人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

竞争化学发光酶免疫测定技术检测盐酸克伦特罗

目的：建立一种检测盐酸克伦特罗（clenbuterol, CLB）的竞争化学发光酶免疫测定法（chemiluminescent enzyme immunoassay, CLEIA）。方法基于CLB的竞争酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）,通过优化反应温度、反应时间和缓冲体系pH建立了CLB的CLEIA测定法。用CLB小鼠中毒模型评价CLEIA检测法对实际样本的检测效果,并将CLEIA与LC-MS法的相关性进行了比较。结果 CLEIA法测定CLB的检测范围为0.0433~42.5363μg/L,检测限为0.0178μg/L,变异系数小于10%,回收率为95%~110%,对莱克多巴胺和沙丁胺醇仅有极低的交叉反应性。所建立的 CLEIA 法与 LC-MS 法在检测实际样本时具有较高的相关性。结论本研究建立的CLEIA法操作简便,检测限、灵敏度、准确度、特异性均符合检测要求,可用于实际样品的检测。

化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原的研究

目的建立化学发光酶免疫分析法测定血清前列腺特异性抗原，用于临床前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者病情的监测和预后．方法化学发光酶免疫分析法（CLEIA）采用辣根过氧化酶（HRP）-鲁米诺竞争法．结果该方法的灵敏度为0．01μg／L，在0．5～80μg/L的范围内线性良好．CLEIA测定血清前列腺特异性抗原的批内、批间与日间变异系数分别为5．0％，4．97％和4．93％．在血红蛋白浓度〈2．4g/L、总胆红索浓度〈342μmol／L、甘油三酯浓度〈9．9mmol／L时的干扰率无临床意义．与放射免疫分析法有较好的相关性（r=0．9472）．结论CLEIA法测定血清前列腺特异性抗原能及时有效地满足前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎患者的临床需要，有助于进一步对检测试剂盒的研制．

化学发光酶免疫分析法测定血清三碘甲状腺原氨酸的建立与研究

目的建立化学发光酶免疫分析法测定血清三碘甲腺原氨酸（T3）及临床甲状腺疾病病情的监测和预后。方法化学发光酶免疫分析法（CLEIA）采用辣根过氧化酶（HRP）-鲁米诺竞争法。结果该方法的灵敏度为0.19nmol／L，在0.52-10.28nmol／L的范围内线性良好。CLEIA测定血清L的批内与日间变异系数分别为4．96％和4．935％。在血红蛋白浓度〈2．4g／L、总胆红素浓度〈342μmol／L、甘油三酯〈9．9mmol／L时的干扰率无临床意义。与放射免疫分析法有较好的相关性（r=0.9264）。结论CLEIA法测定血清L能及时有效地满足甲状腺疾病患者的临床需要，有助于进一步对检测试剂盒的研制。

竞争化学发光酶免疫检测动物源性食品中四环素残留

目的:建立一种准确度高、重复性好的检测四环素(tetracycline,TC)残留的竞争化学发光酶免疫测定法(competitive chemiluminescence enzyme immunity,CLEIA)。方法:通过选择适宜的偶联载体蛋白,优化反应温度、时间等条件,建立了一种测定四环素的竞争化学发光酶免疫测定法(TC-CLEIA)。结果:该方法的检测范围为0.0259~95.9478μg/L,相关系数r为0.9998,检测限为0.0133μg/L,准确度为99.17%,灵敏度为0.7305μg/L,变异系数<10%,对氯霉素、青霉素具有极低的交叉反应;向空白猪肉、鱼肉、鸡肝中添加三种不同浓度的四环素标准品时,检测结果具有较高的准确度和重复性;建立的TC-CLEIA测定法检测了四环素小鼠中毒模型中肝脏、肾脏和肌肉中四环素残留的浓度,浓度大小依次为:肾脏>肝脏>肌肉。结论:本研究建立的TC-CLEIA检测法简便,检测限低,准确度、重复性、特异性均很好,适用于动物源性食品中四环素残留的检测。

谷物中伏马毒素B_1化学发光酶免疫检测

伏马毒素是20世纪80年代末期发现的一类由串珠镰刀菌（Fusarium moniliform Sheldon）产生的真菌毒素,主要存在于谷物中,以玉米居多。伏马毒素与马脑白质软化症、猪肺水肿症侯群以及人类食道癌等人畜疾病有关。化学发光酶免疫测定（chemiluminescent enzyme immunoasssay,CLEIA）属于酶免疫测定,

应用多种方法检测老年患者梅毒抗体的探讨与分析

目的探讨分析多种方法检测老年患者梅毒抗体在梅毒诊断中的意义。方法对该院2009年5月至2012年3月住院患者送检的5314例血清标本应用梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、化学发光酶免疫分析法(CLEIA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、甲苯胺红不加热血清(TRUST)等方法检测并对结果进行比较分析。结果所有血清标本经TP-ELISA检测有反应性结果占2.35%(125/5314),阴性占97.65%(5189/5314),对125例有反应性的结果经TRUST法检测阴性占87.2%(109/125);有反应性结果占12.8%(16/125),其中阳性(原倍血清)占5.6%(7/125),阳性(1:2稀释)占2.4%(3/125),阳性(1:4稀释)占2.4%(3/125),阳性(1:16稀释)占1.6%(2/125),阳性(1:32稀释)占0.8%(1/125);设诊断界值(OD/cutoff值)为α,TP-ELISA与CLEIA、TPPA的相符率分别为100%、99.1%(α≥4.0),80%、80%(2.0<α<4.0),71.4%、42.9%(1.0<α≤2.0)。结论梅毒血清学检查是诊断梅毒的重要依据,但不是唯一依据,对于老年患者,由于生理病理因素等影响,建议梅毒抗体阳性患者应结合多种血清学方法的检测结果,并详细了解患者生活史、既往病史及临床表现综合分析后作出判断。

乙肝病毒血清学标志物与HBV DNA的关系研究

目的:探讨乙肝血清标志物(HBVM)与HBV DNA的相关性及临床意义。方法:用荧光定量PCR(FQ-PCR)和化学发光酶免疫测定(CLEIA)分别对617份血清进行HBV DNA和HBVM检测并对比分析。结果:HBsAg、HBeAg、HbcAb阳性组HBV DNA阳性率为100%(232/232);HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组HBV DNA阳性率为66.9%(164/245);HBsAg、HBcAb阳性组HBV DNA阳性率为60.7%(17/28);HBsAg、HBeAg阳性组HBV DNA阳性率为100%(2/2);HbsAb、HBeAb、HbcAb阳性组HBV DNA阳性率为3.6%(2/56);HbsAb、HbcAb阳性组HBV DNA阳性率为4%(1/25);其余HBVM不同表现模式HBV DNA阳性率为0。HBeAg(+)组与HBeAg(-)组HBV DNA阳性率和HBV DNA定量差异均有显著性(P<0.01)。结论:有机结合血清学标志物和HBV DNA定量检测,才能准确反应不同个体HBV感染状态及病毒复制情况,进而指导临床以取得较好的治疗效果。