3种龙胆科蒙药及其混淆品的化学轮廓比较研究

目的创建肋柱花的HPLC对照指纹图谱,并与花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁的化学轮廓比较,为肋柱花与花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁替代使用是否合理的问题提供初步依据。方法采用HPLC法建立肋柱花的对照指纹图谱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,B;0~15 min,85%→75%;15~30 min,75%→55%;30~35 min,55%→85%。流速为1.0 mL/min,检测波长275 nm,进样量10μL。采用标准对照法对其共有峰进行识别。同时,在上述色谱条件下,分别获得花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁的化学轮廓色谱图,然后利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”与肋柱花对照指纹图谱进行相似度评价。结果创建了肋柱花对照指纹图谱,共标定9个共有峰,并结合标准对照法分析,确定了1、2、3、4、5、6和7号峰对应的化合物,分别为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、异牡荊苷、当药黄素、当药醇苷、hypolaetin-7-O-β-D-glucoside和swertianolin。与肋柱花对照指纹图谱相似度比较,花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁的相似度分别为0.804、0.747、0.510和0.431。直观分析可知,花锚和扁蕾的主要化学成分与肋柱花对照指纹图谱中共有峰重叠,而与异属植物紫花地丁和苦地丁虽有2个重叠峰,但其2个重叠峰峰面积总和分别只占肋柱花对照指纹图谱共有峰总峰面积的9.2%和10.15%。结论本研究所建立的肋柱花对照指纹图谱成功应用于肋柱花与花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁化学轮廓比较中,这对肋柱花是否能被花锚、扁蕾、紫花地丁和苦地丁替代使用的合理判断具有一定的指导意义。

基于体外抗肿瘤活性的海洋中药牡蛎提取物HPLC化学轮廓谱研究

牡蛎等贝壳类中药的90%以上成分都是碳酸钙,现版药典对该类药材的质量控制均以碳酸钙含量为指标。由于贝类中药的功能主治不尽相同,除碳酸钙以外还可能存在其他功效成分。为在有效成分不明确的情况下表征牡蛎饮片的质量,本文在评价抗肿瘤活性的基础上研究牡蛎药材化学轮廓谱,为牡蛎药材的质量控制提供科学依据。收集12批次牡蛎药材,体外测试牡蛎甲醇提取物对9种肿瘤细胞株的增殖抑制作用,发现牡蛎甲醇提取物具有广谱的体外抗肿瘤活性,提示小分子有机质是牡蛎发挥"软坚散结"抗肿瘤作用的不可忽视的药效物质基础。采用高效液相色谱分析化学组成,进行相似度评价;舍去活性较差且化学成分相似度不高的样品,建立化学轮廓谱;采用双变量相关分析考察"谱-效"相关性,发现3个共有峰与活性有明显相关,可以作为质量控制的指标性成分,建立的牡蛎药材甲醇提取物化学轮廓谱能较好地体现其"软坚散结"抗肿瘤功效。

中药黄芩HPLC指纹图谱的化学轮廓及其影响因素的研究

目的建立中药黄芩HPLC指纹图谱方法,研究指纹图谱化学轮廓及其影响因素,为黄芩HPLC指纹图谱方法的推广应用提供参考依据。方法采用HPLC指纹图谱分析方法对7个省区83份黄芩(Scutellariabaicalensis根)的化学成分进行测定,考察色谱柱、色谱仪、洗脱梯度、检测波长等因素对指纹图谱的影响,对色谱方法的普适性和耐用性作出系统评价。结果用83份黄芩样品建立的黄芩HPLC指纹图谱中有29个共有峰,利用对照品和LC-MS技术对黄芩指纹谱中的27个化合物进行了指认和鉴定;在一定的条件下所建立的指纹谱方法具有良好的精密度、重复性,黄芩供试品溶液在72 h内稳定性良好。在考察各因素中发现,检测波长对指纹谱的化学轮廓影响很大;分别变换色谱仪、色谱柱或洗脱梯度等色谱条件对指纹谱化学轮廓产生的影响亦较大。结论所建立的黄芩HPLC指纹图谱方法在一定条件下具有很好的稳定性和实用性,可用于黄芩药材的化学轮廓研究,进而评价黄芩的质量。但是指纹图谱在实际应用中须严格控制规定的测定条件,以确保所得指纹图谱稳定可靠。

不同控温除湿萎凋环境对白茶风味品质和化学轮廓的影响

为实现基于萎凋环境(温度和湿度)的白茶加工品质目标控制,以茶鲜叶萎凋减重率达45%为环境调控节点,通过高温除湿[(30±2)℃,RH(35±5)%]或低温除湿[(20±2)℃,RH(55±5)%],研究了持续低温除湿(Low-Low)、持续高温除湿(High-High)、先高温除湿后低温除湿(High-Low)和先低温除湿后高温除湿(Low-High)4种不同控温除湿萎凋方式对福安大白茶、黄棪和黄观音等6个茶树品种鲜叶所制白茶感官品质和化学轮廓的影响。结果表明,白茶风味品质主要由鲜叶原料(茶树品种)的理化特性所决定。采用Low-Low萎凋处理的白茶滋味略淡、稍带青气;High-High和Low-High萎凋处理的同一茶树品种白茶的外形和汤色等较为相近,且Low-Low和High-Low萎凋加工的白茶亦具有较为类似的品质特征。各白茶样品的紫外和近红外光谱均有较为相似的吸收变化,并以近红外光谱可为供试茶样的模式识别提供更为丰富的化学信息;白茶样品中的没食子酸、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素、咖啡碱和可可碱含量在不同茶树品种间存在一定差异,但萎凋处理对已标定的儿茶素类和嘌呤碱均无显著性影响。基于紫外光谱,尤其是近红外光谱和生化组成(儿茶素类和嘌呤碱)的主成分分析可对白茶样品按鲜叶原料(茶树品种)进行较好的类群区分,但不同萎凋处理对其光谱和生化组成轮廓的影响则被茶鲜叶原料的品种特性所掩饰;采用多级主成分分析可有效呈现4种萎凋环境对不同茶树品种白茶样品近红外光谱和生化组成轮廓的影响趋势,且其对全部白茶样品的分类识别结果与呈现的风味品质感官特征较为一致。研究结果可为白茶风味品质工艺技术调控提供参考依据。

回流和渗漉提取法制备大黄提取物的化学轮廓差异比较研究

目的:比较中国药典2015年版中回流和渗漉提取法制备的大黄提取物的化学轮廓差异,筛选出导致差异的特征性化学成分。方法:经HPLC分析获得回流和渗漉提取法制备的大黄提取物样品的色谱图数据集;采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)、聚类分析(HCA)等多变量统计分析方法比较回流和渗漉提取法制备的大黄提取物的化学轮廓差异及筛选出导致差异的特征性化学成分。结果:回流法和渗漉法制备的大黄提取物化学轮廓明显不同,导致差异的主要特征性化学成分为芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚。结论:从化学轮廓角度,回流和渗漉提取方法制备的大黄提取物具有显著差异。

蒙药小白蒿及其混淆品化学轮廓比较研究

目的建立小白蒿的高效液相色谱法(HPLC)对照指纹图谱,并与其混淆品大籽蒿、芯芭的化学轮廓比较,为小白蒿与大籽蒿、芯芭替代使用是否合理的问题提供初步依据。方法采用HPLC建立小白蒿的对照指纹图谱,以乙腈(A)-1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱:0~20 min,6%→15%A;20~45 min,15%→25%A;45~60 min,25%→65%A;60~80 min,65%→85%A。流速为1.0 mL/min,检测波长360 nm,柱温40℃,进样量10μL。运用标准对照法对小白蒿共有峰进行识别。同时,在上述色谱条件下,分别获得大籽蒿和芯芭的化学轮廓色谱图,然后利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统与小白蒿对照指纹图谱进行相似度评价。结果创建了小白蒿对照指纹图谱,共标定12个共有峰,并结合标准对照法分析,确定了9个峰对应的化合物,分别为绿原酸、咖啡酸、芦丁、金圣草素-4’-O-β-D-葡萄糖苷、5-羟基-3’,4’-二甲氧基黄-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、5-羟-3’,4’,5’-三甲氧基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素、木犀草素和山柰酚。与小白蒿对照指纹图谱相似度比较,大籽蒿和芯芭的相似度分别为0.408和0.258。直观分析可知,大籽蒿与小白蒿对照指纹图谱重叠的有4个峰,其峰面积总和占小白蒿对照指纹图谱共有峰总峰面积的39.5%,而与芯芭也有4个共有峰,其峰面积总和占小白蒿对照指纹图谱共有峰总峰面积的18.6%。结论该研究所建立的小白蒿对照指纹图谱对小白蒿是否可被大籽蒿和芯芭替代使用的合理判断具有一定的指导意义。

基于指纹图谱及化学轮廓技术的大黄浸膏质量评价研究

目的:建立不同批次大黄浸膏指纹图谱评价方法,并基于化学轮廓技术,分析大黄浸膏质量差异。方法:采用HPLC-UV色谱分析方法,优化大黄浸膏全成分含量测定方法;并基于化学轮廓技术确证大黄浸膏样品差异性和质量差异贡献度较大的化合物。结果:建立了一种可用于大黄浸膏质量评价的指纹图谱方法,初步确认了对不同批次差异贡献度较大的成分。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法和化学轮廓技术能有效评价大黄浸膏的质量。

基于统计学分析比较回流和超声提取方法制备没食子提取物的化学轮廓差异

目的:通过比较超声法和回流法提取的没食子提取物化学成分的差异,筛选出产生差异的特征性化学成分。方法:采用高效液相色谱(HPLC)分析法,建立回流法和超声法提取没食子提取物样品的色谱数据集,使用SIMPCA-P统计软件对数据进行主成分分析、最小二乘判别分析、聚类分析等多元分析,比较回流法提取与超声法提取没食子提取物的差异,筛选出引起差异的特征性化学成分。结果:从化学轮廓和统计学分析来看,不同批次没食子药材的回流提取和超声提取之间存在显著差异,造成这种差异的主要特征化学成分是没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯和鞣花酸。含量测定结果显示回流法提取和超声法提取对没食子提取物中主要有效成分含量的变化有着显著影响,两种提取物的质量具有明显差异(P<0.01)。结论:回流法和超声法提取制备的没食子提取物具有明显差异,此结论可以为没食子提取物生产质量控制提供依据。

不同品种和产地决明子质量差异的LC-TOF-MS和化学轮廓分析

目的研究不同品种和产地决明子的化学轮廓特征,筛选和鉴定影响决明子质量的特征性成分。方法采用液相色谱-飞行时间-质谱联用技术(LC-TOF-MS)分析并获得不同品种和不同产地决明子的色谱图数据集,运用多变量统计分析方法比较不同品种和不同产地决明子的化学轮廓差异,筛选出导致这些差异的特征性化学成分,并对其进行质谱分析和比对。结果分析出15个特征峰并鉴定出了8个特征峰,包括决明子苷C、红链霉素-6-O-β-D-龙胆二糖苷、决明子苷B、钝叶决明子素、2-葡萄糖-大黄素、橙黄决明素、黄决明素和大黄素甲醚。结论LC-TOF-MS可简便、快速地对不同品种和产地决明子中化学物质进行轮廓差异性研究,为决明子品质评价和药效物质基础研究提供了一定的实验依据。

基于高通量测序和化学轮廓分析研究黄连在连栀矾溶液发酵炮制中的作用

目的探究黄连Coptidis Rhizoma在连栀矾溶液传统发酵炮制中的作用。方法按照连栀矾溶液传统配方比例,将其拆分为3组配方溶液:连栀矾组(黄连+栀子+白矾)、黄连组(黄连+白矾)和栀子组(栀子+白矾),采用HPLC分析比较3组溶液发酵前后的化学成分变化轮廓,采用Illumina Hiseq高通量测序技术测定并比较发酵溶液中微生物的群落特征。结果传统配方连栀矾经发酵后环烯醚萜类成分发生了较显著的变化(P<0.05),生物碱类成分未发生明显变化,拆分后的黄连组中生物碱类成分和栀子组中环烯醚萜类成分均没有发生明显变化。分别对各组发酵溶液进行测序,根据α多样性分析结果,3组发酵液中真菌多样性为连栀矾组<栀子组<黄连组,真菌的丰富度为栀子组<连栀矾组<黄连组;细菌多样性为连栀矾组<黄连组<栀子组,细菌的丰富度为连栀矾组<栀子组<黄连组。根据β多样性分析结果,3组溶液中的真菌和细菌的群落结构均有明显差异。根据微生物相对丰度分析可知,3组的优势真菌均为子囊菌门、担子菌门和罗兹菌门,不同组间丰度无明显差异;真菌优势属中的孢霉属的丰度在连栀矾组最高,显著高于另外2组(P<0.05),栀子组又显著高于黄连组(P<0.05);韦斯特壳属的丰度在连栀矾组中最低,显著低于黄连组和栀子组(P<0.05),后两者间丰度无明显差异。3组的优势细菌均为变形菌门、厚壁菌门、放线菌门和拟杆菌门,其中连栀矾组中变形菌门的丰度极显著低于黄连组和栀子组(P<0.01),厚壁菌门的丰度在连栀矾组中极显著高于黄连组和栀子组(P<0.01),放线菌门和拟杆菌门的丰度在3组发酵溶液的差异较小;细菌优势菌属中的乳杆菌属在连栀矾组中显著高于黄连组和栀子组(P<0.05),在黄连组中也显著高于栀子组(P<0.05),伯克氏菌属丰度在黄连组和栀子组中无显著差异,都显著高于连栀矾组中的丰度(P<0.05)。结论连栀矾溶液配方中的黄连能提高其中栀子的有效成分的发酵转化,并且是通过对发酵体系中的优势菌属的丰度进行调节而发挥作用的。进一步佐证了传统配方制剂的合理性和科学性。

利用HPLC-IT-TOF-MS表征通关藤化学轮廓

目的利用HPLC-IT-TOF-MS对通关藤的化学轮廓进行全面地解析。方法通关藤甲醇超声提取后,采用Waters AcquityUPLCHSST3色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱;采用正、负离子自动多级质谱模式检测。利用多个孕甾烷类对照品推导该类化合物的质谱裂解规律。结果通过与对照品比对,准确归属了6个绿原酸类化合物和15个孕甾烷衍生物;通过相关文献数据结合质谱裂解规律推导,初步鉴定了100个孕甾烷类衍生物、4个黄酮类化合物和2个绿原酸类化合物。结论利用HPLC-IT-TOF-MS技术能快速、准确地对通关藤的化学轮廓进行全面解析,为通关藤及其制剂消癌平的质量标准及体内药效物质研究提供有效信息。

超高效液相色谱-飞行时间质谱法用于藿香正气方化学物质轮廓谱的研究

目的:研究藿香正气方的化学物质轮廓谱。方法:采用超高效液相色谱-飞行时间质谱法建立藿香正气方的化学物质轮廓谱,收集不同厂家的27批产品进行测定,并使用主成分分析法对化学物质轮廓谱进行模式识别研究。结果:27个样品基本可分为7类,不同剂型的藿香正气制剂化学物质轮廓谱存在明显差异。结论:该方法可较系统地用于藿香正气方的质量控制。

无烟气烟草制品化学成分研究进展

为了解无烟气烟草制品的化学成分组成及含量,对其常规化学成分、添加剂、有害成分的组成和含量及分析方法进行了综述。经文献调研发现,不同类型及品牌的无烟气烟草制品pH、含水率、烟碱含量(烟碱总含量、游离态烟碱含量)存在较大差异;添加剂作为配方成分,包含物质种类较多,但研究报道较少;有害成分含量均为痕量级,且TSNAs为主要成分,关注度最高。常规化学成分、添加剂的分析方法以GC和GC-MS为主;有害成分的检测分析中多采用高选择性、高灵敏度的MS/MS检测器;化学轮廓谱分析法能够实现化学组成全貌分析,目前尚处于科研前沿。在国内无烟气烟草制品的研发中,可参考文献中常规化学成分、添加剂的组成及含量进行组分调配,并使有害成分含量最小化;在无烟气烟草制品中化学成分的检测方面,可利用多靶标分析或化学轮廓谱分析技术手段,从而实现高通量分析。

基于LC-TOF-MS分析不同品种和产地厚朴中化学成分的轮廓差异

目的:对不同品种和不同产地厚朴的化学物质进行轮廓谱差异研究,筛选并鉴定影响该药材质量差异的特征性成分。方法:采用液相色谱-飞行时间-质谱联用技术(LC-TOF-MS)分析并获得不同品种和不同产地厚朴的色谱图数据集,运用变量统计分析方法比较不同品种和不同产地厚朴的化学轮廓差异,筛选出导致这些差异的特征性化学成分,并对其进行质谱分析和比对。结果:分析并鉴定出了11个特征峰,包括厚朴酚、和厚朴酚、石竹厚朴酚、厚朴碱、木兰花碱、鹅掌楸碱、罗默碱、海罂粟碱、阿西米洛宾、塔斯品碱、观音莲明碱。结论:LC-TOF-MS可简便、快速地对不同产地和不同品种厚朴中化学物质进行轮廓差异性研究,为后期厚朴品质评价和药效物质基础研究提供了一定的实验依据。

采用柱前衍生化法研究康复新液不同制备环节中氨基酸成分轮廓差异

目的:采用柱前衍生化法及主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘法-判别分析(partial least square-discriminant analysis,PLS-DA)等多变量数据分析方法动态分析测定不同批次美洲大蠊药材以及由其所制备的提取物和制剂康复新液中12种游离氨基酸含量,筛选出导致差异的特征性氨基酸成分。方法:采用1%FDNB-乙腈溶液进行柱前衍生化;色谱条件:色谱柱为Kromasil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),流动相A为20mmol·L^(-1)乙酸铵-0.4%乙酸水溶液,流动相70%乙腈,梯度洗脱(0～5 min,70%A;5～8 min,70%A→68.5%A;8～12 min,68.5%A→67%A;12～16 min,67%A→65%A;16～17 min,65%A→62%A;17～18 min,62%A→61%A;18～23 min,61%A→59%A;23～24 min,59%A→49%A;24～31 min,49%A→40%A;31～33 min,40～35%A;33～35 min,35%A→30%A;35～37 min,30%A;37～38 min,30%A→70%A;38～40 min,70%A),流速1 mL·min-1,检测波长360 nm,柱温30℃,进样量10μL。结果:12种氨基酸在40 min内均能得到较好的分离,r=0.999 1～0.999 9(n=3),平均回收率为90.2%～111.8%,RSD为0.57%～2.6%;制剂中精氨酸(Arg)含量与药材、提取物相较具有统计学差异性(P<0.05);通过PLS-DA和各变量重要性因子分析(VIP)表明,牛磺酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺对药材、提取物、制剂的质量贡献较为明显。结论:通过氨基酸含量的测定可将美洲大蠊药材与提取物、制剂样品区分开,提取物与制剂样品之间含量存在的差异较小,表明康复新液制备工艺较为稳定,其中牛磺酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺以及精氨酸为康复新液质量控制标志物。

Metabolic profile of danshen in rats by HPLC-LTQ-Orbitrap mass spectrometry

Danshen, the dried root of Salvia miltiorrhiza Bunge（Lamiaceae）, is one of the traditional Chinese medicines（TCMs） most commonly used for the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases. However, little is known about the chemical and metabolic profiles of danshen in vitro or in vivo. In particular, more information is needed in relation to the 50% ethanol extracts usually used in danshen formulations such as Fufang Xueshuantong Capsules and Fufang Danshen tablets. High-performance liquid chromatography coupled with a linear ion trapOrbitrap mass spectrometer（HPLC-LTQ-Orbitrap） provides a sensitive and accurate method for analyzing the composition of samples. This method was used to determine the in vitro and in vivo chemical and metabolic profiles of danshen. Sixty-nine components of danshen extract and 118 components of danshen in rat plasma, urine, feces, and bile were unambiguously or tentatively identified. These results not only revealed the material composition of danshen, but also provided a comprehensive research approach for the identification of multi-constituents in TCMs.