化痰除湿祛瘀剂对人骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:研究化痰除湿祛瘀剂对人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡的影响。方法:(1)在苏州中医院骨伤科协助下,取因外伤急性截肢患者的软骨组织以及全膝关节置换手术OA患者的软骨组织,采用酶消化培养法培养人软骨细胞。采用甲苯胺蓝染色鉴定细胞来源,观察显微镜观察其形态变化。(2)将软骨细胞分成OA软骨细胞组、OA软骨细胞组+化痰除湿祛瘀剂(0.016、0.08、0.4、2、10 mg/mL)组,根据分组情况分别培养24 h或48 h后,应用MTT法比较各组细胞的增殖情况。(3)根据增殖结果将软骨细胞分成OA软骨细胞组、OA软骨细胞组+化痰除湿祛瘀剂(0.05、0.1、2 mg/mL)组,用原位末端标记法(TUNEL)检测各组细胞凋亡情况。结果:(1)成功建立了人骨关节炎软骨细胞有限细胞系,细胞生长状态良好;甲苯胺蓝证明所培养的细胞为来自中胚层的软骨细胞。(2)与对照组比较(24 h+),不同浓度的化痰除湿祛瘀剂对OA软骨细胞活力无影响。与对照组(OD值:0.393±0.010,λ=450 nm)比较(24 h+),化痰除湿祛瘀剂(1 mg/mL,OD值:0.441±0.009)和(2mg/mL,OD值:0.430±0.012)组可明显促进软骨细胞增殖(均P<0.001)。(3)OA软骨细胞经TUNEL标记后的结果显示,对照组的凋亡指数为(42.21±2.67)%,化痰除湿祛瘀剂(0.1 mg/mL,37.14%±4.01%;2 mg/mL,34.21%±5.00%)可明显抑制软骨细胞早期凋亡与对照组比较(P<0.05或P<0.01)。结论:化痰除湿祛瘀剂促进细胞增殖,抑制软骨细胞过度凋亡,这可能是抑制软骨破坏的重要机制之一。