新型化学转染试剂对人脐带间充质干细胞的转染优化

背景:人脐带间充质干细胞的基因修饰技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。目的:对比3种新型化学转染试剂在人脐带间充质干细胞中的瞬时转染效率。方法:采用FugeneHD、LipofectamineLTX及Attractene分别转染人脐带间充质干细胞,荧光显微镜下观察阳性细胞,流式细胞术分析不同转染试剂的转染效率,锥虫蓝染色观察转染后人脐带间充质干细胞的生存率。结果与结论:LipofectamineLTX转染效率最高,显著高于FugeneHD和Attractene[(32.50±2.12)%,(4.30±0.64)%,(1.70±0.08)%,P<0.05]。LipofectamineLTX转染后的细胞生存率略低于FugeneHD及Attractene,但差异无显著性意义[(69.8±6.3)%,(92.4±4.2)%,(106.6±3.9)%,P>0.05]。提示LipofectamineLTX是人脐带间充质干细胞较为理想的化学转染试剂。

光化学转染对肿瘤治疗的研究进展

在癌症治疗过程中,大分子物质作为一种治疗剂具有很大的潜力,因其难以被有效而特异的传递到细胞内而使其治疗作用受到限制。目前发现一种叫光化学转染的技术可以有效而特异的把不同种类的分子如基因,药物,核糖体钝化蛋白,传递到胞浆中。光化学转染(Photochemical internalization PCI)是利用不同载体将大分子物质转入胞内后,光照激活分布在内吞泡上的光敏剂,产生多种种类活性氧(ROS),其中最重要的是单态氧去破坏膜的脂质双分子层发生氧化反应而使膜破裂释放内吞的物质的一种方法。

宫颈细胞系化学转染与电穿孔转染效率的比较与优化

目的定量比较4种化学转染试剂在五株常用的宫颈(癌)细胞系中的DNA转染效率,以助于针对不同细胞系选择合适的转染试剂;同时探索电穿孔转染法在难转细胞系Ect1/E6E7、CaSki中的应用,选择最佳转染条件。方法以pcDNA3.1-EGFP为报告载体,采用FuGENE HD、jetPRIME、Lipofectamine 2000和Lipofectamine 3000四种转染试剂分别转染常用宫颈(癌)细胞系HeLa、SiHa、CaSki、C33A和Ect1/E6E7,转染24h后用倒置荧光显微镜观察记录,并采用Cellometer K2对转染效率进行定量分析。针对化学转染法难转细胞系Ect1/E6E7、CaSki,采用电穿孔转染法进行转染,优化转染条件,并对转染效率进行定量比较。结果jetPRIME和Lipofectamine 3000转染试剂在HeLa细胞中的转染效果很好,而对SiHa、C33A细胞转染效率相对较低,在CaSki、E6E7细胞中的转染效果很差。FuGENE HD转染试剂除了对HeLa、SiHa细胞转染效果较好之外,在其他3株细胞中的转染效果均不理想。Lipofectamine 2000在5株细胞中的转染效果也不理想。在穿孔电压170V、脉冲波长7ms、脉冲间隙10ms和驱动电压20V的条件下电穿孔转染法在Ect1/E6E7、CaSki细胞中的转染效率最佳且均高于化学转染法。结论针对不同的宫颈(癌)细胞系选择合适的转染方式和转染试剂可达到更高的转染效率。相对电转染,化学转染细胞存活率高,电转染更适用于难转细胞的稳定转染。

基因转染新方法——声化学基因转染

目的基因转染效率低下一直是限制基因研究与基因治疗进一步发展和广泛应用的瓶颈问题。笔者将生物技术和超声技术有机结合,提出一种基因转染新方法即声化学基因转染或声化学内在化,为提高基因转染效率提供新的思路和新手段。

Mimics转染PC12细胞条件的优化

PC12作为模式细胞已被广泛应用于多种疾病研究。为探究高效、低毒的PC12的细胞转染方法,试验采用化学转染法,以带有5′-羧基荧光素(FAM)标记的NCmimics作为外源基因,分别用RFect、D-Portal、Tran⁃sIntro^(TM)EL、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000等5种转染试剂转染PC12细胞以筛选最佳转染试剂;然后设置NC-FAMmimics浓度为50、60、70、80、90、100 nmol/L,通过倒置荧光显微镜观察PC12细胞在最佳转染试剂下的荧光信号对转染效果进行评定。结果表明,在相同的培养条件下,不同转染试剂对PC12细胞的转染效果之间存在较大差异,其中,TransIntro^(TM)EL转染后荧光强度最高,D-Portal、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000转染后荧光信号次之,RFect转染后荧光信号最弱;且不同处理对细胞损害无显著差异。以TransIntro^(TM)EL作为最佳转染试剂进一步优化NC-FAMmimics转染浓度发现,荧光强度随NC-FAMmimics浓度的增加呈现先增强后降低的趋势,且在NC-FAMmimics浓度为70 nmol/L时荧光信号最强;此外不同浓度下的细胞数量无显著差异。综上可见,以TransIntro^(TM)EL作为转染试剂、NC-FAMmimics浓度为70 nmol/L时,转染后PC12细胞荧光强度最高,转染效果最好。