肺痹方干预肺纤维化小鼠肺泡上皮细胞线粒体途径凋亡的机制

背景:研究表明,线粒体介导的肺泡上皮细胞凋亡在肺纤维化发病中起着重要的作用,而肺痹方可以减轻肺纤维化,抑制肺纤维化小鼠细胞外机制转化。目的:探讨肺痹方对博来霉素致肺纤维化小鼠肺泡上皮细胞线粒体途径凋亡的机制。方法:40只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、模型组、吡非尼酮组、肺痹方组,每组10只。除空白对照组外,其他3组腹腔注射博来霉素[7.5 mg/(kg·d)]建立肺纤维化模型,连续注射10 d。造模后第1天各药物组小鼠灌胃给药[51.43/(kg·d)]吡非尼酮或[12.86 mg/(kg·d)肺痹方],连续给药28 d。用药结束后取材,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察小鼠肺组织的形态学变化,ELISA法检测血清中白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素17、白细胞介素37水平,Western-blot法检测肺组织中Bax、Bcl-2、Beclin-1和Caspase3表达。结果与结论:①肺组织的形态学观察显示,模型组肺泡间隔及肺泡腔有大量炎症细胞浸润,出现大片融合成团的纤维灶;吡非尼酮组肺泡间隔增厚,炎症细胞少量浸润,出现肺纤维灶;肺痹方组肺泡结构增宽,少量的炎症细胞浸润,肺泡结构几乎无明显受损,少量肺纤维灶。②与空白对照组相比,模型组小鼠血清白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素17和白细胞介素37质量浓度明显升高(P<0.01),两用药组明显低于模型组(P<0.01),肺痹方组低于非尼酮组。③与空白对照组相比,模型组小鼠肺组织Bax和Caspase3蛋白表达显著升高,两用药组均低于模型组;与空白对照组相比,模型组Bcl-2和Beclin-1蛋白表达显著降低,两用药组均高于模型组。④结论:肺痹方可以减轻肺纤维化,其机制可能与下调白细胞介素1、白细胞介素6、白细胞介素17和白细胞介素37水平,以及调节线粒体凋亡Bax、Bcl-2、Beclin-1和Caspase3相关蛋白从而减少肺泡上皮细胞凋亡有关。

有氧运动抑制炎症反应改善ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠心肌纤维化机制研究

背景动脉粥样硬化(AS)会引发心肌梗死、心肌纤维化等心血管病变,随着全球人口老龄化加重,发病人群逐渐增多。炎症反应是心肌纤维化的关键因素,规律的有氧运动可以减轻炎症保护心肌功能。但有氧运动对AS心肌纤维化的保护机制尚不清楚。目的本研究旨在探讨有氧运动对AS小鼠心肌纤维化的影响机制。方法2022年2—8月选取27只8周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠作为实验对象,将小鼠随机分为对照组、模型组和有氧运动组,每组9只。制备AS小鼠模型,对小鼠进行运动训练,Masson染色、苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织情况,蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织NOD受体3(NLRP3)、白介素1β(IL-1β)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况,检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达量。结果Masson染色结果示模型组心肌组织纤维化较对照组明显加重;有氧运动组心肌组织纤维化较模型组明显改善。HE染色结果示模型组小鼠心肌细胞排列较错乱,细胞形态、大小异常,细胞间隙增大,存在炎性细胞浸润;有氧运动组小鼠心肌细胞排列尚整齐,细胞形态、大小异常,细胞间隙基本正常。模型组NLRP3、IL-1β、TGF-β1蛋白表达高于对照组,有氧运动组NLRP3、IL-1β、TGF-β1蛋白表达低于模型组、高于对照组(P<0.05)。模型组SOD、GSH-Px表达量低于对照组,有氧运动组SOD、GSH-Px表达量高于模型组、低于对照组(P<0.05)。结论有氧运动明显改善ApoE^(-/-)AS小鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制心肌炎性反应、激活抗氧化水平有关。

结合网络药理学分析p53信号通路在麦门冬汤改善肺纤维化小鼠模型中的作用

目的探讨麦门冬汤对肺纤维化小鼠模型的干预作用及其药理机制。方法将C57BL/6小鼠随机分成对照组、模型组、干预组,每组6只,模型组小鼠经气管滴注博来霉素建立肺纤维化小鼠模型,干预组造模24 h后麦门冬汤灌胃给药20 d,观察小鼠一般情况,HE染色观察肺组织的病理变化,免疫组化和Western blot分析α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)的表达情况。网络药理分析麦门冬汤干预肺纤维化的潜在机制。其后通过转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3构建肺纤维化细胞模型,麦门冬汤含药血清和(或)p53抑制剂(pifithrin-α,PFT-α)干预后,荧光定量PCR和Western blot检测p53、α-SMA、E-cadherin和I型胶原蛋白(collagen type I,Collagen I)的表达情况。结果与对照组比较,肺纤维化小鼠模型肺组织均出现大面积实变区和大量炎性细胞浸润,α-SMA表达增加,E-cadherin降低(P<0.01),麦门冬汤干预后上述症状得到显著改善。网络药理学分析发现麦门冬汤的差异药靶基因主要富集在p53信号通路。细胞实验则显示麦门冬汤组含药血清干预可使肺纤维化细胞模型中α-SMA下调,E-cadherin和p53表达上调(P<0.01)。PFT-α干预实验中,PFT-α干预后对照组和麦门冬汤组中p53和E-cadherin表达降低,α-SMA和Collagen I表达升高(P<0.01)。结论麦门冬汤可通过调节p53信号通路改善肺纤维化进展。

基于16S rRNA测序分析异丙肾上腺素诱导的心肌纤维化小鼠中肠道菌群紊乱

目的基于16S rRNA测序分析异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌纤维化(MF)小鼠中肠道菌群紊乱情况。方法小剂量ISO皮下注射3周建立MF小鼠模型,小动物超声评估小鼠心脏收缩与射血功能,HE与Masson染色观察心肌损伤与纤维化,实时荧光定量PCR检测纤维化与心室重构相关基因表达,16S rRNA测序分析MF小鼠中肠道菌群紊乱情况。结果通过小动物超声、病理染色与RT-qPCR等方法从功能、形态与分子层面证实MF模型建立成功。16S rRNA测序分析发现,MF小鼠肠道中厚壁菌门相对丰度减低,拟杆菌门丰度增加。LEfSe差异分析筛选出另枝菌属(Alistipes)、副拟杆菌(Parabacteroide)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)及伯克氏菌(Burkholderiales)、副沙门氏菌(Parasutterella)、萨特氏菌(Sutterellaceae)等显著差异菌属。结论MF小鼠中存在肠道菌群紊乱,这些差异菌属及其代谢产物可能参与MF的疾病发生与进展。

免疫系统人源化小鼠及其在肿瘤免疫治疗中的应用

肿瘤免疫治疗的有效性多借助于小鼠模型进行评价。但由于物种差异,传统小鼠模型不能完全模拟人体免疫应答的真实情况,导致大部分基于小鼠的研究成果不适用于人体。近年随着免疫缺陷小鼠的出现和品系改良,基于免疫缺陷小鼠构建的免疫系统人源化小鼠有望帮助研究者克服这一难题。本文就免疫缺陷小鼠模型和免疫系统人源化小鼠模型的最新研究进展和存在的问题以及免疫系统人源化小鼠在肿瘤免疫研究中的应用进行总结,为后续人源化小鼠模型的完善及其在肿瘤免疫治疗中的应用提供参考。

电子商务化小微企业融资渠道研究

随着中国经济转型速度的加快和创新创业浪潮的兴起,小微企业和互联网技术不断融合发展。小微企业与电子商务紧密相连,这是小微企业的新兴发展方向,也是必然的发展趋势。近年来,电商金融在中国发展迅速,并呈现进一步发展的趋势。电商金融背景下,我国电子商务化小微企业融资渠道发生了新的变化。本文通过对电商金融与传统金融的对比分析,指出电商金融背景下电子商务化小微企业融资存在的问题,并提出相应的对策建议。

基于改进YOLOv8的轻量化小麦病害检测方法

为提高小麦病害检测精度,实现将模型方便快速部署到移动端,该研究提出了一种基于改进YOLOv8的轻量化小麦病害检测方法。首先,使用PP-LCNet模型替换YOLOv8网络结构的骨干网络,并在骨干网络层引入深度可分离卷积(depthwise separable convolution, DepthSepConv)结构,减少模型参数量,提升模型检测性能;其次,在颈部网络部分添加全局注意力机制(global attention mechanism, GAM)模块,强化特征中语义信息和位置信息,提高模型特征融合能力;然后,引入轻量级通用上采样内容感知重组(content-aware reassembly of features,CARAFE)模块,提高模型对重要特征的提取能力;最后,使用Wise-IoU(weighted interpolation of sequential evidence for intersection over union)边界损失函数代替原损失函数,提升网络边界框回归性能和对小目标病害的检测效果。试验结果表明,对于大田环境下所采集的小麦病害数据集,改进后模型的参数量及模型大小相比原YOLOv8n基线模型分别降低了12.5%和11.3%,同时精确度(precision)及平均精度均值(mean average precision,m AP)相较于原模型分别提高了4.5和1.9个百分点,优于其他对比目标检测算法,可为小麦病害检测无人机等移动端检测装备的部署和应用提供参考。

17-DMAG对PD-1人源化小鼠肝癌移植瘤的抑制作用

目的 探讨17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对PD-1人源化小鼠人肝癌移植肿瘤生长的抑制作用。方法 选取30只PD-1人源化小鼠,将HepG2细胞悬液注射于小鼠右侧腹股沟皮下组织,构建人肝癌移植瘤模型;将荷瘤人源化小鼠随机分为3组(每组10只):(1)模型组(注射生理盐水10 mg/kg);(2)17-DMAG组(按25 mg/kg腹腔注射17-DMAG,3次/周);(3)顺铂组(腹腔注射20 mg/kg, 2次/周),实验持续4周。注射结束后测量人源化小鼠移植瘤的长、短径计算体积,测量肿瘤质量计算抑瘤率,同时采用免疫组化方法检测肿瘤组织中CD31(以阳性细胞数计算肿瘤微血管密度(MVD))及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果 17-DMAG组和顺铂组的肿瘤体积和质量均较模型组显著减小(P<0.05),17-DMAG组的抑瘤率略高于顺铂组,但17-DMAG组和顺铂组肿瘤质量和体积以及抑瘤率均不存在显著性差异。17-DMAG组和顺铂组MVD标记微血管数量及VEGF表达均低于模型组(P<0.05),且17-DMAG组又低于顺铂组(P<0.05)。结论 17-DMAG可显著降低肝癌移植瘤中VEGF的表达,抑制新生血管在肿瘤中发生发展,从而对人源化小鼠肝癌移植瘤发挥抑制作用。

黄芪下瘀血汤合方对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的干预作用及机制

目的基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路探讨黄芪汤和下瘀血汤合方(黄芪下瘀血汤)对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的干预作用及其可能机制。方法取6周龄C57BL/6小鼠75只,随机选择15只作为正常组,其余小鼠腹腔注射15%四氯化碳橄榄油溶液(2 mL/kg体重,每周3次)造模。1周后,将造模小鼠随机分为模型组、黄芪汤组、下瘀血汤组和黄芪下瘀血汤组,每组15只。各用药组继续予四氯化碳造模的同时,每天给予相应药物进行灌胃,正常组和模型组灌胃等剂量双蒸水,连续灌胃5周。6周末处死各组小鼠,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,HE染色和天狼猩红染色观察肝组织炎症和胶原沉积情况,试剂盒检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法检测肝组织中胶原增生标志物层连蛋白(FN)、I型胶原(Col I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达情况。结果黄芪汤、下瘀血汤、黄芪下瘀血汤均可明显降低肝纤维化模型小鼠肝功能和血清炎性细胞因子水平,上调肝组织SOD活性,降低MDA、Hyp含量,改善肝组织炎性损伤和胶原沉积,下调肝组织FN、Col I和α-SMA蛋白表达水平,且黄芪下瘀血汤较单用黄芪汤和下瘀血汤组有进一步增强的作用,尤其以肝组织胶原沉积和Hyp更为显著,差异均有统计学意义(P均<0.05)。黄芪下瘀血汤可下调肝组织NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达水平。结论黄芪下瘀血汤可有效改善四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠的肝功能,减轻肝组织炎症,减少胶原纤维沉积,且防治肝纤维化的作用强于黄芪汤和下瘀血汤,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路、抑制炎症及氧化应激反应有关。

可视化小角度微调技术研究

涡轮叶片加工时由于零件毛坯定位精度不高,夹具定位不准,本文经过研究,研制了一套基于静压技术的可视化小角度微调装置,测试结果表明,该装置成功实现工装角度的可视化快速可调,并达到0.1˚调整精度的目标,显著降低了加工准备时间,提高了涡轮叶片的机加工质量和加工效率。

基于NOX5-ERK1/2信号通路探讨健脾祛痰化瘀方对动脉粥样硬化小型猪炎症反应的影响

目的 观察健脾祛痰化瘀方对动脉粥样硬化(AS)小型猪氧化应激和炎症反应的影响,基于NOX5-ERK1/2信号通路探讨其作用机制。方法 将12只巴马小型猪随机分为对照组、模型组和健脾祛痰化瘀方低、高剂量组,每组3只。采用高脂饮食饲养24周构建动脉粥样硬化模型,给药组同时在饲料中添加健脾祛痰化瘀方。分别于给药0、16、24周检测小型猪一般体征(体长、腹围、体质量、食物摄入量和粪便含水量),HE染色观察主动脉形态,油红O染色观察主动脉和心肌组织脂质沉积,透射电镜观察胸主动脉组织超微结构,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,ELISA检测血清活性氧(ROS)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量,Western blot检测主动脉组织NADPH氧化酶5(NOX5)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、VCAM-1、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组小型猪16、24周腹围、体质量、食物摄入量增加(P<0.01),主动脉内膜明显增厚,内皮细胞破坏,脂质沉积,平滑肌细胞水肿,线粒体肿胀明显,血清TC、LDL-C含量及ROS、IL-6、IL-10、TNF-α、hs-CRP、VCAM-1、ICAM-1含量升高,HDL-C含量降低(P<0.01);主动脉组织NOX5、p-ERK1/2、VCAM-1、PCNA蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,健脾祛痰化瘀方低、高剂量组16、24周腹围、体质量、食物摄入量减少(P<0.05,P<0.01),斑块面积和脂质沉积减少,内皮细胞破坏减轻,血清TC、LDL-C含量及ROS、IL-6、IL-10、TNF-α、hs-CRP、VCAM-1、ICAM-1含量降低,HDL-C含量升高(P<0.01,P<0.05);主动脉组织NOX5、p-ERK1/2、VCAM-1、PCNA蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论 健脾祛痰化瘀方可减轻小型猪AS,其机制可能与抑制NOX5-ERK1/2信号通路激活、减轻氧化应激诱导的炎症反应有关。

基于PD-1/PD-L1信号通路探讨麦门冬汤对特发性肺纤维化小鼠的影响

目的探讨麦门冬汤对博来霉素(BLM)诱导的特发性肺纤维化(IPF)小鼠的影响,并探究其对免疫调控的作用。方法气管滴注BLM建立IPF小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、吡非尼酮组(0.3 g/kg)及麦门冬汤高、中、低剂量组(18、9、4.5 g/kg)。采用HE和Masson染色、ELISA法、流式细胞术和免疫组织化学法检测小鼠肺组织病理变化、Collagen I、HYP及TGF-β1水平、血浆中PD-1^(+)CD4^(+)T细胞比例、肺组织p-STAT3、PD-1、PD-L1和IL-17A表达。结果与对照组比较,模型组小鼠肺系数升高(P<0.01),肺组织中大量炎性细胞浸润、胶原纤维沉积,肺纤维化评分升高(P<0.01),Collagen I、HYP、TGF-β1水平增加(P<0.01),血浆中PD-1^(+)CD4^(+)T细胞比例增加(P<0.01),肺组织p-STAT3、PD-1、PD-L1、IL-17A表达升高(P<0.01);与模型组比较,麦门冬汤组小鼠肺系数降低(P<0.05),肺组织炎性细胞浸润和胶原纤维沉积减少,肺纤维化评分降低(P<0.05),Collagen I、HYP、TGF-β1水平减少(P<0.05),血浆中PD-1^(+)CD4^(+)T细胞比例减少(P<0.05),肺组织p-STAT3、PD-1、PD-L1、IL-17A表达降低(P<0.05)。结论麦门冬汤可减少细胞外基质(ECM)沉积,延缓IPF进程,其机制可能与抑制STAT3/PD-1/PD-L1免疫调控信号通路有关。

灵芝提取物通过Nrf2/ARE通路对肝硬化小鼠肝功能的保护作用研究

[目的]探讨灵芝提取物(ganoderma lucidum extract,GLE)对肝硬化小鼠的肝保护作用及机制。[方法]将10只雄性C57BL/6小鼠作为对照组,剩余40只小鼠采用四氯化碳橄榄油混悬液诱导肝硬化模型,并随机分为模型组和GLE低(50 mg/kg·d)、中(100 mg/kg·d)、高(200 mg/kg·d)剂量组,对照组及模型组均灌胃等量0.9%氯化钠溶液。计算肝脏指数;以全自动生化分析仪检测小鼠血清中谷氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)活性和总胆固醇(total cholesterol,TC)、总胆红素(total bilirubin,TB)和肌酐(creatinine,Cr)水平;以苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察肝组织病理学变化,Masson染色观察肝组织纤维化程度;以脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色观察肝细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;免疫印迹法检测肝组织中总核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)和核Nrf2、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达情况。[结果]与对照组比较,模型组小鼠肝损伤明显,肝脏指数,血清ALT、AST活性,TC、TB及Cr水平,肝纤维化程度,肝细胞凋亡指数,血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平,α-SMA及CollagenⅠ蛋白相对表达量升高(P<0.05),血清SOD和GSH-Px活性、肝组织总Nrf2和核Nrf2、HO-1、NQO1及E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,GLE低、中、高剂量组小鼠肝损伤逐步减轻,肝脏指数,血清ALT、AST活性,TC、TB及Cr水平,肝纤维化程度,肝细胞凋亡指数,血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平,α-SMA及CollagenⅠ蛋白表达降低(P<0.05),血清SOD和GSH-Px活性、肝组织总Nrf2和核Nrf2、HO-1、NQO1及E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。[结论]GLE可减轻肝硬化小鼠组织病理损伤,改善肝功能,这可能与激活Nrf2/ARE通路,抑制氧化应激和炎症反应,进而干预肝纤维化有关。

心肌梗死后心肌纤维化小鼠心肌线粒体功能和能量代谢重塑相关性的转录组学分析

目的探究心肌梗死小鼠心肌纤维化过程中线粒体呼吸功能的变化,阐述其与糖酵解通量增加的相关性。方法选取40只C57BL/6N小鼠,随机分为实验组(心肌梗死组)和对照组(假手术组),20只/组。实验组采用结扎冠状动脉左前降支的方法构建小鼠心肌梗死模型,对照组除不对左前降支进行结扎外,其他操作均与实验组相同。选取心肌梗死后28d和假手术组小鼠各5只进行安乐死取材,取左心室组织样本进行转录组学测序,采用FPKM法计算基因表达量,寻找差异表达基因。并通过GO和KEGG数据库对差异基因进行富集分析,寻找影响疾病进程的相关通路。通过绘制热图,展示富集分析中显示的通路和相关基因的表达差异,并对体外培养的小鼠原代CFs通过促纤维化激动剂TGF-β1或溶剂对照干预,通过Seahorse实验检测其线粒体呼吸和糖酵解水平。结果通过心脏大体图和心脏超声验证心梗模型构建成功,心肌梗死组舒张期左心室内径增加(P<0.05),收缩期左心室内径增加更为显著(P<0.001),左心室射血分数明显下降,差异有统计学意义(P<0.0001)。与假手术组相比,心肌梗死组上调基因124个,下调基因106个。GO和KEGG富集分析显示差异表达基因显著富集在脂肪酸代谢、细胞器等代谢通路和线粒体中。基因表达热图显示脂肪酸β氧化和线粒体功能障碍,相反糖酵解水平增加。Seahorse实验中,与溶剂对照组(Vehicle组)相比,TGF-β1干预组心肌成纤维细胞基础和最大呼吸水平明显降低,基础和最大糖酵解水平升高,差异均有统计学意义(P<0.0001)。结论在心肌纤维化过程中,心肌成纤维细胞能量代谢重塑,线粒体功能下降,相反更倾向于通过糖酵解产生能量。

棉皮素在四氯化碳诱导的既存肝纤维化小鼠中的作用研究

目的 探讨天然类黄酮棉皮素对四氯化碳(CCl_(4))诱导的肝纤维化模型小鼠的作用。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl_(4)组和CCl_(4)+棉皮素组,每组6只。除对照组外,其余两组均采用20%CCl_(4)橄榄油溶液(0.75 μL/g, 2次/周,持续6周)腹腔注射,建立肝纤维化模型。CCl_(4)+棉皮素组于造模第6周开始每天腹腔注射棉皮素(10 mg/kg)进行干预,对照组与CCl_(4)组小鼠同一时间注射等体积的PBS溶液。末次给药24 h内,3组均取新鲜肝脏组织,并灌注固定制备石蜡切片;采用HE染色与Masson染色观察3组肝脏组织病理改变;免疫组化染色检测3组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase3)的表达情况;同时采用蛋白质印迹技术检测α-SMA表达情况。结果 与对照组相比,CCl_(4)组肝脏结构破坏,胶原纤维明显增生,形成纤维间隔,α-SMA、Caspase3、Cleaved Caspase3的蛋白表达水平升高(P<0.05),CCl_(4)+棉皮素组胶原纤维沉积减少,α-SMA、Caspase3的蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 天然类黄酮棉皮素可减少CCl_(4)诱导的肝纤维化模型小鼠胶原纤维沉积、肝星状细胞激活和细胞凋亡,对肝脏起保护作用。

丹龙口服液对肺间质纤维化小鼠肺组织病变的影响

[目的]观察中成药丹龙口服液对小鼠肺间质纤维化的影响,并对比其与西药吡非尼酮作用效果的差异,探讨丹龙口服液干预肺间质纤维化疗效及可能存在的机制。[方法]通过博来霉素鼻腔滴入法建立肺间质纤维化昆明小鼠模型,造模14 d后开始灌胃给药,治疗28 d。观察小鼠一般情况、肺功能、肺组织形态学染色、羟脯氨酸(HYP)及促纤维化因子水平等。[结果]丹龙口服液在各指标中均可与吡非尼酮治疗肺间质纤维化呈现相似或更佳水平。在体质量变化及一般情况中中成药较西药治疗更佳,肺功能水平中成药与西药改善情况相似;苏木精-伊红(HE)染色结果显示中成药与西药减轻肺泡炎症结果相似;Masson染色显示西药较中成药更佳;在肺组织HYP及血清、肺泡灌洗液中促纤维化因子表达水平中,两组呈现相似水平。[结论]丹龙口服液可以对防治小鼠肺间质纤维化中起到一定的作用,其作用与抑制肺组织炎症及降低促纤维化因子水平相关。

扶正化瘀方对肝硬化小鼠模型肝细胞消亡与再生的影响

目的探讨扶正化瘀方对纤维化肝脏肝细胞消亡与再生的影响,及其药物促进肝细胞再生的作用机制。方法以CCl4腹腔注射6周诱导建立肝硬化小鼠模型。正常对照组9只,模型组10只,索拉非尼组10只,扶正化瘀方组10只。自造模第4周起,扶正化瘀方组、索拉非尼组分别给予4.8 g/kg、4 mg/kg小鼠体质量相应药物灌胃,连续3周;正常组和模型组给予等体积羧甲基纤维素钠。检测血清肝功能;METAVIR评分系统评价肝组织炎症及纤维化分期;天狼星红染色和肝组织羟脯氨酸含量评价胶原沉积量;免疫组化检测Ⅳ型胶原、CD31与CD32b、Ki67、CyclinD1、谷氨酰胺合成酶(GS)、Wnt2以及HGF蛋白的表达;Western Blot检测肝组织Wnt2、LRP6、β-catenin、p-β-catenin、CyclinD1表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与模型组比较,扶正化瘀方组和索拉非尼组血清ALT、AST水平和肝组织羟脯氨酸含量均降低(P值均<0.01),METAVIR评分减低(P值均<0.05);Ⅳ型胶原、CD31表达减少(P值均<0.05),CD32b表达增加(P<0.01);肝组织实质病变消亡数量减少,Ki67、CyclinD1表达上升(P值均<0.01);Wnt2、LRP6、β-catenin、CyclinD1蛋白表达水平上调、p-β-catenin表达显著下调(P值均<0.05);肝组织CD32b与Wnt2共染阳性细胞显著增多。结论扶正化瘀方可通过抑制肝窦毛细血管化,改善肝窦内皮细胞Wnt2外分泌功能,激活肝细胞再生相关Wnt/β-catenin信号通路,最终逆转肝硬化。

扶正化纤方调控PI3K/AKT/BAD信号通路对肝纤维化小鼠的作用及机制

目的基于PI3K/AKT/BAD信号通路探讨扶正化纤方对肝纤维化小鼠的作用及机制。方法采用腹腔注射20%四氯化碳-橄榄油溶液0.2 mL,每周3次,连续4周,复制肝纤维化小鼠模型。将C57B/L雄性小鼠随机分为正常组、模型组、安络化纤丸组(0.78 g·kg^(-1))以及扶正化纤方低、中、高剂量组(3.1、6.2、12.4 g·kg^(-1)),每组6只。灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,持续4周。使用小动物超声仪检测肝脏弹性值;HE、Masson、天狼星红染色法观察小鼠肝脏组织病理变化;ELISA法检测血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(P-ⅢC)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平;qRT-PCR及Western Blot法检测肝脏组织中AKT、BAD、Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白表达;免疫荧光法检测肝脏组织中α-SMA表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠的体质量、肝质量明显降低(P<0.05,P<0.01);肝脏弹性值显著升高(P<0.01);胶原纤维面积占比显著升高(P<0.01);血清HA、LN、P-ⅢC、Ⅳ-C水平均显著升高(P<0.01);肝脏组织α-SMA阳性表达面积占比显著升高(P<0.01),AKT、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01),BAD、Bax mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠的体质量、肝质量均明显升高(P<0.05,P<0.01);肝脏弹性值均显著降低(P<0.01);胶原纤维面积占比均显著降低(P<0.05,P<0.01);血清HA、LN、P-ⅢC、IV-C水平均显著下降(P<0.01);肝脏组织α-SMA阳性表达面积占比显著降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01),AKT蛋白表达显著下调(P<0.01),BAD、Bax mRNA表达显著上调(P<0.01)。扶正化纤方中、高剂量组小鼠肝脏组织中AKT mRNA表达显著下调(P<0.01),Bax蛋白表达显著上调(P<0.01);扶正化纤方低、高剂量组小鼠肝脏组织中BAD蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论扶正化纤方可能通过PI3K/AKT/BAD信号通路调控下游Bcl-2、Bax蛋白表达,促进活化肝星状细胞(HSC)凋亡,减少细胞外基质(ECM)及胶原纤维合成,从而改善四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠肝内纤维间质沉积。

人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对肝纤维化小鼠模型的治疗作用及其机制分析

目的 探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制。方法 选取18只SPF级6周龄C57BL/6小鼠,使用随机数字表法随机分为3组,分别为对照组、CCl_(4)模型组(CCl_(4)组)和h UC-MSC治疗组(MSC组),每组6只。CCl_(4)组和MSC组腹腔注射CCl_(4)溶液构建小鼠肝纤维化模型,对照组同时注射相同剂量玉米油,MSC组在注射CCl_(4)的过程经尾静脉注射hUC-MSC。于第8周末采取小鼠血清,处死小鼠,取小鼠肝脏固定。使用酶联免疫吸附法测定炎症因子水平,自动生化检测仪检测肝功能相关指标,HE染色、Masson染色、天狼星红染色及α-SMA免疫荧光用于评估肝纤维化情况;TGF-β刺激的肝星状细胞(HSC)分别在有无几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)添加的培养基中与hUC-MSC共培养,Western Blot试验检测蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Dunnett-t检验。结果 Masson染色、天狼星红染色提示CCl_(4)组小鼠纤维化较对照组明显(P值均<0.05),MSC组小鼠纤维化较CCl_(4)组减轻(P值均<0.05)。CCl_(4)组IL-1β、IL-6、AST、ALT和ALP水平较对照组明显升高(P值均<0.05),MSC组IL-6、AST、ALT及ALP水平较CCl_(4)组明显降低(P值均<0.05)。CCl_(4)组CHI3L1和α-SMA的表达均高于对照组和MSC组(P值均<0.05)。细胞培养实验显示,MSC+HSC组Bax表达高于HSC组和MSC+CHI3L1组(P值均<0.05),提示CHI3L1逆转了MSC对活化的HSC的促凋亡作用。结论 hUC-MSC治疗可以改善小鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制CHI3L1从而促进HSC的凋亡相关。

菊粉、复合菊粉膳食纤维对肺纤维化小鼠炎症损伤、氧化应激及肠道菌群的影响

为探讨菊粉或复合菊粉膳食纤维对肺纤维化小鼠炎症损伤、氧化应激和肠道菌群的影响。雄性C57BL/6小鼠随机分为正常(NC)组、模型(MC)组、菊粉(IN)组、复合菊粉(CIN)组和吡非尼酮(PFD)组。采用气管注射博来霉素的方式建立肺纤维化小鼠模型,NC组和MC组灌胃生理盐水,IN组灌胃5.00 g/kg菊粉,CIN组灌胃5.00 g/kg复合菊粉,PFD组灌胃300.00 mg/kg吡非尼酮。28 d后,为评估菊粉、复合菊粉对肺纤维化小鼠生理生化和肠道菌群结构的影响,对肺组织病理学、炎症因子、氧化应激和肠道菌群进行分析。结果表明,与MC组相比,菊粉、复合菊粉可以降低肺组织炎性细胞浸润和纤维增生;显著降低炎症因子肿瘤坏死因子-α、白介素-6和白介素-1 β水平(p<0.05);增强总抗氧化能力和提高超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛水平;改善肠道菌群紊乱,促进杜氏杆菌属(Dubosiella)、norank_f__Muribaculaceae和阿克曼氏菌属(Akkermansia)增殖,抑制瓦伦斯回肠杆菌属(Lleibaterium)增殖。综上,菊粉或复合菊粉膳食纤维可以改善肺纤维化小鼠炎症损伤和氧化应激,调节肠道菌群紊乱。