化湿润睛汤通过调控NF-κB信号通路抑制炎症缓解去势大鼠干眼病

目的评价化湿润睛汤对去势干眼病模型大鼠的疗效,并从NF-κB信号通路研究其可能的抗炎机制。方法将75只6周龄健康雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、阳性药物治疗组、化湿润睛汤治疗组,共5组,每组15只。正常组不做任何处理;假手术组只切开腹腔而不切除睾丸及附睾;模型组、阳性药物治疗组、化湿润睛汤治疗组这3组实验大鼠切开腹腔并切除双侧睾丸及附睾。建立去势雄性大鼠干眼模型1周后,对各组大鼠分别通过角膜荧光素染色(fluorescein staining,FL)、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、泪液分泌试验(Schirmer I-test,SIT)检测进行干眼模型评估,待各组实验大鼠伤口基本愈合之后开始用药。用药4周后通过FL、BUT、SIT检测对各组实验大鼠进行药效学评价;通过放射免疫的方法测定各组实验大鼠血清睾酮水平;通过ELISA法检测各组实验大鼠血清中TNFα、IL-1α和IL-6水平;通过HE染色观察各组实验大鼠泪腺组织中病理形态学改变情况;通过免疫组化和Western blot检测各组实验大鼠泪腺组织中NF-κB信号通路主要因子(IKKα、IKKβ、IκB、NF-κB-p65)蛋白质表达的改变。结果(1)FL、BUT、SIT的检测结果表明,化湿润睛汤治疗后改善了去势干眼病大鼠的角膜荧光素染色情况,延长其内膜破裂时间及增加泪液分泌量;(2)放射免疫法检测结果表明,化湿润睛汤治疗后增加了去势干眼病大鼠血清中的睾酮质量浓度;(3)ELISA法检测结果表明,化湿润睛汤治疗后降低了去势干眼病大鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-1α和IL-6水平;(4)HE泪腺染色结果表明,化湿润睛汤治疗后改善了去势干眼病大鼠泪腺组织中腺泡萎缩程度,增加了胞质内酶原颗粒的数量;(5)免疫组化和WB检测结果表明,化湿润睛汤治疗后降低了去势干眼病大鼠泪腺组织中NF-κB信号通路主要因子IKKα、IKKβ、IκB、NF-κB-p65的蛋白表达水平。结论化湿润睛汤可能通过抑制泪腺组织NF-κB信号通路,减少炎症因子的表达,进而缓解去势大鼠干眼病的炎症反应。

化湿润睛汤通过调控COX-2、TNF-α和IL-6蛋白改善去势雄性干眼病大鼠的炎症反应

目的观察化湿润睛汤是否能抑制去势雄性干眼病大鼠的炎症反应,并探讨其潜在的作用机制。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组15只、阴性对照组15只、阳性对照组15只、化湿润睛汤治疗组15只。假手术组大鼠只切开腹腔而不切除两侧睾丸及附睾;阴性对照组、阳性对照组、化湿润睛汤治疗组大鼠切开腹腔并切除两侧睾丸及附睾。建模1周后用角膜荧光素染色(fluorescein staining,FL)、泪膜破裂时间(break-up time,BUT)、泪液分泌试验(schirmer I-test,SIT)检测方法验证模型。待实验大鼠伤口基本愈合之后开始予以相应的药物干预。用药8周后分别采用FL法、BUT法和SIT法检测各组大鼠角膜破损程度、泪膜破裂时间和泪液分泌量;ELISA法观察各组大鼠血清中COX-2、TNF-α、IL-6水平;HE染色观察各组大鼠泪腺组织中病理形态学改变情况;免疫组化和Western blot法观察各组大鼠泪腺组织中炎症因子COX-2、TNF-α和IL-6蛋白表达的改变。结果与假手术组比较,阴性对照组、阳性对照组、化湿润睛汤治疗组大鼠角膜荧光素钠阳性染色面积增加,FL评分增高,泪膜破裂时间缩短以及泪液分泌量减少,血清COX-2、TNF-α、IL-6水平升高,泪腺组织腺泡萎缩变小、形状不规则、结构紊乱、胞质内酶原颗粒减少,并见大量炎性细胞浸润,泪腺组织中炎症因子COX-2、TNF-α和IL-6蛋白表达水平增加(P<0.05);与阴性对照组比较,化湿润睛汤治疗组大鼠荧光素钠阳性染色面积减少、FL评分降低、泪膜破裂时间延长以及泪液分泌量增多,血清COX-2、TNF-α和IL-6水平降低,泪腺组织腺泡萎缩程度减轻,形状较为规则,结构较为清晰,胞质内酶原颗粒数量增加,炎性细胞浸润面积减少,泪腺组织中COX-2、TNF-α和IL-6蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论化湿润睛汤可降低去势雄性干眼病大鼠泪腺组织中炎症因子COX-2、TNF-α和IL-6的蛋白表达,减轻其炎症反应。