HIV化学发光免疫诊断试剂盒的研制

目的研制敏感、特异的人类免疫缺陷病毒Ⅰ+Ⅱ型(HIV Ⅰ+Ⅱ)化学发光免疫试剂盒.方法采用碱性磷酶标记重组gp120、gp41和合成肽gp6抗原,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物,采用ELISA双抗原夹心法检测.结果敏感度为0.1 ncu;检测范围为0.1～100 ncu;HIV浓度为0.5、1.2、5.1、19.8 ncu时,批内变异系数3%～8%(n=20),批间变异系数5%～9%(n=20);与anti-HAV、anti-HBV、anti-HCV、anti-HEV无交叉反应;具有良好的稳定性,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度＜10%.结论该试剂盒灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性.

3种β-兴奋剂化学发光酶免疫试剂盒分析检测方法的评价

选取3种市售β-兴奋剂化学发光酶免疫分析检测试剂盒,从线性关系、灵敏度、选择性、检出限、准确度、重复性及变异性等方面进行实验,并经农业部1025号公告—18—2008中高效液相色谱—串联质谱法验证比较,初步建立了一套化学发光酶免疫分析检测试剂盒质量评价方法。结果表明：沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺3种试剂盒在测定范围内线性关系良好,灵敏度分别为0.7、1.8、1.0 ng/mL,检出限分别为0.2、0.1、0.2 ng/mL,猪肝、猪肉和牛肉的回收率在81.9%-115.2%之间,重复性变异系数为3.3%-9.7%,批间变异系数为9.9%-16.5%,交叉反应率均符合产品说明书要求,可以用于猪肝、猪肉、牛肉样品中沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的残留检测。

硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研制及性能评价

目的研制硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法),并对其试剂盒性能进行评价。方法利用竞争抑制法,对原料进行筛选,建立硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒。并分别对本试剂盒的准确性、最低检测限、线性、重复性、特异性、参考范围及样本对比方面进行评价。结果经过筛选,选用反应模式:磁微粒包被羊抗鼠Ig G-鼠抗硫酸去氢表雄酮单克隆抗体-吖啶酯标记DHEAS-BSA;对此方法建立的试剂盒进行方法学评价,最低检测限可达1.84μg/d L,线性在0~1 500μg/d L之间,相关系数r=0.999 8,准确度的回收率为105.38%,重复性均小于8%;建立了健康人参考范围(女性:47.9~407.5μg/d L,男性97.1~522.5μg/d L),与西门子ADVIA Centaur测定结果显著相关,线性方程为y=1.078 13+0.992 16x,相关系数r=0.994 7,2种试剂盒的测定结果具有较高的一致性。结论本研究建立的硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)各项性能均达到了临床检验的要求,为国产化66硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研发奠定了基础,有望用于临床血清硫酸去氢表雄酮的检测。

促黄体生成素定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的临床性能评价

目的对广州市达瑞生物技术股份有限公司的促黄体生成素定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)进行临床应用研究及临床性能评价。方法采用平行、盲法、对照试验设计,用达瑞生物公司试剂盒检测335例样本,以雅培公司的促黄体生成素测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)作为对照试剂盒,罗氏公司的促黄体生成素检测试剂盒(电化学发光法)作为复核试剂盒。操作按各试剂盒说明书进行,对达瑞生物公司试剂盒的符合率和相关性进行计算分析。结果同雅培公司试剂盒比较,达瑞生物公司试剂盒检测血清样品异常符合率为95.8%,正常符合率为95.2%,总符合率为95.4%,Kappa值为0.898(P<0.01)。线性回归方程为Y=0.358+0.961X,两者测定值接近,相关系数为0.988(P<0.01),相关性良好。同血清检测结果相比,血浆检测结果 Kappa值为1.000(P<0.01),线性回归方程为Y=0.120+0.966X,相关系数r值为0.999(P<0.01),相关性良好。特异性样本检测结果均为正常。结论本试剂盒检测性能可以满足临床应用的需要。

恩诺沙星化学发光免疫分析试剂盒的研制

主要研制一种基于鲁米诺-辣根过氧化物酶体系的化学发光免疫分析试剂盒,用于检测食品中的痕量恩诺沙星残留。反应条件优化结果为:最佳包被抗原浓度为0.5ng/mL,最佳抗体稀释倍数为1:2000,药物稀释液为0.01mol/L的PBST溶液,一抗反应时间为30min。研究结果显示:本文研制的试剂盒的回归曲线方程是y=-22842x+172936,检测线性范围是0.024～2.76ng/mL,IC50为0.106ng/mL,对蜂蜜、牛奶、鱼肉和虾肉样本的添加回收率在96%～116%、90%～97%、92%～112%、86%～112%之间,批内和批间变异系数均小于15%,试剂盒在4℃下有效期为180d。

促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制

目的:研制人血清中促甲状腺素(TSH)的化学发光免疫检测试剂盒。方法:采用辣根过氧化物酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体(mAb),与固相包被的抗TSHα亚单位的另一mAb配对,以鲁米诺作为底物,采用两步法建立了双位点夹心法人血清TSH的化学发光免疫定量分析法。结果:该方法灵敏度为0.0788mIU/L,批内CV平均为4.7%,批间CV平均为8.4%,平均回收率为93.05%。该检测与LH、FSH和HCG无交叉反应。部分实验样品的测试结果显示该试剂与国外同类试剂(雅培architect i2000)的测定结果明显相关(r=0.984)。结论:该方法具有较高的灵敏度、重复性和准确度,与其他同类产品相比简便、快捷、成本低,适于临床检测和科研应用。

AOZ化学发光酶联免疫检测试剂盒的研制

以呋喃唑酮代谢物(AOZ)和卵清蛋白(OVA)偶联物为包被抗原,与AOZ样品或标准品竞争呋喃唑酮多克隆抗体,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔抗体(IgG),研制AOZ的化学发光酶联免疫检测试剂盒。以鲁米诺-过氧化氢为发光底物进行化学发光酶联免疫检测。结果表明:试剂盒分析灵敏度为0.005μg/L,比传统的ELISA试剂盒高出一个数量级,拥有更低的检测限,批内变异系数为2.1%～7.9%,批间变异系数为5.2%～9.5%,批内回收率为93%～113%,批间回收率为94%～110%。与呋喃西林代谢物(SEM)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)及呋喃妥因代谢物(AHD)之间无明显交叉反应。此试剂盒可用于水产品中AOZ的检测。

血清叶酸化学发光免疫检测技术及试剂盒的研发

研究建立了一种叶酸化学发光免疫检测技术,并开发成检测试剂盒,能快速、准确检测血清中叶酸的含量。首先用样本处理剂快速将血清中结合态叶酸完全释放,再用高亲和力的叶酸结合蛋白进行检测,建立一种竞争化学发光免疫分析方法。通过对试剂盒中各组分的优化,试剂盒最低检测限为1 ng/mL,线性测量范围为1.5～50 ng/mL,批内及批间变异系数(CV%)均小于10%。稳定性好,37℃加速稳定性能维持10 d, 2℃～8℃能稳定维持为16个月。通过对200份临床血清样本进行检测,试剂盒检测结果与国外著名试剂盒厂家(贝克曼)的相关性系数(R)可达到0.9847。该叶酸检测技术创新地运用了生物素-亲和素反应体系,改变了传统抗原抗体反应存在不均一不稳定等弊端,提高了检测的准确度和灵敏度,并研制出新的样本处理试剂和方法,使血清中叶酸释放更加迅速和完全,提高了试剂盒的准确度并降低了成本。试剂盒的各项性能指标均居于国内领先水平且成本较低,检测量大,可替代国外同类型检测试剂盒。

莱克多巴胺的化学发光免疫测定法试剂盒的研究

本研究通过制备莱克多巴胺（Ractopamine,RAC）高活性单克隆抗体,用辣根过氧化物酶（HRP）标记RAC,以鲁米诺（luminol）为发光底物,建立直接竞争法检测莱克多巴胺。并对包被液、包被条件、包被蛋白浓度、封闭蛋白种类、孵育时间和酶用量等参数进行优化,成功研制出了化学发光检测RAC的试剂盒。该方法的线性检测范围可达到0.1ng/mL—10ng/mL;线性相关系数r=0.998,IC50值为0.6763ng/mL;理论检测限小于0.1ng/mL。批内变异系数为7.62%～8.65%;批间变异系数为8.15%;回收率在85%±15%之间,与克伦特罗等其它β-受体激动剂不发生交叉反应。

食品中磺胺类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

在常规酶联免疫法的基础上,将磺胺类母核与牛血清白蛋白合成免疫抗原后免疫小鼠制得磺胺类单克隆抗体,并进一步优化抗体工作浓度、反应时间等实验参数,建立了一种简便、快速、精确的磺胺类残留一步式化学发光酶联免疫检测方法.结果表明该方法最佳检测范围为1.0～81.0 ng/mL,检测IC50达3.047 ng/mL,对猪肉的最低检测限为0.74 ng/g,可检出国际规定的SAs残留标准底限值以下的残留量.与常规ELISA方法相比,检测限和灵敏度基本一致,但反应时间缩短了60 min.证明采用一步式化学发光酶联免疫检测磺胺类残留可以大幅度缩减检测时间,符合快速检测的要求.

喹诺酮类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

喹诺酮类抗菌药（QNS）又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类较新的合成抗菌药^[1]，该类药物的开发可以追溯到1962年，Lesher从合成抗疟药氯喹中分离出一种副产品-萘啶酸^[2]，喹诺酮类历经40多年的发展，共开发出了4代喹诺酮类药物，共计50多种药物^[3-4]。

卡那霉素单克隆抗体制备以及化学发光免疫检测试剂盒的研制

通过卡那霉素与邻苯二甲酸酐反应,制备出卡那霉素半抗原,通过动物免疫、细胞融合,获得杂交瘤细胞株,再由杂交瘤细胞株分泌得到抗卡那霉素单克隆抗体,从而制备出能够检测牛奶和奶粉样本中卡那霉素药物的化学发光免疫检测试剂盒。试剂盒对奶粉的检测限为0.95g/kg,对牛奶的检测限为0.89g/kg,对牛奶的回收率为80.6%~105.6%,批内、批间相对标准偏差范围均<10%。卡那霉素单克隆抗体与链霉素、双氢链霉素、新霉素的交叉反应率分别为7.1%、9.0%、4.6%。试剂盒至少能够在4℃保存1年。

化学发光免疫试剂盒检测猪肉中呋喃西林代谢物的残留

为了快速检测猪肉中呋喃西林代谢物残留量,试验采用自主研发的以磁性微球为固定相的化学发光免疫试剂盒,并对其方法学进行评价及与高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS法）检测结果进行比较分析。结果表明：采用化学发光免疫试剂盒测定猪肉中呋喃西林代谢物的灵敏度为0.331μg/kg,精密度较好,最低检测限为0.077μg/kg,与呋喃西林原药的交叉反应率为8.9%,与其他类似物的交叉反应率均〈0.1%,平均回收率为92.7%-104.8%,与HPLC-MS/MS法检测样本的阴性和阳性结果一致。说明该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等特点,适用于现场快速检测猪肉中呋喃西林代谢物的残留。

鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价

目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。

促黄体生成素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制

目的 研制人血清中促黄体生成素 (LH)的化学发光免疫检测试剂盒。方法 以LH单克隆抗体作为固相包被 ,LH多克隆抗体与碱性磷酸酶偶联制备酶标抗体 ,以金刚烷胺作为底物 ,采用两步法建立了双位点夹心法人血清LH的化学发光免疫定量分析法。结果 该方法的敏感度为 1mIU/ml,可测范围为 1～ 2 0 0mIU/ml,批内和批间的变异率分别为 6.7%和 7.7% ,回收率在 85 %～1 1 0 %之间。本法与TSH的交叉为 1 .3 % ,与FSH的交叉为0 .0 2 % ,与HCG的交叉为 0 .0 8% ,血清样品测定结果与国外同类试剂的测定结果呈正相关 ,相关系数r=0 .993。结论 该试剂盒有较高的灵敏度 ,重复性和准确度 ,与国外同类试剂有良好的相关性 ,适合用于临床检验。

烟草花叶病毒(TMV)斑点免疫诊断试剂盒的研制

以烟草花叶病毒 (TMV)及其抗体为材料 ,以硝酸纤维素膜 (NCM)为载体 ,根据斑点免疫吸附法 (DIBA)的原理 ,在国内首次研制出斑点免疫诊断试剂盒。研究表明 :以健康汁液预先吸附抗血清以及用 1%H2 O2 处理点样后的NCM ,能有效地排除斑点免疫吸附中非特异性干扰 ;用氯仿处理研磨后的样品和适当提高样品的稀释度能有效去除样品中叶绿素和其它色素的干扰 ,提高灵敏度。制备出的试剂盒具有体积小、重量轻、便于携带等优点 。

雅培化学发光肿瘤项目试剂盒分析性能验证

目的评估AFP、CEA、CA19—9、CA125、CA15-3、TotalPSA、β-HCG七个肿瘤项目使用雅培试剂盒在本实验室雅培i2000SR全自动免疫分析仪上检测分析性能是否能达到厂家声称的分析性能指标。方法：按照WS／T420—2013《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》标准的要求进行精密度、正确度、生物参考区间、可报告范围验证。结果：20例参考个体AFP、CEA、CA19—9、CA125、CA15—3生物参考区间与《全国临床检验操作规程》第4版／雅培试剂说明书一致，TotalPSA、β-HCG生物参考区间与雅培试剂说明书一致。结论：本实验室肿瘤项目使用雅培试剂在雅培i2000SR全自动免疫分析仪上检测分析性能符合要求，厂家声称值可靠，可满足临床检测要求。

两种乙型肝炎表面抗原磁微粒化学发光法检测试剂盒性能比较

目的比较两种乙型肝炎表面抗原(HBsAg)磁微粒化学发光法检测试剂盒的性能,为乙型肝炎的诊断提供依据。方法使用郑州安图生物工程股份有限公司生产的HBsAg确认试剂盒(考核试剂)与已批准上市的同类产品Abbott Ireland Diagnostics Division生产的HBsAg确认试剂盒(对比试剂)同时检测血清及血浆样本380例,分析并比较两种试剂盒检测的性能。结果考核配套试剂检测结果的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%,2种配套试剂具有一致性(Kappa>0.75);考核试剂确认阳性符合率为100%,未确认阳性符合率为0、总符合率为91.58%,2种确认试剂具有一致性(Kappa>0.75)。考核试剂灵敏度为99.43%,特异度为100%,准确度为100%,对比试剂的灵敏度、特异度及准确度均为100%,2种试剂盒诊断效能差异无统计学意义(P>0.05),具有一致性(Kappa>0.75)。结论两种检测试剂盒性能相当,郑州安图生物工程股份有限公司生产的HBsAg确认试剂盒同样具有较高的敏感度、特异度,可满足临床检测的需要。

研制人血清中TSH的化学发光免疫检测试剂盒研究

目的研究研制人血清中TSH的化学发光免疫检测试剂盒。方法选取有辣根过氧化物酶标记的抗TSHp亚单位特异性单克隆抗体（mAb），与抗TSH13亚单位的另一个mAb相配对，使用鲁米诺做底物，采取两步法建立起双位点夹心法来进行研制人血清中TSH的化学发光免疫检测试剂盒。结果这种检测方法具有较好的灵敏度，其中批内的CV平均是4．7％，批问的平均CV是8．4％。本次检测实验与LH、FSH及HCG都没有交叉反应。经过测试部分实验样品，得出该试剂与国外同类试剂测定结果有明显的相关性（r=0．984）。结论实验研究中的检测方法具有较好的灵敏度及准确性，与同类产品相比也相对简便、快捷，花费成本低，在临床检测与科研上值得使用与推广。