前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法。该方法测量范围为1.5～80μg/L,灵敏度为0.12μg/L,批内变异<5%,批间变异<15%。回收率为83.8%～118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999。本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97。

游离前列腺特异性抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

采用双抗体夹心法建立了定量测定血清游离前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法,其中,1株抗总前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为包被抗体,另1株抗游离前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为标记抗体。总测量范围为0.2^10 ng/mL,灵敏度为0.01 ng/mL,批内变异〈10%,批间变异〈20%。本方法与Monobind游离前列腺特异性抗原化学发光测定试剂盒比对的相关方程为y=0.72x-0.22,相关系数r=0.90。

化学发光免疫分析方法与应用进展

化学发光免疫分析方法具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、设备简单等特点,在环境、临床、食品、药物检测等领域得到了广泛应用。在实际应用中,常常需要对大量复杂样品或低丰度分析物样品进行测定。而经典商品化的免疫分析方法所需时间长、样品消耗多、成本高,不能满足上述要求。因而建立快速、高通量、高灵敏和低成本的免疫检测方法已成为化学发光免疫分析方法的研究热点和发展趋势。本文简要总结近5年来化学发光免疫分析方法的研究进展及其应用,并展望其发展方向。

化学发光免疫分析方法在食品安全检测中的研究进展

化学发光免疫分析方法作为一项具有高特异性和高灵敏度的免疫分析方法,经过近几十年的发展,目前已在食品安全检测领域得到了良好的应用。本文根据不同化学发光免疫分析方法所选择标记物的不同,将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析三个类别,并对各方法常用的化学发光标记物及分析方法原理进行介绍。同时,综述了化学发光免疫分析方法在农兽药残留、生物毒素、违禁添加物及微生物检测方面的应用进展情况。随着化学发光免疫分析方法在新型化学发光标记物及化学发光增敏体系方面取得进一步的研究进展,其在食品安全检测领域必将得到更为广泛的应用。

β-人绒毛膜促性腺激素光激化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）浓度的光激化学发光免疫分析方法。方法采用2株针对不同抗原表位的抗β-HCG抗体,其中一株抗体用来包被发光微粒,另一株抗体标记生物素,以双抗体夹心法检测人血清中的β-HCG浓度,并与Beckman-Coulter公司试剂（化学发光法）进行比较。结果发光微粒浓度为100μg/mL、生物素标记抗体浓度为7μg/mL时,检测范围为0~1 000 mIU/mL,灵敏度为0.16 mIU/mL,平均回收率为100.3%,批内变异系数（CV）为0.80%~3.99%,批间CV为2.25%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率低,稳定性较好,与化学发光法的符合率好（r=0.99）。结论光激化学发光免疫分析方法测定β-HCG具有较高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床测定。

化学发光免疫分析方法的应用研究进展

化学发光免疫分析方法因其灵敏度高、特异性好、分析速度快、操作简便等优势,在临床诊断、食品检测、环境监测等领域得到了广泛应用。建立高灵敏、高特异、高通量的化学发光免疫分析方法成为近年来的研究热点和发展趋势。本文对化学发光免疫分析自2011年以来新方法及联用技术进行了综述,并对其在临床诊断及食品安全等领域的应用进行了介绍,最后对该领域的研究前景进行了展望。

谷物中玉米赤霉烯酮化学发光免疫分析方法的建立

开发了一种管式磁微粒化学发光免疫分析法来测定谷物中玉米赤霉烯酮(ZEA).使待测样品中的ZEA、辣根过氧化物酶标记的ZEA(HRP-ZEA)与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗ZEA单克隆抗体发生竞争性免疫反应,以抗FITC抗体包被的磁微粒(MPS)作为固相抗体及分离相.对免疫反应的条件及各项参数如:稀释度、温育时间、磁微粒及发光底物的体积等进行了测定和优化.在最优条件下,该法的线性范围是0.5~50 ng·mL^(-1),检测灵敏度为0.1 ng·mL^(-1);批内变异和批间变异均小于15%,回收率在89.2%~105.2%之间.通过本法对40例谷物样品检测,同时与商品化试剂盒进行对比检测,结果无明显差异.

血清真胰岛素化学发光免疫分析方法学研究

建立一种高灵敏度真胰岛素临床常规检测方法.采用两株特异的抗胰岛素单抗体,分别抗胰岛素肽链上两个不同的抗原决定簇,用一株制备固相抗体,另一株标记碱性磷酸酶C,以金刚烷衍生物为发光底物建立化学发光免疫分析(CLIA)法.结果表明本方法灵敏度为0.06μIU/mL,标准曲线量程为1.0～150μIU/mL,批内和批间CV分别为5.0%、7.8%,平均回收率为94.4%.分别测定了男、女成人空腹血清各100份,男性实测范围0.52～11.23μIU/mL,平均值为3.86μIU/mL,女性实测范围为0.75～10.66μIU/mL,平均值为3.62μIU/mL.真胰岛素CLIA法简便快速,能真实反应血清胰岛素的水平,对临床糖尿病的诊疗和病理生理研究具有实用价值.

化学发光免疫分析方法的研究及应用

本文根据各化学发光免疫分析方法所使用标记物质的不同,将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法,并对各方法经典标记物质及分析方法原理进行了分析。同时,介绍了化学发光免疫分析方法在医学检验、食品安全及环境科学方面的应用进展情况。

人β-hCG化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清hCG浓度的双抗体夹心化学发光免疫分析方法。方法采用2种高特异性的抗β-hCC单克隆抗体，以一种包被微孔板制成固相抗体，另一种标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，采用双抗体夹心法检测人血清hCG浓度，并与进口试剂进行比较。结果以5μg／ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：10000稀释，在室温条件下检测，可测范围为5—540mIU／ml，灵敏度为0．143mIU／ml，批内、批间平均变异系数分别为5．28％和7．05％，平均回收率为98．77％，范围为92．3％．108．6％，与TSH、FSH和LH的交叉反应率均小于0．01％。与国外同类试剂有良好的相关性。结论该方法有较高的灵敏度、精密性和准确性。

C-肽化学发光免疫分析方法学研究

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：5000稀释，在C-肽浓度0．1～15ng／ml范围内线性良好，线性方程为y=0．9575x-0．0869，相关系数0．99；灵敏度为0．01ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．8％、8．4％；平均回收率98．4％，范围91．5％～105．0％。结论：文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法，首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定。线性好，灵敏度较常规高出一个数量级，准确度和精密性高，能够满足一般临床诊断和科研的应用。

人心肌肌钙蛋白Ⅰ酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法。方法采用两株抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体,一株包被聚苯乙烯化学发光板,一株标记辣根过氧化物酶,采用辣根过氧化物酶/鲁米诺/过硼酸钠体系,建立了测定人血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的酶促化学发光免疫分析方法,并进行了方法学鉴定。用该法测定80例正常人血清,确定正常参考值范围;测定临床病理样品27例,与Beckman全自动化学发光试剂测定值进行相关性分析。结果本方法测定范围0.3～100μg/L,分析灵敏度0.16μg/L;37℃反应时间30min;回收率76.8%～111.1%;高浓度cTnI血清样品经系列倍比稀释后测定,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数0.999;批内、批间变异系数分别为3.90%～6.71%,7.66%～10.34%;与心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白C(TnC)、骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(sKTnI)、骨骼肌肌钙蛋白T(sKTnT)、人心肌脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、人心肌肌酸激酶(CK-MB)、人心肌肌红蛋白、C-反应蛋白(CRP)均无交叉;确定临床正常参考值小于0.304μg/L;与Beckman全自动化学发光试剂比较,两者测定值线性相关系数为0.925。结论该方法反应时间短、特异性强、重复性好,具有应用及推广价值。

人心肌肌钙蛋白I化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立检测人心肌肌钙蛋白I(cTnI)化学发光免疫分析方法。方法 用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体 ,经DEAE 2 3层析和 (NH4) 2 SO4沉淀纯化后 ,用碳化二亚胺 (EDC)法标记辣根过氧化物酶 ,SephadexG 2 0 0纯化。优化鲁米诺 H2 O2 肉桂酸发光体系 ,建立了cTnI化学发光免疫分析法。用该法检测 138例正常人及病人血清标本 ,确定正常值参考范围 ,并与ELISA法比较。结果 所得抗体的滴度为 1∶80 0 0。优化后的发光体系为 :鲁米诺 (4 .5mmol/L) ,H2 O2 (7.5mmol/L) ,四苯硼钠 (0 .8mmol/L) ,肉桂酸 (0 .4mmol/L) ,比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了 1.19和 1.0 5倍。本法检测灵敏度为0 .2ng/ml,线性范围为 0 .4～ 5 0ng/ml,批内CV平均 9.0 % ,批间CV平均 11.8% ,回收率为 10 4 .2 %。Hb浓度在 0～ 5 0nmol/L ,T Bil在 0～ 15 μmol/L ,TG在 0～ 2 .0mmol/L对测定结果无影响。与ELISA比较 ,两法结果一致 (P >0 0 5 ) ,相关系数r=0 .985 2(P <0 .0 1)。用BioCheck标准品为校正物 ,确定临床诊断参考范围为 <2 .12ng/ml,诊断符合率为 96 .2 %。结论 建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验。

人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法的初步建立及应用

目的:建立人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法:使用CY-FRA21-1定量测定试剂盒(化学发光法)检测308例临床血清标本,并与CYFRA21-1电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果:灵敏度0.04μg/L,线性范围(1.5～100)μg/L,与NSE及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na_2对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90%～110%,分析内和分析间变异系数均<10.0%。该方法正常参考值为(0～3.4)μg/L(95%可信限)。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96.65%。结论:该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。

生物检测技术中的化学发光免疫分析方法研究

化学发光免疫分析（CLIA）法具有灵敏度高，特异性强，线性范围宽，成本底，操作简单，应用广泛，检测时间短，易于实现自动化，且无放射性污染等优点，成为生物、医学、环境、食品等检测的重要分析手段，得到广泛应用。

人血清CA15-3化学发光免疫分析方法的建立及应用

目的：建立人血清CA15-3化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法：使用CA15-3定量测定试剂盒（化学发光法）检测1232例，其中754例正常人及478例病人血清标本，并与CA15-3电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果：灵敏度0．032KU／L，线性范围1．2～160KU／L，与CA125及CEA无交叉反应，样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na2对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90％～110％，分析内和分析间变异均〈10．0％。该方法正常参考值为（0～23．08）KU／L（95％可信限）。ECLA测定结果与本法相比，临床总符合率为96．65％。结论：该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强、检测范围宽，有良好的准确性和重复性，完全可以替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。

基于磁颗粒与包被管两种固相载体的化学发光免疫分析方法检测人血清中的AFP含量

检测血清学AFP含量诊断原发性肝癌（HCC）在临床上已被广泛接受，对AFP灵敏、快速、宽范围检测具有重要的临床意义。在免疫分析中，固相载体包被抗体是分离免疫复合物和游离物的常用方法，常规的是使用聚苯乙烯微孔板，为了增大包被面积，使用底部刻有六角星的包被管StartubesTM。后来为了满足包被抗体的量，并实现特异的共价键包被，各种微球，如磁颗粒，因其易分散、易控制和表面修饰的多样化等优点受到广泛关注。

高特异性人血清白蛋白化学发光免疫分析方法的建立

人血清白蛋白（HSA）是人类肝脏功能的重要生物标志物.本研究旨在发展一种具有高度种属特异性和灵敏度的HSA化学发光免疫分析（HSA CLIA）定量检测方法.通过HSA免疫小鼠,制备了6株HSA鼠单克隆抗体;使用间接化学发光检测（Indirect-CLIA）和West blotting检测方法评价单抗对HSA的反应活性;使用免疫组织化学检测（IHC）和West blotting检测方法评价单抗的种属特异性;选择最佳的包被抗体和检测抗体配对;确定HSA-CLIA的定量线性和范围.West bloting和IHC方法中,4F5和5D2抗体反应性最强,且不与小鼠、大鼠、牛、兔、山羊、猴、鸡等常见实验动物血清白蛋白交叉反应.以单抗5D2配合单抗4F5建立的HSA CLIA,线性范围达到122～31 250 pg/mL,可适用于多种样本的HSA定量检测.本研究发展的单克隆抗体和检测方法为HSA的特异性检测提供了重要工具和手段.

人血清生长激素化学发光免疫分析方法的建立

建立链霉亲和素-生物素双抗体夹心化学发光免疫分析法(CLIA)测量人血清生长激素(GH),并进行临床应用检测。以链霉亲和素包被微孔板,生物素化一株GH单克隆抗体(McAb),辣根过氧化物酶标记另一株McAb,校准品与国家标准品进行溯源,建立GH CLIA法,进行性能参数测试,与国外试剂盒比对。结果表明本法线性范围为2.0～150.0μIU/mL,回收率为95.5%,灵敏度0.02μIU/mL,批内、批间CV分别为3.2%～7.2%和3.8%～8.2%,与hPRL、hLH和hTSH叉反应率分别为3.6%、0.05%和0.02%,与hFSH、hCG无交叉反应。本方法与国外同类试剂盒检测187份血清,相关系数为0.9837。37℃,7天热稳定性良好。本方法各项指标均满足临床检测要求,达到国外同类水平,便于临床检验应用。

促黄体生成激素酶促化学发光免疫分析方法的建立

采用双抗体夹心一步检测法和鲁米诺-过氧化氢发光体系建立了血清促黄体生成激素（LH）的酶促化学发光免疫分析方法。结果显示，本方法测量范围为1．5-200IU／L，灵敏度为0．08IU／L，批内变异系数〈9％，批间变异系数〈11％，回收率为96．3％～112．1％，稀释实验测定值与稀释度呈线性相关，相关系数r=0．995。与进口酶促化学发光免疫分析试剂盒测定的临床值进行比较，线性相关方程为y=0．967x＋0．0689，相关系数r=0．975，相关性良好。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。