3个月两组兔均存活,面部表情基本对称,胡须活动正常,神经移植处未见明显瘢痕及神经瘤形成。电镜观察结果显示,实验组与对照组右侧面神经颊支传导速度,移植体远端吻合口附近5.0mm段有髓神经纤维数量,靶肌肉运动终板计数均差异无显著性意义(P>0.05)。结果证实,化学去细胞同种异体神经与周围静脉伴行修复家兔面神经缺损的方法可以达到与自体面神经原位移植相似的修复效果。

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的观察种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物,桥接大鼠坐骨神经缺损后的神经再生。方法应用酶反复消化法与差速贴壁法体外分离培养乳鼠施万细胞;显微注射法将施万细胞种植到脱细胞同种异体神经移植物内;再应用种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经10 mm缺损。光镜、透射电镜和扫描电镜观察再生神经的形态结构、有髓神经纤维数量、平均髓鞘厚度并进行统计学分析。结果光、电镜观察到实验组(SCs+ARSN)的施万细胞在再生神经纤维中互相连结纵行排列成类似Büngner带样细胞链,对照组(ARSN)未见到施万细胞的链状排列。实验组再生有髓神经纤维的髓鞘厚度较对照组均匀且较厚,有髓神经纤维数量和平均髓鞘厚度明显多于对照组(P<0.05)。结论种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物对缺损的坐骨神经再生有更加有效的促进作用。

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。