化橘红水提物对酒精诱导的急性肝损伤保护作用

目的:探究化橘红水提物对酒精诱导急性肝损伤小鼠的药效学作用,为化橘红解酒保肝作用的开发应用提供数据支撑。方法:利用高效液相色谱法(HPLC)确定化橘红水提物的主要成分。根据体质量将60只Balb/c小鼠随机分为6个组:正常组、模型组、化橘红提取物低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0 g·kg^(-1))及海王金樽片组(2.0 g·kg^(-1))。正常组及模型组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。每天灌胃给药1次,连续给药14 d。给药结束前1 d,小鼠禁食不禁水12 h,除正常组外其他各组按体质量灌胃56°白酒(13 mL·kg^(-1)),2 h后摘眼球取血。解剖获得肝脏,称其湿重。全自动生化仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及乙醇脱氢酶(ADH)的表达水平;苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠肝脏组织病理变化;原位末端标记法(TUNEL)/DAB双染法观察阳性细胞数的比例判断细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白表达情况。结果:化橘红水提物HPLC特征图谱显示主要成分是野漆树苷和柚皮苷。与正常组比较,模型组小鼠肝体比显著增加(P<0.01),肝脏损伤酶ALT和AST的表达明显增加(P<0.05,P<0.01),乙醇脱氢酶(ADH)表达水平明显降低(P<0.05),肝小叶结构显模糊,肝组织呈现不同程度的病理改变,细胞胞浆显著疏松、水肿,脂肪变性较严重,TUNEL阳性率显著增加(P<0.01),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达显著降低(P<0.01),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和胱天蛋白酶-3(Caspase-3)显著升高(P<0.01)。与模型组比较,化橘红水提物中剂量组能明显降低肝体比(P<0.05),化橘红水提物各剂量组能明显降低小鼠血清中ALT、AST活性(P<0.05,P<0.01),且能明显上调ADH的表达水平(P<0.05),能够明显改善由酒精引起的细胞胞浆疏松、水肿、脂肪变性的病理特征,明显降低肝细胞TUNEL阳性率(P<0.05,P<0.01),提升抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05),降低促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平(P<0.01)。结论:化橘红水提物通过调节ALT、AST、ADH的表达水平、改善肝脏脂肪病变和肝细胞凋亡,保护急性肝损伤。