活性氧的化学发光测定法

以作者近年来的研究结果为中心 ,综合地介绍过氧化氢 (H2 O2 )、单线态氧 ( 1O2 )、超氧阴离子自由基 ( .O-2 )以及羟自由基 ( .OH)等活性氧化学发光研究的最新动态 .侧重介绍活性氧的鲁米诺、光泽精、甲壳动物荧光素化学发光测定体系 。

人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

磁微粒化学发光分析法检测血清AMH的性能验证

对采用磁微粒化学发光分析法的Wan200+全自动化学发光免疫分析仪检测血清抗缪勒氏管激素(AMH)水平并进行性能验证。方法 根据国际标准化组织(ISO)15189和国家卫生行业标准相关要求,对Wan200+全自动化学发光免疫分析仪检测AMH的准确度、精密度、线性范围、可报告范围和生物参考区间进行验证和评价。结果 Wan200+全自动化学发光免疫分析仪检测血清AMH的准确度参考品1、2分别为-1.00%、3.34%;批内精密度分别为1.85%、0.93%;批间精密度分别为3.55%、1.57%;线性范围为0.01-25 ng/mL;可报告范围实测值与理论值的回收率均落在90%-110%区间;生物参考区间健康成年男性2.33-12.29 ng/mL;健康成年女性18-24、25-29、30-34、35-39、40-44和≥45岁分别为1.15-8.51、1.04-7.19、0.25-4.89、0.27-3.25、0.19-2.91、0.03-2.15 ng/mL。结论 Wan200+全自动化学发光免疫分析仪检测血清AMH的性能参数(准确度、精密度、线性范围、可报告范围和生物参考区间)均符合厂家声明及国家卫生行业标准相关要求,验证通过,能为临床诊治相关疾病提供依据。

MAGLUMI X8全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能验证

【目的】探讨并验证MAGLUMI X8全自动化学发光免疫分析仪检测肿瘤标志物的性能。【方法】对甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原125(CA125)、前列腺特异性抗原(PSA)和游离前列腺特异性抗原(fPSA)进行精密度、正确度、线性范围、参考范围和相关性分析;另外用6西格玛(6σ)质量管理规则评价上述项目的分析性能水平,设计最优室内质控方案。【结果】AFP、CEA、CA125、CA199、PSA和fPSA中重复精密度变异系数(CV)在1.40%~3.98%范围内,中间精密度CV在1.39%~4.98%范围内;相对偏倚在-6.21%~-1.39%范围内,均符合要求;线性范围斜率b在0.9896~1.0243范围内,相关系数r^(2)在0.9954~0.9983范围内,参考范围验证均在厂家标注的参考范围内,符合要求;CA125和PSA项目σ值≥6,AFP、CEA、CA199、fPSA项目σ值≥5。【结论】MAGLUMI X8检测系统的精密度、正确度、线性范围、参考区间和相关分析性能指标均通过相关标准,完全符合医学实验室的性能要求,上述项目分析性能水平均达到优秀,可对临床诊断和预后提供检验依据。

流动注射-化学发光法测定苄青霉素

试验发现在5×10-3mol·L-1氢氧化钠溶液的碱性介质中,由高碘酸钾与鲁米诺之间的氧化还原反应所产生的化学发光的强度因苄青霉素的存在而明显增强,且其增强程度与苄青霉素的浓度在0.01～15.0 mg·L-1范围内呈线性,方法的检出限(3σ)为1.0μg·L-1,基于此并应用了流动注射技术,提出了一种简便而快速的测定苄青霉素的方法。加入1.0 mg·L-1的苄青霉素标准溶液对此方法的精密度做了试验,测得其相对标准偏差(n=11)为1.0%。在3件针剂样品的基础上加入了3种不同浓度的苄青霉素标准溶液,对方法的回收率做了试验,所得结果在97.2%～102.0%之间。

荧光素及聚乙二醇增敏流动注射化学发光法测定甲磺酸酚妥拉明

目的建立流动注射化学发光测定甲磺酸酚妥拉明的新方法。方法利用荧光素及聚乙二醇-200增敏高锰酸钾氧化甲磺酸酚妥拉明化学发光新体系,考察酸的种类及酸度、高锰酸钾、荧光素及聚乙二醇的浓度对该体系的影响。结果荧光素及聚乙二醇-200对该体系的化学发光强度分别增加了11%和14%。该体系的发光强度与甲磺酸酚妥拉明浓度在0.08-10.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,方法的检出限为8.0μg/L。结论本法可用于针剂中甲磺酸酚妥拉明的测定,结果令人满意。

流动注射化学发光法测定药物制剂中的诺氟沙星含量

目的建立药物制剂中诺氟沙星的流动注射化学发光测定法。方法选择氢氧化钠溶液为介质,选择鲁米诺,高碘酸钾为反应剂,采用流动注射化学发光法测定诺氟沙星。结果选择鲁米诺浓度5.0×10-5mol/L,高碘酸钾浓度6.0×10-4mol/L,可在试剂消耗最少的情况下得到最强发光信号。诺氟沙星浓度与化学发光信号范围线性为5.0×10-8～2.0×10-6mol/L,检出限为1.8×10-8mg/L,回收率96.0%～101.5%,相对标准偏差1.59%～2.04%。结论该方法简便快捷、灵敏度高,可用于药物制剂中诺氟沙星的含量检测。

化学发光法测定梅毒抗体的性能验证

目的对美国雅培公司化学发光法测定梅毒螺旋体抗体的临界(Cut-off)值、精密度、灵敏度和特异性等进行验证和评价。方法分别使用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)发布的EP5-A2、EP-17A对其精密度和灵敏度进行评价,使用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)确认试验对其特异性进行评价。结果化学发光法的Cut-off值以0.36最佳,精密度、灵敏度和特异性与厂家数据一致。结论美国雅培公司化学发光法测定梅毒螺旋体抗体的性能符合要求。

化学发光标记免疫测定法检测卵巢上皮癌患者血清CA125水平

目的 评价化学发光标记免疫测定法 (CLIA)在检测卵巢上皮癌者血清CA12 5水平中的价值。方法 应用化学发光标记免疫测定法对 2 0 3例卵巢上皮癌患者进行血清CA12 5的检测 ,其中浆液性癌 72例 ,粘液性癌 3 7例 ,宫内膜样癌 3 8例 ,透明细胞癌 13例 ,未分化癌 2 5例 ,混合性上皮癌 18例。对照组选健康女性共 63 8例。结果 2 0 3例患者中阳性 184例 ,敏感度为 90 .6%,特异性为 94.5 %,准确度为 93 .6%。结论 化学发光标记免疫测定法是目前检测卵巢上皮癌患者的最好方法 ,CA12

化学发光免疫测定技术应用于生化免疫检验中对提高检验结果准确性的意义

目的分析化学发光免疫测定(CLIA)技术应用于生化免疫检验中的效果及对提高检验结果准确性的意义。方法选取2020年1月至2021年10月南昌市第一医院接诊且疑似为甲状腺肿瘤的100例患者作为研究对象,均行CLIA、放射免疫分析法(RIA)生化免疫检验,以病理检查结果为金标准,比较两种方法诊断结果及效能和甲状腺球蛋白(TG)水平及数量。结果100例患者中,病理诊断检出阳性53例,阴性47例;CLIA法检出阳性54例,阴性46例;RIA法检出阳性55例,阴性45例。CLIA特异度、灵敏度、准确度均高于RIA法,差异有统计学意义(P<0.05)。CLIA法检测TG水平高于RIA法,TG数量多于RIA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CLIA法对甲状腺肿瘤患者诊断价值较高,可提高检验准确度,值得临床推广应用。

胰岛素化学发光免疫测定法的建立

目的建立化学发光免疫法测定胰岛素及临床糖尿病患者胰岛素治疗跟踪与稳定性的可行性评估.方法 CLIA采用竞争法.结果该方法的灵敏度为1.24 mIU/L,在2.5～160 mIU/L的范围内线性良好.CLIA测定胰岛素的批内与日间变异系数分别为3.05%,4.61%和4.80%,4.92%.在血红蛋白浓度〈2.4 g/L、总胆红素浓度〈342 μmol/L、甘油三酯〈9.9 mmol/L时的干扰率无临床意义.与放射免疫分析法有较好的相关性（r=0.915 6）.结论 CLIA法测定胰岛素能及时有效地满足糖尿病患者的临床需要,有助于进一步对检测试剂盒的研制.

雌二醇化学发光免疫测定法的建立

目的 建立灵敏度高 ,测定范围宽的检测人血清雌二醇 (E2 )的化学发光免疫分析法 (CLIA)。方法 采用竞争抑制法 ,用碱性磷酸酶标记抗原 ,金刚烷 (CSPD)增敏化学发光体系作为酶底物。结果 敏感度为 2 .0pg/ml;在 10～ 10 0 0pg/ml之间可以准确定量 ;用不同浓度的E2 质控血清测定精密性 ,批内变异 <8% (n =2 0 ) ,批间变异 <10 % (n =2 0 )。与雌醇、雌酮、雌三醇(E3 )的交叉反应 <1% ,与睾酮、可的松等无交叉反应。试剂具有良好的稳定性 ,在 4℃保存 14个月其整体变化幅度 <10 %。与BeckmanAccessTm及其配套试剂比较有较好的相关性。结论 方法灵敏度高 ,特异性强 ,稳定性好 ,检测范围宽 ,准确性和重复性好。

化学发光免疫法与RIA法测定人血清抗TgAb和抗TpoAb结果的比较

比较CLIA和RIA法测定抗甲状腺球蛋白抗体 (抗TgAb)和抗甲状腺过氧化物酶抗体 (抗TpoAb)的临床应用意义。对经临床诊断甲状腺功能检查及病理证实的 37例慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者 ,30例甲亢患者及36例患有内分泌疾病的患者 (包括甲状腺结节、甲状腺癌、糖尿病及库兴氏综合征 )和 35名正常人 ,用CLIA和RIA两种方法分别测定其血清的抗TgAb和抗TpoAb水平 ,并进行比较。结果表明 :(1 )CLIA和RIA法的批内变异分别为 3.0 %和 1 0 .0 % ,批间变异分别为 3.9%和 1 5 .0 % ;(2 )正常人抗TgAb水平分别为CLIA法是 2 5 .9± 9.6U/mL ;RIA为 1 1 .2± 2 .8% ,抗TpoAb水平分别为CLIA法是 31 .4± 6 .7U/mL ;RIA是 8.7± 3.0 % ;(3)慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者分别用CLIA法测定抗TaAb为 2 92 .6± 334.1U/mL(1 7例 ) ,RIA为 5 6 .4±1 1 .2 % (2 1例 )。而用CLIA法测定抗TpoAb为 5 0 4 3.3± 31 96 .1U/mL(1 7例 ) ,RIA为 35 .4± 6 .9% (2 1例 ) ,该结果显示CLIA法所测抗TgAb和抗TpoAb水平均明显高于正常人 (P <0 .0 0 1 ) ,特别是抗TpoAb水平比正常人高百倍以上 ,说明其特异性更高 ;(4 )甲亢患者及内分泌病患者 ,用CLIA法测定抗TgAb为 2 0 2 .3±5 0 6 .3U/mL和 2 8.7± 1 5 .0U/mL ;用RIA法为 2 8.8± 2 0 .2 %和

化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原的研究

目的建立化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原，用于临床前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者病情的监测和预后．方法化学发光酶免疫分析法（CLEIA）采用辣根过氧化酶（HRP）-鲁米诺竞争法．结果该方法的灵敏度为0．01μg／L，在0．5～80μg/L的范围内线性良好．CLEIA测定血清前列腺特异性抗原的批内、批间与日间变异系数分别为5．0％，4．97％和4．93％．在血红蛋白浓度〈2．4g/L、总胆红索浓度〈342μmol／L、甘油三酯浓度〈9．9mmol／L时的干扰率无临床意义．与放射免疫分析法有较好的相关性（r=0．9472）．结论CLEIA法测定血清前列腺特异性抗原能及时有效地满足前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者的临床需要，有助于进一步对检测试剂盒的研制．

化学发光酶免疫分析法测定血清三碘甲状腺原氨酸的建立与研究

目的建立化学发光酶免疫分析法测定血清三碘甲腺原氨酸（T3）及临床甲状腺疾病病情的监测和预后。方法化学发光酶免疫分析法（CLEIA）采用辣根过氧化酶（HRP）-鲁米诺竞争法。结果该方法的灵敏度为0.19nmol／L，在0.52-10.28nmol／L的范围内线性良好。CLEIA测定血清L的批内与日间变异系数分别为4．96％和4．935％。在血红蛋白浓度〈2．4g／L、总胆红素浓度〈342μmol／L、甘油三酯〈9．9mmol／L时的干扰率无临床意义。与放射免疫分析法有较好的相关性（r=0.9264）。结论CLEIA法测定血清L能及时有效地满足甲状腺疾病患者的临床需要，有助于进一步对检测试剂盒的研制。

化学发光免疫测定技术诊断甲状腺肿瘤的临床应用价值研究

目的 探讨化学发光免疫测定技术诊断甲状腺肿瘤的临床应用价值。方法 取2020年3月至2021年4月我院收治的112例疑似甲状腺肿瘤者。所有患者均接受放射免疫分析法(RIA)和化学发光免疫测定法(CLIA)检测,以手术病理诊断为金标准,比较两种检测方法的检测结果。结果 CLIA法检验的甲状腺球蛋白水平及其个数均高于RIA法检测(P<0.05);CLIA法检验的各甲状腺激素水平均高于RIA法检测(P<0.05);手术病理诊断显示,112例患者中,恶性57例,良性55例。CLIA法诊断符合率高于RIA法(P<0.05);CLIA法诊断的准确度、特异度和敏感度均高于RIA法(P<0.05)。结论 应用化学发光免疫测定技术诊断甲状腺肿瘤,其符合率与诊断效能均较高,有利于疾病确诊,整体应用效果较好。

化学发光免疫测定在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用

目的探讨全自动化学发光免疫分析仪在梅毒螺旋体特异性抗体(TPsAb)检测中的临床应用价值。方法验证ARCHITECT I2000全自动化学发光免疫分析仪在TPsAb检测中的精密度、灵敏度、抗干扰能力及携带污染。对50例化学发光免疫测定TPsAb阴性及307例TPsAb阳性临床标本分别进行梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)检测。结果 ARCHITECT I2000系统批内、批间变异系数均小于10%。高值标准品稀释后用TPsAb和TP-PA同时检测,TPsAb检测1:16稀释标本为阴性,TPPA检测1:8稀释标本为阴性。ARCHITECT I2000系统的携带污染率为0.13%。30.0mmol/L三酰甘油、120.0g/L血红蛋白、320.0mol/L胆红素对测定结果的响影小于4%。TPsAb与TPPA检测临床标本阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论全自动化学发光免疫分析仪检测TPsAb,其精密度较好,特异性强,灵敏度高于TPPA,抗干扰能力强,无携带污染,值得在临床推广。

化学发光免疫法检测醛固酮和肾素浓度及对原发性醛固酮增多症的诊断价值的评价

目的：对化学发光免疫法（CLIA）检测醛固酮和肾素浓度进行方法学评价,并通过和放射免疫法（RIA）比较评价其对原发性醛固酮增多症（原醛）的诊断价值。方法：依据美国临床实验室标准化协会的相关方案,对CLIA检测醛固酮和肾素浓度的精密度、准确性、线性范围及参考值范围进行评价和验证,同时对40例高血压原因待查患者分别用RIA和CLIA检测肾素活性或肾素浓度及醛固酮浓度,以临床诊断为金标准,比较两种方法测得的醛固酮浓度/肾素活性或浓度的比值（ARR或ADRR）用于原醛诊断的特异性和敏感性。结果：CLIA检测醛固酮和肾素浓度的批内和批间精密度分别小于5%和10%;回收率分别为102%和95%;醛固酮浓度在3~74 ng/dl范围内、肾素浓度在0.99~330.00μIU/ml范围内,线性关系良好;20例健康受试者除2例肾素浓度超过参考值范围,20例醛固酮浓度和ADRR均在厂商提供的正常人参考范围内。高血压原因待查患者的筛查试验结果显示CLIA和RIA的检测敏感性相同,为85.7%,特异性则分别为97.0%和94.0%。结论：CLIA具有操作简单、重复性好、无放射性污染等优点,CLIA的检测结果符合临床要求,厂商提供的正常参考值范围可用于临床,本研究推荐用CLIA替代RIA。

化学发光法和酶联免疫吸附法检测丙型肝炎病毒抗体的比较分析

目的探讨化学发光法(CLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对丙型肝炎病毒(HCV)抗体的检测意义。方法分别用CLIA法和ELISA法检测2 460例血清样本,收集CLIA/ELISA法检测阳性及可疑血清标本,以重组免疫印迹法(RIBA)最终确认。结果两种方法共筛选57例CLIA/ELISA法检测阳性及可疑血清标本。CLIA法筛选51例阳性,RIBA确证49例,1例可疑标本经确证为阴性;ELISA法筛选52例阳性,RIBA确证47例阳性,有2例可疑标本确证为阳性。CLIA法和ELISA法敏感性分别为100.00%、95.92%;特异性分别为99.92%、99.79%。结论 CLIA法较ELISA法准确、灵敏,应用CLIA法可减少漏检现象。对ELISA法和CLIA法结果S/CO较低的标本均应慎重,必要时用RIBA法补充确证,以排除假阳性。

化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物临床应用评价

目的对化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物的临床应用进行评价。方法用标准参考血清和定值质控血清,对化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物进行评价,评价内容为符合率、分析灵敏度、分析特异性、批内和批间精密度、最低检出限等指标。结果HBsAg符合率为97.5%,其他四项符合率大于92%;HBsAg分析灵敏度100%、分析特异性96.15%;五项的批内和批间精密度均小于15%;最低检出限分别为HBsAg 0.06 IU/mL、HBsAb 0.5 mIU/mL、HBeAg 0.05NCU/mL、HBeAb 0.5 NCU/mL、HBcAb 0.5 NCU/mL。结论化学发光法定量检测乙型肝炎病毒标志物各项性能指标能满足临床要求,但操作需注意标本质量。