化学发光酶免疫方法检测克伦特罗残留

建立了间接竞争化学发光酶免疫法(competitiveindirectchemiluminescentenzymeimmunoassy,icCLEIA)检测猪尿中残留克伦特罗(clenbuterol,CLB)的方法,并优化了竞争反应时间,Tween20含量,PBS离子强度与pH4个参数。优化后的icCLEIA检出限可达0.01μg/L,检测范围为0.04～25.8μg/L,ED50为0.54μg/L;尿样检测的平均回收率为98%～120%,批内与批间相对标准偏差(variationofcoefficent,CV)均小于10%。这些参数均优于目前广泛使用的ELISA方法,说明本CLEIA方法可替代ELISA法,用于实际尿样的检测。

前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法。该方法测量范围为1.5～80μg/L,灵敏度为0.12μg/L,批内变异<5%,批间变异<15%。回收率为83.8%～118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999。本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97。

游离前列腺特异性抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

采用双抗体夹心法建立了定量测定血清游离前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法,其中,1株抗总前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为包被抗体,另1株抗游离前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为标记抗体。总测量范围为0.2^10 ng/mL,灵敏度为0.01 ng/mL,批内变异〈10%,批间变异〈20%。本方法与Monobind游离前列腺特异性抗原化学发光测定试剂盒比对的相关方程为y=0.72x-0.22,相关系数r=0.90。

化学发光酶免疫法检测猪肉中氯丙嗪残留

采用棋盘滴定法确定包被抗原浓度和抗体稀释倍数,通过单因素实验优化了竞争反应时间、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、pH值等参数,建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度和稳定性。结果表明,最佳反应条件为包被抗原浓度为0.05!g/L;氯丙嗪抗体稀释32000倍;体系缓冲液为含10%甲醇、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)。本方法的IC50为0.12!g/L;检出限为0.02!g/L;线性范围0.02～24.78!g/L;批内和批间相对标准偏差均小于10%。与其它结构类似物没有明显交叉反应。猪肉检测的平均回收率为87.4%～105.6%,与高效液相色谱方法的相关性良好。本方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性。

鸡蛋中泰妙菌素化学发光酶免疫分析方法研究

针对鸡蛋中泰妙菌素的残留问题,通过半抗原及抗原设计合成、动物免疫及细胞融合筛选,成功得到可特异、灵敏识别泰妙菌素的单克隆抗体,并建立了泰妙菌素的化学发光酶免疫分析方法(CLEIA)。采用棋盘法结合单因素实验优化策略,确定最佳反应条件为:包被原质量浓度0.26µg/mL,抗体质量浓度0.94µg/mL,反应体系为0.02 mol/L的PBS(pH 7.4)缓冲液,酶标二抗质量浓度及其稀释液和反应时间分别为2µg/mL、PBST和40 min。在该条件下,建立了泰妙菌素的CLEIA方法,其IC_(50)为0.54 ng/mL,检出限(LOD,IC_(10))为0.03 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.17~1.74 ng/mL,且与其它功能结构类似物无明显交叉反应,特异性良好。将建立的CLEIA方法用于鸡蛋实际样品的检测,加标回收率为100%~118%,相对标准偏差(RSD)小于10%,结果与HPLC-MS/MS(r^(2)=0.9987)一致,表明该方法适用于鸡蛋样品中泰妙菌素残留的快速筛查。

抗苗勒氏管激素的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的:抗苗勒氏管激素(AMH)在评价卵巢储备功能方面具有更高的准确性,将其用于青春期、生育期女性的生育指导时具有很好的临床价值。目前对于AMH的检测,临床上常采用的是酶联免疫分析法,但存在灵敏度低、检测范围窄等缺点,而影响AMH实际水平的测定,使得对病情的预估不准确对疾病的治疗产生影响。因此,建立一种低成本、高敏感度的检测AMH水平的方法尤为重要。方法:利用生物素-亲和素放大系统,将一组抗AMH的第一抗体包被微孔板,同时用生物素标记第二抗体,与第一抗体-抗原复合物结合之后,再与生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物结合,加入发光底物,建立AMH酶促化学发光免疫分析方法,同时对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行检测,并与常规ELISA法进行相比检测AMH浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50.00)U/ml,该体系稳定性好,灵敏度0.42U/ml,批内差异小于10.0%,批间差异小于10.0%,与常规ELISA对比差异有统计学意义。结论:AMH的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析易于操作、灵敏度高、价格低廉,适用于临床检测。