左归丸对化疗源性卵巢早衰小鼠卵母细胞影响的实验研究

目的研究左归丸对化疗源性卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠卵母细胞以及其体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)和体外受精实验(In vitro fertilization,IVF)结局的影响。方法以环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)建立化疗源性POF小鼠动物模型。提取各组生发泡(germinal vesicle,GV)期未成熟裸卵(denuded oocytes,DOs)及MII期卵母细胞分别进行IVM和IVF实验。观察左归丸对模型组小鼠DOs和MII期卵母细胞数量的影响、对IVM实验时生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的影响及对IVF实验时2-细胞率和囊胚率的影响。使用激光扫描共聚焦显微镜观察各组IVM14h时MII期卵母细胞纺锤体和染色体形态。结果左归丸能增加化疗源性POF小鼠GV期DOs和MII期卵母细胞数量、显著提高模型组IVM实验的GVBD率和PB1排出率、显著提升模型组IVF实验的2-细胞率和囊胚率及纠正CTX引起的MII期卵母细胞纺锤体形成异常。结论左归丸可改善卵母细胞数量和质量,从而促进体外胚胎发育,对化疗源性POF小鼠起到一定治疗作用。

胎盘间充质干细胞治疗卵巢早衰的机制

胎盘间充质干细胞(PMSC)是一种新型种子细胞,具有强大的自我复制能力和多向分化潜能,为临床多种难治性疾病的治疗带来了希望。卵巢早衰的高发病率严重影响育龄期女性的身心健康,其发病原因主要与自身免疫性疾病和化疗药物有关,其发病机制尚不清晰,临床上现有的治疗手段大多为激素疗法,以改善患者症状为主,并没有从根本上解决卵巢受损的问题。随着对PMSC研究的深入,众多学者对PMSC治疗卵巢早衰表现出了极大的兴趣,PMSC治疗卵巢早衰的机制可能与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路、肌醇需求酶1α信号通路、沉默信息调节因子1/过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α/核因子E2相关因子2信号通路和线粒体氧化应激通路密切相关。

miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景:骨髓间充质干细胞移植后凋亡成为治疗化疗性卵巢早衰效果欠佳的主要原因。miR-21参与细胞增殖与凋亡的调控,有重要的抗凋亡作用。目的:构建miR-21慢病毒载体并感染骨髓间充质干细胞,观察其对化疗药物磷酰胺氮芥诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法:构建携带miR-21基因慢病毒表达载体LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,双酶切及基因测序鉴定证实载体构建成功。对载体进行包装、测定病毒滴度。将慢病毒颗粒以不同感染复数(20和40)感染骨髓间充质干细胞,检测感染效率,使用real-time PCR法检测骨髓间充质干细胞中miR-21的表达。流式细胞仪、Hoechst33342染色检测骨髓间充质干细胞在磷酰胺氮芥模拟的化疗微环境中的凋亡率。结果与结论:(1)成功构建miR-21慢病毒载体,病毒滴度约为6×10^(11) CFU/L;(2)载体转染骨髓间充质干细胞效率达90%以上;(3)miR-21组1(感染复数为20)、miR-21组2(感染复数为40)miR-21表达量明显高于骨髓间充质干细胞组及空载组(P=0.000);(4)转染组骨髓间充质干细胞的凋亡率、凋亡指数均低于空载组及骨髓间充质干细胞组(P=0.001);(5)实验成功构建大鼠miR-21慢病毒载体系统,miR-21上调能抑制骨髓间充质干细胞凋亡,促进细胞增殖。