RNA干扰沉默IQGAP1表达可提高食管鳞癌细胞KYSE150对顺铂的化疗敏感度

目的研究具有IQ结构域的GTP激酶活化蛋白1基因(IQGAP1)对食管癌细胞KYSE150化疗敏感度的影响及其相关作用机制。方法构建针对IQGAP1基因的小干扰RNA(si RNA)并转染至食管鳞癌细胞株KYSE150,采用MTT法观察KYSE150细胞对化疗药物顺铂敏感度的改变;流式细胞技术检测IQGAP1基因沉默前后顺铂对KYSE150细胞周期分布及凋亡的影响;Western blot检测细胞转染前后转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平变化。结果转染si RNA可显著下调KYSE150细胞中的IQGAP1 m RNA和蛋白表达水平;经(1、5、10、20)μmol/L顺铂处理细胞24 h后,干扰组(IQGAP1-si RNA)的细胞生存率均较对照组发生明显下降(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示干扰组在顺铂处理后G_0/G_1期细胞比例和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05);Western blot结果显示IQGAP1基因沉默后,Nrf2和MRP1蛋白表达下调。结论沉默IQGAP1基因可有效提高人食管鳞癌细胞株KYSE150对顺铂的化疗敏感度,该作用可能是通过下调Nrf2和MRP-1蛋白表达来实现的。

靶向CD24分子3E10增强肝癌HuH-7细胞的化疗敏感度

目的探讨靶向分子CD24单克隆抗体3E10调节肝癌HuH-7细胞对化疗药顺铂敏感度的作用及其分子机制。方法 Western blot和流式细胞术检测抗CD24抗体3E10的特异性;Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡;Real-time PCR和Western blot检测耐药基因和肿瘤干细胞特性基因的表达水平;Western blot检测JAK/STAT3和PI3K/AKT信号通路的活性水平。结果 3E10可有效识别CD24蛋白及HuH-7细胞。3E10显著增强HuH-7细胞对顺铂的敏感度(P<0.05),抑制率由(10.3±3.0)%提高至(34.4±10.8)%。3E10显著降低HuH-7细胞耐药基因ABCB1、ABCB5、ABCC1和肿瘤干性基因NANOG、CD24的表达水平及干性基因β-catenin的磷酸化水平(P<0.05)。3E10显著降低STAT3和AKT的磷酸化水平(P<0.05)。结论靶向CD24分子3E10通过降低HuH-7细胞的耐药性、肿瘤干性和JAK/STAT3、PI3K/AKT信号通路活性来增强HuH-7细胞对化疗药顺铂的敏感度。

乳腺癌相关基因(BRCA1)与新辅助化疗敏感度研究

目的探讨散发性乳腺癌基因BRCA1在乳腺癌组织中的表达与新辅助化疗敏感度的关系。方法应用免疫组化方法,对乳腺癌患者癌组织BRCA1表达情况进行检测,并用同一化疗方案(TEC)对该组患者进行新辅助化疗,分析其与新辅助化疗敏感度的关系。结果乳腺癌患者BRCA1表达阳性患者完全缓解率、部分缓解率、稳定率、进展率分别为24.6%、70.1%、5.2%、0;乳腺癌患者BRCA1表达阴性患者完全缓解率、部分缓解率、稳定率、进展率分别为9.2%、55.6%、31.5%、3.7%。两组相比各项指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BRCA1表达水平与新辅助化疗敏感度呈显著正相关,BRCA1可能作为一项预测化疗疗效、指导制定合理治疗方案的新指标。

抑制NFBD1表达对喉癌放化疗敏感度影响的研究

目的研究抑制NFBD1基因表达后,对喉癌细胞放化疗敏感度的影响。方法应用慢病毒感染RNA干扰(RNAi)技术稳定下调人喉癌细胞Hep-2中NFBD1基因的表达,采用实时定量聚合酶链反应(QRTPCR)技术及Western印迹技术检测NFBD1基因mRNA和蛋白的表达,以验证RNAi的有效性。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,采用MTT比色法观察抑制NFBD1基因表达后对喉癌细胞放化疗后生长的影响。TUNEL检测细胞的凋亡情况。结果 QRT-PCR及Western印迹分析表明,慢病毒感染RNAi技术在mRNA及蛋白水平均能高效、特异地抑制NFBD1基因的表达;TUNEL染色结果显示,转染NFBD1 siRNA的Hep-2细胞其凋亡率显著增加。流式细胞术结果显示,转染NFBD1 siRNA的Hep-2细胞在放疗后的凋亡率及G2/M期阻滞显著增加。MTT比色结果显示,转染NFBD1 siRNA的Hep-2细胞在放化疗后的细胞存活率显著降低。结论重组的慢病毒NFBD1 siRNA序列能有效抑制NFBD1基因的表达,从而增加喉癌细胞的放化疗敏感度。

靶向HER2基因shRNA对小鼠Lewis细胞化疗敏感度的影响

目的探讨靶向HER2基因shRNA对小鼠肺腺癌Lewis细胞化疗敏感度的影响。方法应用Lipofectamine 2000将pGPU6/RFP/Neo-erbB-2、pGPU6/RFP/Neo-shNC质粒表达载体快速转染小鼠肺腺癌Lewis细胞;应用RT-PCR、Western blot检测各组HER2 mRNA、蛋白的表达。应用流式细胞术检测未转染对照组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组、卡铂组、pGPU6/RFP/Neo-shNC+卡铂组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组的细胞凋亡率。结果 pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组HER2 mRNA和蛋白的水平均低于pGPU6/RFP/Neo-shNC组和未转染对照组。pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组细胞的凋亡率高于其余各组(P均<0.01)。结论 HER2 shRNA能增强小鼠Lewis细胞对卡铂的敏感度。

miR-148a靶向STAT3对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感度的增强作用

目的探究miR-148a对宫颈癌HeLa细胞顺铂化疗敏感度的影响及相关机制。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,设置顺铂浓度梯度检测IC20值;设置对照组、mimic对照组、miR-148a mimic组、inhibitor对照组和miR-148a inhibitor组,转染后使用qRT-PCR法检测miR-148a和STAT3 mRNA表达;4μmol/L顺铂处理后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分布,Western blot法检测p-STAT3/STAT3、CyclinD1、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果HeLa细胞的顺铂IC20约为4μmol/L。与mimic对照组相比,miR-148a mimic组HeLa细胞中miR-148a水平显著升高,STAT3 mRNA水平显著降低(P<0.05);与inhibitor对照组相比,miR-148a inhibitor组HeLa细胞中miR-148a水平显著降低,STAT3 mRNA水平显著升高(P<0.05)。顺铂处理后,与mimic对照组相比,miR-148a mimic组HeLa细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高,OD值、S期和G2/M期细胞比例及p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与inhibitor对照组相比,miR-148a inhibitor组HeLa细胞上述指标均朝相反的趋势显著变化(P<0.05)。结论miR-148a可通过靶向抑制STAT3增强宫颈癌HeLa细胞的顺铂化疗敏感度。

MR表观扩散系数预测鼻咽癌化疗敏感度的研究

目的:探讨MR表观扩散系数预测鼻咽癌化疗敏感度的价值。方法:选取本院2016年1月—2020年2月收治的176例在化疗前行MR(磁共振成像)表观扩散加权成像检查的鼻咽癌患者,按照化疗效果的差异性,将其中136例患者命名为甲组(化疗敏感),剩余40例患者命名为乙组(化疗抗拒)。对化疗敏感度与ADC(表观扩散系数)、病理分型以及T分期的相关性进行分析。结果:甲组和乙组的ADC值分别为(0.681±0.010)×10^(-3)mm^(2)/s和(0.620±0.003)×10^(-3)mm^(2)/s,其中非角化型分化型癌分别为34例和14例,非角化型未分化癌分别为102例和26例,两组ADC值差异显著(P<0.05),但病理分型并无显著差异(P>0.05),而在T_(1)、T_(2)、T_(3)、T_(4)上的分期存在显著差异(P<0.05)。结论:MR表观扩散系数可有效预测鼻咽癌化疗敏感度,同时还可以辅助病理分期的判定。

CD44^+/CD24^(-/low)在乳腺癌中的表达及其与含蒽环类药物化疗方案敏感度的关系

目的研究乳腺癌中CD44+/CD24-/low的表达及其与含蒽环类药物化疗方案敏感度的关系。方法 91例乳腺癌接受含蒽环类药物的术前新辅助化疗,2～4个疗程后进行效果评价;采用双染免疫组织化学方法检测化疗前后CD44+/CD24-/low的表达,t检验分析化疗前后CD44+/CD24-/low细胞比例的变化,χ2检验分析乳腺癌CD44+/CD24-/low表型与乳腺癌临床病理参数及化疗疗效的关系。结果乳腺癌中CD44+/CD24-/low阳性表达率为39.6%(36/91),在接受含蒽环类药物的新辅助化疗后乳腺癌中CD44+/CD24-/low细胞比例较化疗前明显增加(P=0.028)。CD44+/CD24-/low阳性组ER阳性率明显低于CD44+/CD24-/low阴性组(25.0%vs.47.3%,P=0.033)。三阴性乳腺癌中CD44+/CD24-/low阳性率明显高于非三阴性乳腺癌(61.9%vs.32.9%,P=0.017)。CD44+/CD24-/low表型与年龄、肿瘤大小、临床分期、病理类型、组织学分级等乳腺癌临床病理参数无明显关系(P>0.05)。CD44+/CD24-/low阳性组的总有效率高于CD44+/CD24-/low阴性组,但两组之间差异无统计学意义(75%vs.69.1%,P=0.542);CD44+/CD24-/low阳性组的病理完全缓解率明显高于CD44+/CD24-/low阴性组(38.9%vs.18.2%,P=0.028)。结论 CD44+/CD24-/low细胞仅存在于部分乳腺癌,CD44+/CD24-/low表型与ER(﹣)、三阴性乳腺癌相关,CD44+/CD24-/low表型与乳腺癌对含蒽环类药物化疗方案的敏感度相关,CD44+/CD24-/low表型可能成为乳腺癌临床化疗疗效的预测指标之一。

格尔德霉素在体内外增强人乳腺癌对阿霉素的敏感度

目的探讨新型抗肿瘤药物格尔德霉素(GA)联合阿霉素(ADM)治疗乳腺癌的机制。方法通过Western blot确定GA处理后AKT及HSP70表达变化,然后体外分别以GA/阿霉素(ADM)以及联合处理人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,在裸鼠模型体内检测GA联合ADM治疗后肿瘤大小变化并采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡变化。结果 GA处理MCF-7细胞后AKT明显下降,HSP70无明显改变,GA联合ADM后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,生存率为(51.90±6.80)%(P<0.01),凋亡明显增加,凋亡率为(42.97±4.10)%(P<0.05)。在裸鼠模型内肿瘤生长受到明显抑制,实验终点抑瘤率为(68.00±9.40)%(P<0.05),联合治疗明显增加瘤内肿瘤细胞的凋亡,凋亡率为(14.70±3.30)%(P<0.01)。结论 GA联合ADM能够显著增加ADM的治疗疗效,有望成为治疗乳腺癌的新型化疗联合方案。

miR-140—3p在人肺腺癌A549细胞顺铂化疗敏感性中的作用研究

目的 探讨miR-140-3p与人肺腺癌A549细胞顺铂药物敏感性的关系.方法 化学合成miR-140-3p mimics及inhibitor,脂质体2000介导其转染入人肺腺癌A549细胞,利用荧光定量PCR方法观察转染细胞中miR-140-3p表达水平的变化;噻唑蓝（MTT）法检测A549细胞对顺铂作用的敏感性.结果 转染miR-140-3p mimics/inhibitor可分别升高（约30%）或降低（约30%）人肺腺癌A549细胞中miR-140-3p表达;同时,与对照组相比,转染miR-140-3p inhibitor的人肺腺癌A549细胞对顺铂药物作用的敏感度显著增加,细胞增殖速率降低33%（P〈0.05）;而转染miR-140-3p mimics的A549细胞对顺铂药物作用的敏感度显著降低,细胞增殖速率升高32%（P〈0.05）.结论 miR-140-3p的表达水平与人肺腺癌A549细胞对顺铂药物的敏感度呈负相关,提示miR-140-3p可能在A549细胞顺铂耐药过程中发挥重要作用.

人脑胶质瘤原代细胞培养及体外药物敏感度的实验

目的探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,研究不同胶质瘤患者对抗肿瘤药物的敏感度。方法采用组织块培养法对39例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,用MTT法检测胶质瘤细胞对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)、威猛(teniposide,VM-26)和5-氟尿嘧啶(5-Fu)5种化疗药物的敏感度,并对其结果进行分析。结果脑胶质瘤细胞原代培养37例成功,2例失败,成功率94.9%;37例培养成功者药敏检测显示不同个体对不同抗肿瘤药物的抑制率存在明显差异,各药物的平均抑制率依次为VM-26>DDP>5-Fu>ADM>VCR,其敏感率分别为56.8%、51.4%、37.8%、24.3%和13.5%。结论体外胶质瘤细胞原代培养和MTT法检测化疗药物的敏感度是可行的,检测化疗药物敏感度对胶质瘤患者个体化的化疗具有一定价值。

DLL3表达与晚期小细胞肺癌含铂化疗疗效及预后的相关性

目的探讨Delta-like protein 3(DLL3)与晚期小细胞肺癌(SCLC)顺铂/依托泊苷(EP)方案化疗敏感度及预后的关系。方法选取64例明确诊断为Ⅲ/Ⅳ期的SCLC患者,采用免疫组织化学法检测DLL3在SCLC石蜡包埋组织中的表达情况;χ~2检验分析DLL3表达与化疗疗效的关系,Kaplan-Meier和Cox多因素分析DLL3表达及其他因素对晚期SCLC患者无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)的影响。结果在84.1%(54/64)的SCLC组织中可检测到DLL3表达,其表达与患者性别、年龄、吸烟史、分期无相关性(P>0.05)。DLL3高表达组的EP方案化疗有效率及疾病控制率均低于DLL3低表达组(P<0.05);DLL3低表达组的无进展生存期长于DLL3高表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox多因素分析结果显示DLL3表达、肿瘤分期、肿瘤直径是晚期SCLC患者PFS的独立预后因素,肿瘤分期是OS的独立预后因素。结论DLL3表达与晚期SCLC EP方案化疗反应率及PFS相关,可能成为预测化疗敏感度的生物标志物。DLL3表达对于晚期SCLC患者的远期预后无预测价值。

Smac过表达对人胰腺癌MiaPaCa-2细胞的化疗增敏作用

0引言 Smac是第二个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂,主要通过拮抗IAPs对caspase的抑制作用,参与线粒体凋亡通路和死亡受体凋亡通路,促进细胞凋亡。

miR-495对食管癌细胞株Eca109在不同放射剂量和顺铂浓度作用的影响及机制研究

目的探讨微小核糖核酸(microRNA,miR)-495对食管癌细胞株Eca109在不同放射剂量和顺铂浓度作用下的影响及机制。方法采用分次放疗递增法诱导建立放射抵抗型细胞株Eca109(Eca109-RAD)及分次顺铂递增法诱导建立顺铂耐药型细胞株Eca109(Eca109-DDP),实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-495在Eca109-RAD及Eca109-DDP细胞中的表达。Eca109-RAD及Eca109-DDP分为NC组和miR-495 mimic组,转染后qRT-PCR检测各组细胞中miR-495的表达,CCK8检测不同放射剂量对Eca109-RAD细胞和Eca109细胞存活能力的影响,及不同浓度的顺铂对Eca109-DDP细胞和Eca109细胞存活能力的影响,NC组和miR-495 mimic组经放射及顺铂处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,Western blot检测各组细胞中凋亡相关蛋白caspase 3,Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果与Eca109细胞(0.99±0.01)相比,Eca109-RAD细胞中miR-495的表达(0.48±0.03)及Eca109-DDP细胞中miR-495的表达(0.52±0.05)均降低,差异有统计学意义(t=27.930,15.970,均P=0.000)。与NC组细胞相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD细胞中miR-495的表达(4.82±0.48 vs 1.00±0.03)及Eca109-DDP细胞中miR-495的表达(5.68±0.54 vs 1.00±0.01)均显著增加,差异有统计学意义(t=13.760,15.100,均P=0.000)。与NC组相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD细胞对放疗敏感度增加,差异均有统计学意义(t=6.780~18.860,P=0.000~0.001);与NC组相比,miR-495 mimic组Eca109-DDP细胞对顺铂敏感度增加,差异均有统计学意义(t=7.510~21.630,均P=0.000)。经放射处理后,与NC组相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD细胞平板克隆形成能力(46.33±5.69个vs 93.33±4.51个)及Eca109-DDP(34.67±2.52个vs 89.00±4.03个)细胞平板克隆形成能力显著降低(t=11.210,19.800,均P=0.000)。经放射处理后,与NC组相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD细胞凋亡率(25.66%±2.41%vs 8.39%±0.82%)及Eca109-DDP细胞凋亡率(21.05%±5.37%vs 8.67%±1.15%)均显著增加(t=11.750,10.030,P=0.000,0.001)。经放射处理后,与NC组相比,miR-495 mimic组Eca109-RAD细胞及Eca109-DDP细胞中Bcl-2蛋白表达均降低(t=4.650,7.450,P=0.006,0.001),Bax和caspase 3蛋白的表达均增加(t=7.100~14.290,P=0.000~0.001)。结论MiR-495可能通过调控凋亡相关蛋白促进食管癌细胞放化疗敏感度。