AtDME1化学诱导表达载体的构建及其瞬时表达

以拟南芥去甲基化转移酶基因DME1为目的基因,采用酶切、连接和重组反应的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-DME1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明,较低浓度的17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-DME1中目的基因的表达,诱导处理后目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高,之后缓慢下降。该载体的成功构建为深入研究DNA去甲基化与植物的生殖发育调控奠定了基础。

去甲基化酶基因AtROS1化学诱导表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达

植物去甲基化酶ROS1是表观遗传中一种重要的作用因子,参与基因的表达调控,与植物的生长发育及各种逆境响应过程密切相关。以拟南芥AtROS1基因为目的基因,采用"酶切—连接"的方法构建了以17-β-雌二醇为诱导剂的植物表达载体p ER8-ROS1。将其转入农杆菌LBA4404菌株中,通过烟草瞬时表达技术,对该载体的诱导表达特性进行了研究。q PCR结果表明:17-β-雌二醇处理能够有效调控p ER8-ROS1中目的基因的表达,17-β-雌二醇最佳诱导浓度为50~100μmol·L^(-1);随着诱导时间的延长,目的基因表达量逐渐升高,在12 h后达到最高。该诱导表达载体的构建为研究植物抗逆胁迫过程中的表观遗传机制奠定了基础。

AtMET1基因克隆及化学诱导表达分析

DNA甲基化是植物基因组中普遍存在的一种的重要表观遗传学机制,对植物生长发育及进化起着重要的调节作用[1-2]。植物体DNA甲基化的建立和维持受多个基因的协同调控,其中MET1（DN-MT1-like METHYLTRANSFERASE 1 gene）是在植物中最早分离出来的甲基化相关基因,编码DNA甲基化转移酶1（MET1,Methytransferase1）,该酶主要负责保持CG位点的甲基化,通过DNA甲基化作用影响植物的基因组结构、发育和进化。

黄瓜ERAF17基因的克隆及相关功能载体构建

目的:探讨黄瓜性别相关基因ERAF17在黄瓜性别调控过程中的作用。方法:通过RT-PCR法克隆黄瓜性别相关基因ERAF17,利用分子克隆技术将目的片段连入植物化学诱导表达载体pER8,选择部分ERAF17序列构建含有目的片段发卡结构的沉默载体。构建原核表达载体pET-28a-ERAF17在大肠杆菌中诱导表达ERAF17蛋白并进行纯化。结果:成功构建了植物化学诱导表达载体pER8-ERAF17和含有目的片段发卡结构的沉默载体pMBW330-ERAF17-hp,在含有pET-28a-ERAF17原核表达载体的大肠杆菌中加入IPTG诱导3h后ERAF17表达量最高,通过NT-agerose介质成功纯化出ERAF17的编码蛋白。结论:所构建载体可用于ERAF17基因的功能研究。